材料和试剂

材料
PCR管（USA Scientific，目录号： AB1183）
Eppendorf 管（1.5 mL）（Sigma-Aldrich，目录号：T9661）
移液器吸头（10 μL、200 μL、1,000 μL）（Thomas Scientific，目录号：1158U43、1159M44、1158U40）
NanoTemper毛细管（ NanoTemper ，目录号：MO-K022）
Corning ® 96 孔半区透明平底聚苯乙烯高结合微孔板，无盖，非无菌（Sigma-Aldrich，目录号：CLS3690）
石蜡（CAS 号：8002-74-2）（Sigma-Aldrich，目录号：327204）

试剂
PBS 1 ×不含钙和镁（Corning 目录号：21-040-CV）
三（羟甲基）氨基甲烷（Tris，CAS 号：77-86-1）（Sigma-Aldrich，目录号：T1503）
氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）（Sigma-Aldrich，目录号：S7653）
氯化镁（MgCl 2 ，CAS 号：7786-30-3）（Sigma-Aldrich，目录号：M8266）
氯化钙（CaCl 2 ，CAS 号：10043-52-4）（Sigma-Aldrich，目录号：C4901）
Tween ® 20（CAS 号：9005-64-5）（Sigma-Aldrich，目录号：P1379）
牛血清白蛋白（BSA，CAS 号：9048-46-8）（Sigma-Aldrich，目录号：A7030）
乙酸钠（CH 3 COONa，CAS 号：127-09-3）（Sigma-Aldrich，目录号：S2889）
3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB，CAS 号：54827-17-7）（Sigma-Aldrich，目录号：860336）
100% 乙醇（CH 3 CH 2 OH，CAS 号：64-17-5）（Sigma-Aldrich，目录号：E7023）
30％过氧化氢（H 2 O 2 ，CAS号：7722-84-1）（Sigma-Aldrich，目录号：216763）
浓硫酸（H 2 SO 4 ，CAS 号：7664-93-9）（Sigma-Aldrich，目录号：339741）
辣根过氧化物酶-链霉亲和素（HRP-S）（Sigma-Aldrich，目录号：OR03L）
SARS-CoV-2、SARS-CoV-1 和 H1N5 假病毒由荣教授的实验室 (UIC) 在 PBS 缓冲液中提供（Guo等人， 2009 年； Wang等人， 2014 年； Peinetti 等人， 2021）。储备溶液的效价为 1 × 10 11拷贝/ mL。将储备溶液等分到每个含有 20 μL 的试管中，并保持在 -80 °C 。在每次实验之前，解冻新的等分试样。
SARS2-AR10 核酸适体 DNA（整合 DNA 技术）
FAM 标记：
5'/56-FAM/CCCGACCAGCCACCATCAGCAACTCTTCCGCGTCCATCCCTGCTG'3
生物素化：
5'/5Biosg/CCCGACCAGCCACCATCAGCAACTCTTCCGCGTCCATCCCTGCTG'3
SARS-CoV-2 假病毒（见食谱）
SELEX 缓冲液（见配方）
PBS-T（见食谱）
PBS-T-BSA（见食谱）
醋酸盐缓冲液（见配方）
停止解决方案（参见食谱）

设备

生物安全柜（Labconco Purifier Logic+ Class II，A2 型）
移液器（Eppendorf Reference ® 20、100、200、1,000）（Eppendorf，目录号：4920000032、4920000059、4920000067、4920000083）
Bio Tek H1 Synergy 混合阅读器 (Winooski, VT)
NanoTemper Monolith NT.115（ NanoTemper Technologies，慕尼黑，德国）

