材料与试剂

1.250 mL Erlenmeyer 烧瓶（Stoelzle Medical，目录号：21226368000）
2.0.5 mL Eppendorf 管（Eppendorf，目录号： 0030121.023）
3.50 mL 聚丙烯管（Falcon，目录号：352070 ）
4.24 孔板（Falcon，目录号：353047）
5.细胞刮刀（Sarstedt，目录号： 83.3951）
6.Luna TM细胞计数载玻片（Biocat，目录号：L201B1C3GB）
7.一次性比色皿（BRAND，目录号：759015）
8.15 cm 细胞培养皿（Falcon，目录号：353025）
9.5 mL 一次性注射器（BD，目录号：309050）
10.10、200 和 1,250 µL 移液器吸头（STARLAB，目录号分别为：S1110-3700、S1120-3810 和 S1112-1720）
11.5、10 和 25 mL 一次性移液器（Falcon，目录号分别为：606180、607180 和 357525）
12.一次性皮下注射针头 100 Sterican R（Braun，目录号：4657519）
13.细胞过滤器 40 µm（Falcon，目录号：352360）
14.鼠伤寒沙门氏菌血清型 ATCC14028 (ATCC)
15.溶原肉汤（LB）培养基 Lennox（Roth，目录号：X964.2）
16.甘油（Sigma，目录号：G5516-100ML）
17.磷酸盐缓冲液（PBS）（Lonza，目录号： 17-515 F）
18.一次性比色皿（BRAND，目录号： 759015）
19.Casy 杯（OMNI Life Science，目录号： 5651794）
20.Casy Ton 缓冲液（OMNI Life Science，目录号： 5651808）
21.Aqua bidest（Fresenius Kabi，目录号： 16.231）
22.Pen-Strep（Lonza，目录号：DE17-602E）
23.庆大霉素（Gibco，目录号： 15750-037，库存：50 mg/mL ）
24.L-谷氨酰胺（Lonza，目录号： BE17-605E）
25.Dulbecco 改良的 Eagle 培养基（DMEM）（Pan Biotech TM ，目录号： P04-01500）
26.胎牛血清（FBS）（Pan Biotech TM ，目录号： P30-3031）
27.CellROX TM深红（Thermo Fisher，目录号：C10422）
28.N-乙酰半胱氨酸（NAC）（Sigma-Aldrich，目录号：A7250）
29.吖啶橙/碘化丙啶染色剂（Biocat，目录号：F23001）
30.重组鼠干扰素-γ（Peprotech，目录号：315-05；库存 20 µg/mL）
31.重组鼠集落刺激因子 M-CSF（Peprotech，目录号：315-02）
32.氯胺酮（Livisto，目录号：6680219）
33.甲苯噻嗪（Animedica，目录号：7630517）
34.Omnican F 注射器（Braun，目录号：91615025）
35.M-Lyse 浓缩缓冲液（10 × ）（红细胞裂解试剂盒）（研发，目录号：WL2000）
36.LB 培养基（见食谱）
37.含 30% 甘油的 LB 培养基（见配方）
38.细胞培养基（见食谱）
39.S.tm的细胞培养基（参见食谱）

鼠标线
从雌性 C57BL/6N 小鼠中收集骨髓细胞，这些小鼠在因斯布鲁克医科大学的动物设施中繁殖或从查尔斯河实验室订购。

设备

1.Pipetman L 入门套件：2、20、200 和 1,000 µL 移液器（GILSON，目录号：F167370）
2.Sartorius Midi Plus 移液控制器（Sartorius，目录号：710931）
3.生物安全 2 级层流柜，EuroClone Sicherheitswerkbank Safe Mate Eco 1.2（Politakis Laborgeräte，目录号：EN 12 469）
4.振荡培养箱（VWR，目录号 GFL 3031）
5.Heraeus ® HERACell ® CO 2培养箱（Thermo Fisher Scientific）
6.光度计（Eppendorf，目录号：BioPhotometer D30）
7.离心机（Hettich Micro 200R 和 Rotanta 460R）
8.Casy计数系统（OMNI生命科学）
9.自动多模式酶标仪 (TECAN Spark)
10.LUNA 自动细胞计数器（Biocat，目录号：L10001-LG）
11.Millivac-Maxi 真空泵（Merck，目录号：SD1P014M04）
软件

1.SparkControl TM (TECAN Trading, Ltd.)
2.GraphPad Prism 9.1（GraphPad 软件）

程序

防范措施

注：鼠伤寒沙门氏菌血清型是一种生物安全级别为 2 级的细菌，对人员和环境具有低到中度的潜在危害。确保遵守所有相关的国家和机构法规。

1.在计划使用鼠伤寒沙门氏菌 (Burnett) 之前，请联系机构生物安全委员会( IBC ) 等。 , 2009 ;伯德等。 , 2019 )
2.使用适当的个人防护设备和消毒剂
3.在生物安全 2 级层流柜中工作
4.收集并高压灭菌废物

A.Brigo等人所述，生成骨髓来源的巨噬细胞 (BMDM) 。 ( 2022 )