程序

酶联寡核苷酸测定法 (ELONA)
工作原则。
ELONA 的工作原理是测量一种酶的活性，这种酶仅在适体与靶标结合时才存在。
首先，目标病毒在具有高结合聚合物孔的 96 孔微孔板中孵育，使病毒通过非特异性结合粘附在孔中。
将生物素化的 DNA 适体添加到每个孔中，它与目标病毒结合，但不与其他病毒结合。过量或未结合的 DNA 会被冲走。
然后添加用链霉亲和素标记的报告酶以结合适体的生物素末端。然后，酶催化比色反应。颜色产物的量将与与适体结合事件相关的酶量成比例。
这里使用的酶是辣根过氧化物酶 (HRP)。
在 H 2 O 2存在下，HRP 会氧化 TMB，从而产生蓝色。
用 H 2 SO 4淬灭反应后，蓝色变为黄色，黄色的测得吸光度与 HRP 的量相关。
在生物安全柜中（此处的所有程序都需要在生物安全柜内），将 SELEX 缓冲液中的假病毒稀释至 5 × 10 8拷贝/mL。通过翻转试管混合。不要涡旋。在室温下在 96 孔微孔板（图 1.1A）的每个孔中孵育 50 μL 的假病毒 2 小时。在此期间，病毒将与井壁结合（图 1.1B）。在所有孵化步骤中，盘子都需要用封口膜覆盖。
注意：假病毒可以被强烈的机械力破坏。涡旋可能会破坏结构并使其对该实验无效。同样，混合的过量移液也可能是有问题的，但很难说有多少移液过多会影响稳定性。相反，我们建议尽可能使用更温和的混合方法。
用 PBS-T 缓冲液清洗每口井 3 次。
翻转板并将病毒溶液排入准备好的容器中，容器内装有漂白剂 (10% v/v)。尝试通过敲击尽可能多地去除液体。
注意：有很多方法可以从溶液中去除液体。我们建议翻转一桶 10% 的漂白剂，因为它的去污速度快且简单。例如，也可以将 96 孔板轻敲在吸收片上，但随后必须对吸收片进行净化并作为危险废物处理。任何类似的方法，包括移液，都是可以接受的；然而，将溶液翻转并轻敲到漂白的废物容器中是安全、快速、简单和有效的。
每口井加入 100 μL 缓冲液。
倒置废液桶，必要时用力敲击以去除所有溶液。
在每口井中加入 50 μL 的 PBS-T-BSA 缓冲液，在室温下孵育 1 小时，以避免非特异性结合以减少背景信号（图 1.1C）。
像以前一样用 PBS-T 洗涤 3 次。
准备 11 种不同生物素化 ssDNA 适体浓度的阵列。
连续稀释以制备浓度为 1 μM、500 nM、250 nM、100 nM、50 nM、25 nM、10 nM、2.5 nM、1 nM、0.25 nM、0.1 nM、0 nM 的 ssDNA 适体。每个溶液的总体积应足以为每个复制添加 40 μL ，再加上一点以考虑移液过程中的损失。在这种情况下，使用两种不同病毒条件（完整和紫外线灭活的伪病毒）的三个复制品，总共六个。为了有效地做到这一点，每个 DNA 溶液至少制作 240 μL 。
将 40 μL 不同浓度的 ssDNA 适配体添加到相应列的每个孔中（图 1.1D），并将 SELEX 缓冲液作为空白添加到第一列（考虑加载图 1.2 所示的板）。在室温下孵育 1 小时。
像以前一样用 PBS-T 洗涤 3 次。
在 PBS-T 缓冲液中加入 40 μL 新鲜制成的 1:500 HRP-S 稀释液到每个孔中。孵育 1 小时（图 1.1E）。
准备 TMB 解决方案。
TMB 原液（在实验过程中应始终保持新鲜）
将 5 mg TMB 溶解在 5 mL 的 100% 乙醇中。
TMB工作溶液（实验过程中应始终保持新鲜）
将 1 mL 的 TMB 库存溶液添加到 4 mL 的醋酸盐缓冲液中。
加入 3 μL 的 30% 过氧化氢。
像以前一样用 PBS-T 洗涤 3 次。
在每口井中加入 50 μL 的 TMB 工作溶液（图 1.1F）。
在黑暗中孵育，直到高浓度组的浅蓝色形成（大约 20 – 30 分钟）。
通过添加 10 μL 的终止溶液来淬灭反应。淬火后，蓝色产物在酸溶液中变成黄色（图 1.1G）。
BioTek酶标仪测量在 450 nm (OD 450 )处具有吸收峰的黄色产物（图 1.3）。

图1。酶联寡核苷酸测定 (ELONA) 的样品加载方案和示例。
1A) 96 孔微孔板的空孔。 1B) 添加假病毒（步骤 A2）。 1C) 添加 BSA 以阻断非特异性结合（步骤 A4）。 1D) 根据图 1.2 中的浓度添加生物素化适体（步骤 A6-7 ）。 1E) 添加抗生物素蛋白-HRP (步骤 A9)。 1F) 添加 TMB (步骤 A12)。 1G) 添加终止溶液（步骤 A14）。 2) 96 孔板的板布局。如布局所示，所有孔都含有相同数量的病毒，无论是 SARS-CoV-2 还是紫外线灭活的 SARS-CoV-2。方案中的浓度对应于生物素化的适体浓度。 3) 所用仪器的图片。

微尺度热泳（MST）
工作原则。
物理现象“热泳”描述了分子在温度梯度中的运动，这取决于它们的大小、电荷和水合壳。
MST 的工作原理是加热毛细管中间的一个小点，使里面的分子移动得更快。
较小的分子比较大的分子移动得更快。
在加热区域测量荧光。
荧光 DNA 适体是一种相对较小的分子，与病毒结合时会变得更大且更慢。
适配体与病毒结合后，荧光分子会较慢地离开被跟踪区域，从而产生荧光强度的变化。
准备
在生物安全柜中，在 SELEX缓冲液中按 1:2 连续稀释 16 种假病毒溶液从最大 3.9 × 10 8拷贝/mL 到 1.2 × 10 5拷贝/mL（图 2）。
首先在 PCR 管（管 1）中的 SELEX 缓冲液中制备 20 μL 的最大浓度（3.9 × 10 8个拷贝/mL）。
中加入 10 μL SELEX 缓冲液（管 2-16 ）。
从管 1 中取出 10 μL，并通过上下吹打与管 2 彻底混合。
从管 2 中取出 10 μL，并通过上下移液与管 3 彻底混合。
重复至行尾，从管 16 中取出 10 μL 并丢弃。
要覆盖更宽的浓度范围，请使用 1:3 连续稀释。
准备适配体溶液。
将 FAM 功能化 DNA 适体溶解在 SELEX 缓冲液中，最终浓度为 500 nM。
将适体溶液在 95°C 下加热 5 分钟，然后在冰上冷却 3 分钟。
从步骤 B2a 向每个试管中加入 10 μL 的 500 nM FAM 功能化 DNA 适体，上下移液器，并在室温下孵育 10 分钟。
加热蜡直至熔化（图 2.5.）。
将 MO-K022 毛细管插入每个 PCR 管并轻轻敲击以将溶液装入管中。液体应装满大约三分之二。测量发生在毛细管长度的中间，因此溶液必须安全地通过中点。
将管子的每一端浸入熔化的蜡中，让其干燥以密封管子（图 2.5.）。
注意：这是从生物安全柜中取出伪病毒样本的安全建议。此外，密封管可以防止 MST 实验期间溶液蒸发。
蜡层应该足够厚以坚固耐用，但又不能太厚以形成将毛细管从仪器托盘中抬起的球状末端。
不要触摸毛细管的中心测试区域，因为这可能会显着影响结果。始终抓住毛细管的末端。

图 2。微尺度热泳（MST）实验示意图。
1 至 4) MST 样品制备和毛细管装载方案。 5) 用蜡密封毛细管。首先，将毛细管末端浸入熔化的蜡中。然后，让其冷却并固化。重复两端。 6) 装载到 MST 托盘的样品布局，组件标记为 A) 托盘，B) 用于夹住毛细管的磁棒，以及 C) 说明毛细管放置位置的白条。

测量
将管 1 – 16 排列在NanoTemper Monolith NT.115 托盘中，并使用磁棒夹紧（图 2.6.）。
启动仪器，插入托盘，然后关闭仪器门。
将仪器控制温度设置为 25 °C。
选择 LED 通道。对于荧光素修饰的 DNA，选择蓝色通道。
选择执行 MST 实验的选项。
将 LED 功率设置为 20%。
将 MST 电源设置为 Medium 。
此设置控制 IR 激光的功率，在测量期间加热溶液。如果信号变化太大或太小，可以分别调低或调高设置。
将时间顺序设置为 5 秒冷、30 秒热（开），然后是 5 秒冷。
该时间序列对应于每个测量阶段的时间。最初的“冷”时间建立了基线平衡荧光。
30 秒的“热”期是 IR 激光加热溶液、产生温度梯度并使分子运动更快的时间。高温期可能会或可能不会建立新的平衡，但测得的荧光变化率会因试管中的病毒量而异。在炎热时期的某个时候，最终数据中会有一个区域呈现出一条约束曲线。
最后的 5 秒“冷”时间是回到初始平衡。
输入最大浓度（3.9 × 10 8拷贝/mL），然后选择 1:2 连续稀释。仪器将根据该稀释系数自动填充管 2 – 16 的浓度。
注意：仪器将期望纳摩尔量作为浓度。不建议尝试将假病毒的浓度从颗粒/mL 转换为摩尔浓度，而是手动跟踪单位。我们建议仅以 nM 为单位输入“3.9 × 10 8 nM”，而不是正确的单位拷贝/mL，然后在分析结束时将单位更正回拷贝/mL。原因是，将 3.9 × 10 8拷贝/mL 转换为其实际 nM 会导致浓度极低（6.5 × 10 -7 – 2.0 × 10 -11 nM），这可能会导致设备软件中的计算舍入误差拟合曲线时。
确保正确填写所有字段，包括荧光 DNA 配体的浓度。
为将要创建的 .ntp 文件提供一个文件名，该文件可以使用设备的分析软件打开。一个 ntp 文件可以包含几个 MST 实验，这些实验根据它们的名称和记录的日期和时间列出。 MST 实验可以包含根据您为测定定义的“运行表”列出的多个运行（例如，不同的 MST 功率）。
开始测量。
从步骤 B2a 再重复两次以获得一式三份的所有数据。

数据分析

伊洛娜
BioTek读板机数据将采用网格形式，96 孔网格中的每个孔都有一个值。每列代表一种 DNA 浓度。
平均每列中的值并计算标准偏差。这将创建一个 1 × 12 的网格。
从网格中的每个值（表示为 A）中减去空白（A 0 ，第 12 列）在 450 nm 处的吸光度。
然后除以 A 0对整个板的数据进行归一化。
(AA 0 )/A 0与每列中使用的适体浓度作图。
为了确定 K D ，将数据拟合到等式 A，该等式 A 源自Jaroskaite等人。 (2020), 其中 P F是游离 DNA 的测量值 (fit min), P B是结合 DNA 的测量值 (fit max), L T是假病毒的浓度 (已知常数), K D是结合系数（拟合），c 是 DNA 配体的浓度（已知变量）。包含P F和 P B以设置拟合方程的数值范围。

(A-A_0)/A_0 =P_F+(P_B-P_F )*(L_T+K_D+c-√((L_T+K_D+c)^2-4*L_T*c)/(2*L_T )) (eq.A)

使用任何可以绘制 (AA 0 )/A 0对适体浓度的软件，以及计算统计参数和拟合非线性曲线。假设使用 Origin Inc，将进一步解释以下步骤。
在新工作表中，添加一列包含适体浓度，并在以下列中，为每个重复计算的 (AA 0 )/A 0值通常重复三次。
Select the three columns containing the values for the triplicates and click on Origin: Statistics → Descriptive statistics → Statistics on rows, to obtain the mean and standard deviation for each value corresponding to each concentration.
0 )/A 0的平均值绘制适体浓度。将标准偏差设置为 Y 中的误差。
Select the following fitting option in Origin: Analysis → Fitting → Nonlinear fitting.
如果您已经有可用的函数，请选择 K D函数或使用拟合函数生成器创建 K D函数（eq. A）。
注意：如果在实验条件下，目标浓度与适配体浓度有关，可以简化方程。 A到当量。乙：

(A-A_0)/A_0 =(c*P_B)/((K_D+ c))(eq. B)

在这种情况下，选择原点函数选项中已有的双曲线函数。双曲线函数的表达式与方程 B 相同，其中 P2 是 K D ，P1 是 PB。

我们出版物中该实验的示例数据如下图 3 所示。
SARS2-AR10 适体与 SARS-CoV-2 假病毒结合，K D为 79 ± 28 nM（红色）。
相同的适体显示与相同的假病毒没有显着结合，该假病毒已被紫外线（蓝色）呈现为非传染性。

图 3 。将 5 × 10 8拷贝/mL假型SARS-CoV-2 固定在 96 孔板上后，从 ELONA 测定中获得的结合曲线。
假型 SARS-CoV-2 的 SARS2-AR10 序列的解离常数 (Kd) 为 79 nM，而非传染性假型SARS - CoV - 2在 450 nm 处的吸光度没有变化。 n = 3 次技术重复（平均值 ± SD）。此图已在Peinetti等人的许可下重印。（2021 年）。

MST
打开 NanoTemper MST 分析软件MO.Affinity Analysis（补充材料）。在线提供仪器的用户手册。
从仪器保存的 .ntp 文件中加载数据集。
选择 MST 分析类型。
使用 + 图标将要分析的任何复制数据集组合在一起。
点击下一步，软件会自动分析数据。
原始数据是比较荧光（Y 轴）和时间（x 轴）的数据轨迹的形式。图 4 包括 42 个数据轨迹（14 个浓度× 3 个重复）。
每个数据轨迹都将从 5 秒的平衡“冷”区域开始，然后是柔和的弧线，以在 30 秒“热”区域期间接近新的表观平衡，同时 IR 激光打开。
在仪器的标准评估模式下，它会自动生成F冷和F热（分别为关闭和打开 IR 激光的荧光），但可以手动调整它们以找到更好的信噪比和改进的结合曲线。所有被比较的数据集都应该被统一对待。
注：数据是通过计算每个区域内的平均值来转换的。 F冷是图4蓝色区域的平均值。F热是图4红色区域的平均值。第二个冷区域没有标记，但在图表末尾的数据中显示为低迷.这些计算由分析软件进行并报告。
由于每个毛细管的总荧光可能略有不同，因此将F冷标准化为 1。
在同一时间点记录每个毛细管的荧光从F冷变为F热的量（表示为F norm ），并根据设置期间提供的浓度作图。计算每个浓度的F范数作为每个重复的平均值和标准偏差。
注意： F norm以及 ELONA 测定中的 (AA 0 )/A 值是两个不同的变量，代表与病毒结合的适体部分。
此时， MO.Affinity Analysis 软件中当前实现了两个可用选项，用于模型拟合数据：K D模型和 Hill 模型。 SARS-CoV-2 假病毒表面含有多个刺突蛋白拷贝。由于 DNA 适体与该蛋白质结合，因此多个适体可以与每种病毒结合。
选择KD模型。
K D模型对应于单位点模型，它也可以适应多个相同和独立的位点，这意味着有许多结合位点具有相同的结合亲和力并且不受协同作用的影响。定义如下，其中 P F为游离 DNA 的测量值（fit min），P B为结合 DNA 的测量值（fit max），L T为 DNA 的浓度（已知常数），K D为表观结合常数（拟合），c 是假病毒的浓度（已知变量）。可以在其他地方找到具有所述假设的方程推导（ Jarmoskaite等人，2020 年）。该等式已根据我们的条款进行了修改。

Fnorm=P_F+(P_B-P_F )*(L_T+K_D+c-√((L_T+K_D+c)^2-4*L_T*c)/(2*L_T ))

注意：有时模型无法拟合数据。如果没有趋势，表明没有特定的相互作用，或者结合曲线不完整并且在数据的任一端都没有达到最大值/最小值，就会发生这种情况。如果发生这种情况，请调整使用的最大/最小浓度并再次尝试整个实验，或导出值并在任何数据处理软件（如 MS Excel 或 Origin）中根据拟合模型手动进行拟合。
我们论文中该实验的示例数据如下所示：
该实验使用四种不同的假型病毒和 229E 冠状病毒进行，以显示适体选择性。
所有的假病毒（pSARS-CoV-2、紫外线灭活的 pSARS-CoV-2、pSARS-CoV-1 和 pH5N1）和 229E 冠状病毒均从荣教授实验室（伊利诺伊大学芝加哥分校）获得。
图 5a 显示了每个重复的平均F范数和标准偏差（Y 轴上的误差条）。在低浓度病毒下， F标准低观察到，并且在较高浓度下对较高F范数的良好曲线。图 5a 中病毒浓度较低和较高时观察到的F范数显着不同，置信度为 99%。
K D模型可以准确拟合，得到 K D = 4.8 × 10 5 个拷贝/ mL。
注：与 ELONA 实验相比，MST 实验中K D以不同单位报告。这是因为在 ELONA 实验中，DNA 浓度（以 nM 表示）是变化的，但在 MST 中，DNA 浓度是恒定的，而病毒浓度（以拷贝/mL 表示）是变化的。
此测定的灵敏度会因所测量的每个生化系统而异，对于上图中的此特定测定，LOD = 2.7 × 10 5拷贝/ mL。该检测的特异性如图 5b - c 所示。图 5b 和 5c 显示了未观察到结合的 MST 数据集，显示了适配体对 pSARS-CoV-2 的选择性。

图 4 。传染性 SARS-CoV-2 的 MST 原始数据追踪。
每个颜色数据轨迹代表一个重复数据系列。用于分析的热区子集以红色突出显示，冷区以蓝色突出显示。

图5 。传染性 SARS-CoV-2 (A)、紫外线灭活的假型SARS-CoV-2 (B) 和其他病毒 (C) 的 MST 结果。
229E 冠状病毒、假型SARS-CoV-1 和假型H5N1。 SARS2-AR10在5'端用FAM标记，浓度固定为250nM。这些结果证实了适体与传染性假型SARS-CoV-2 的结合及其选择性。 n = 3 次技术重复（平均值 ± SD）。此图已在Peinetti等人的许可下重印。（2021 年）。

笔记

本文中描述的一些材料是生物安全级别 2 (BSL2)，需要格外小心才能安全和适当地处理。处理生物危险材料的最基本的工程控制是在生物安全柜中进行。包括假病毒在内的这些程序的所有步骤都必须在生物安全柜中进行，或者病毒溶液必须在密封容器中（例如，蜡密封的毛细管或密封的 96 孔板）。

食谱

SARS-CoV-2假病毒
SARS-CoV-2假病毒由 Rong 教授实验室（伊利诺伊大学芝加哥分校）在 PBS 缓冲液中提供（Guo等人， 2009；Wang等人， 2014）。储备溶液的效价为 1 × 10 11拷贝/mL。
将储备溶液分装在每个含有 20 μL 的试管中，并保持在 -80 °C。在每次实验之前，解冻新的等分试样。解冻后，不应再冷冻，但可在 4°C 下保存一周。请注意，内容物解冻后不应超过一周使用。
SELEX 缓冲液
1 × PBS、2.5 mM MgCl 2和 0.5 mM CaCl 2 ，pH = 7.4
准备 25 mM MgCl 2溶液。称重 238 mg MgCl 2并溶解在 100 mL 的分子级水中。
准备 5 mM CaCl 2溶液。称重 55 mg CaCl 2并溶解在 100 mL 的分子级水中。
混合 20 mL 的 10 × PBS、20 mL 的 25 mM MgCl 2溶液和 20 mL 的 5 mM CaCl 2溶液。用 140 mL 分子级水稀释。
它可以在室温下储存几个月。如果盐结晶并在视觉上很明显，丢弃并制作新的缓冲液。
SELEX 缓冲液的高浓度储备溶液开始存在溶解度问题，因此不建议使用。单个组分最多可存储为 10 ×储备溶液。
PBS-T
将 Tween 20 添加到 PBS 至 10% v/v（例如，10 mL 的 Tween 20 + 90 mL 的 PBS）并彻底混合
通过将步骤 3a 中的 0.5 mL 添加到 99.5 mL 的 PBS 中，进一步将溶液稀释至 0.05% v/v 的最终浓度。
注意：Tween 20 非常粘稠，难以准确移取小体积。逐步稀释提高了分配体积的准确性。 10% Tween 储备溶液可在 4 °C下储存长达一个月以备将来使用。
PBS-T-BSA
在 6 mL 的 PBS-T 中溶解 0.3 g BSA，以制备 5% w/v BSA 溶液。
醋酸盐缓冲液
将醋酸钠溶解在超纯水中至 0.1 M 的浓度。
通过加入冰醋酸或氢氧化钠将 pH 值调节至 6.5。如果 pH > 6.5，反应将不起作用。
在合适的容器中准备 80 mL 的蒸馏水。向溶液中加入 772.142 mg 醋酸钠。通过添加乙酸或氢氧化钠将溶液的最终 pH 值调整为 6.5。加入蒸馏水直至体积为 100 mL。
停止解决方案
将 1 mL 的浓硫酸缓慢添加到通风橱内的 9 mL 超纯水中。因为浓硫酸是挥发性的，它可以从移液管中滴落。小心转移到开口管。

致谢

作者感谢 Laura M. Cooper 女士和 Lijun Rong 博士提供了本协议中使用的 SARS-Cov-2 伪病毒，并感谢 Daiana Capdevila 博士进行了富有洞察力的讨论。这项工作得到了国家科学基金会 (CBET 20-29215) 的 RAPID 赠款和伊利诺伊大学厄巴纳-香槟分校和伊利诺伊-JITRI 研究所 (JITRI 23965) 的可持续发展、能源和环境研究所的种子赠款的支持。 . ASP 感谢 PEW 拉丁美洲奖学金的财政支持。我们还感谢罗伯特 A. 韦尔奇基金会 (Grant F-0020) 对德克萨斯大学奥斯汀分校 Lu 小组研究项目的支持。
此处描述的协议改编自我们之前的工作（Peinetti 等人，2021）。

利益争夺

作者已根据衍生这些协议的原始论文的内容（Peinetti 等人，2021 年）申请了专利（WO2021236828A1）。

参考

Baaske , P., Wienken , CJ, Reineck , P., Duhr , S. 和 Braun, D. (2010)。用于量化适体结合的缓冲液依赖性的光学热泳。 Angew Chem Int Ed Engl 49（12）：2238-2241。
Bai, C., Lu, Z., Jiang, H., Yang, Z., Liu, X., Ding, H., Li, H., Dong, J., Huang, A., Fang, T.,等。（2018 年）。适配体选择及其在灭活H1N1病毒多价结合电阻抗检测中的应用。百胜生物电子 110：162-167。
Balogh, Z.、Lautner, G.、 Bardoczy , V.、Komorowska, B.、 Gyurcsanyi , RE 和Meszaros , T. (2010)。病毒特异性适体的选择和通用应用。 FASEB J 24（11）：4187-4195。
Cai, Y., Zhang, J., Xiao, T., Peng, H., Sterling, SM, Walsh, RM, Jr., Rawson, S., Rits-Volloch , S. 和 Chen, B. (2020) . SARS-CoV-2 刺突蛋白的不同构象状态。科学369（6511）：1586-1592。
Chakraborty, B., Das, S., Gupta, A., Xiong , Y., Vysnavi , TV., Kizer , ME, Duan, J., Chandrasekaran, AR 和 Wang, X. (2022)。用于病毒检测和抑制的适体。 ACS 感染疾病 8(4)：667-692。
Chen, M.、Hu, D.、Li, X.、Yang, S.、Zhang, W.、Li, P. 和 Song, B. (2015)。新型吡喃葡萄糖苷衍生物的抗病毒活性和相互作用机制研究。 Bioorg Med Chem Lett 25（18）：3840-3844。
Cho, EJ, Lee, JW 和艾灵顿, AD (2009)。适体作为传感器的应用。 Annu Rev Anal Chem（加利福尼亚州帕洛阿尔托） 2：241-264。
Drolet , DW, Moon-McDermott, L. 和Romig , TS (1996)。酶联寡核苷酸测定。 Nat Biotechnol 14（8）：1021-1025。
Duhr , S., Arduini , S. 和 Braun, D. (2004)。通过微流体荧光测定的 DNA 热泳。 Eur Phys JE 软物质15(3): 277-286。
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