注意：在无菌层流柜中执行后续步骤。
1.通过腹膜内注射 50 μL 的 100 mg/kg 氯胺酮 + 10 mg/kg 甲苯噻嗪来麻醉野生型 C57BL/6N 小鼠。
注意：演示一般程序的视频可在以下位置找到：小鼠腹腔内注射： https ://researchanimaltraining.com/articles/intraperitoneal-injection-in-the-mouse/ 。
2.通过颈椎脱位对深度麻醉的小鼠进行安乐死。此后，将一把大镊子放在麻醉小鼠头骨底部后面，并以 45° 角急剧拉回尾巴。
3.将动物固定在聚苯乙烯泡沫塑料板上，并用 75% 的酒精喷洒动物的表面。
4.用无菌剪刀从脚跟向上切割，去除腿部的皮肤和肌肉组织。
5.切割股骨头周围。
6.在膝关节中间切开。确保骨头没有损坏。
7.切断踝关节。
8.用纸巾去除多余的肌肉。
9.拉大腿以从髋关节中取出股骨头。
10.将骨头放入含有 1% 青霉素和 1% 链霉素（ Pen-Strep）的 PBS 中，置于冰上。
11.接下来的步骤应该在冰上进行。
12.用一把无菌剪刀剪开骨头的末端。
13.将 40 µm 细胞滤网放在 50 mL 聚丙烯管上。
14.冲洗骨髓：
a.使用一次性皮下注射针头和 5 mL 注射器。
b.用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 PBS 填充注射器。
c.在打开的骨头的一端放置一根针。
d.将骨髓冲洗到 40 µm 细胞过滤器上。
e.重复冲洗骨头，直到完全变白。
15.用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 10 mL PBS 清洗细胞过滤器。
16.使用注射器的柱塞通过细胞过滤器过滤细胞。
17.用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 10 mL PBS 清洗细胞过滤器。
18.将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 聚丙烯管在 4°C 下以 300 × g离心 5 分钟。
19.用 aqua bidest 按 1:10稀释小鼠红细胞裂解试剂盒中的M-Lyse 浓缩缓冲液 (10 × )。
20.丢弃上清液。
21.将沉淀重悬于 2 mL 稀释的M-Lyse 浓缩缓冲液 (1 × )中。
22.在室温下孵育 3 分钟。在M-Lyse 浓缩缓冲液 (1 × )上加入 15 mL 含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 PBS 。
23.将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 聚丙烯管在 4°C 下以 300 × g离心 5 分钟。
24.丢弃上清液。
25.在含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 15 mL PBS 中重新悬浮颗粒。
26.将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 聚丙烯管在 4°C 下以 300 × g离心 5 分钟。
27.丢弃上清液。
28.在含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 15 mL PBS 中重新悬浮颗粒。
29.将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 聚丙烯管在 4°C 下以 300 × g离心 5 分钟。
30.丢弃上清液。
31.在 45 mL 的 DMEM 中重新悬浮细胞颗粒，辅以 10% FBS、1% L-谷氨酰胺、1% 青霉素、1% 链霉素和 50 ng/mL 的重组小鼠 M-CSF。
32.将 15 mL 的细胞悬浮液移入三个 15 cm 的培养皿中，并将它们放入具有以下生长条件的细胞培养箱中：5% CO 2 、37°C 和95% 湿度。
33.每隔一天更换一次介质。
34.第 5 天，可以收获细胞。

B.细胞的收获、计数和接种

注意：在无菌层流柜中执行后续步骤。
1.使用细胞培养抽吸泵从 15 厘米细胞培养皿中取出培养基。
2.用 10 mL 的 PBS 清洗细胞两次。
3.添加 8 mL 的 DMEM，辅以 10% FBS 和 1% L-谷氨酰胺。
4.使用一次性细胞刮刀刮取细胞。
5.将细胞转移到 50 mL 聚丙烯管中。
6.用另外 2 mL 的 DMEM 清洗盘子。
7.将洗涤介质转移到含有细胞的 50 mL 聚丙烯管中。
8.关闭管子并将细胞倒置2-3次。
9.取 9 μL 的细胞悬浮液并将其放入 0.5 mL Eppendorf 管中。
10.将 1 μL 的吖啶橙/碘化丙啶染色溶液混合到细胞等分试样中。
11.将 10 μL 的混合物移入 Luna 细胞计数幻灯片中。
12.使用 LUNA 自动细胞计数器测量细胞数。
13.以 1.5 的密度播种细胞 × 24 孔板中的10 5 个细胞/mL。
注：约 4.5 × 一只小鼠双后腿骨髓分离培养后获得10 7 个细胞。

C.如Brigo 等人所述制备鼠伤寒沙门氏菌 ( S. tm) 原液。 ( 2022 )

1.中取出一份肠沙门氏菌血清型鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028。
2.在室温下解冻等分试样。
注意：在无菌生物安全 2 级层流柜中执行后续步骤。
3.将 10 μL 的S. tm 移入 250 mL Erlenmeyer 烧瓶中的 10 mL LB 介质中，并使用锡箔覆盖烧瓶顶部。
4.在 200 rpm 的振荡培养箱中 37°C 孵育过夜。
5.第二天，将 50 μL 的隔夜培养物移入 250 mL Erlenmeyer 烧瓶中的新鲜 10 mL LB 介质中，并用锡箔覆盖顶部。
6.S.tm过夜培养物，并对 250 mL Erlenmeyer 烧瓶进行清洗和消毒。
7.在 37°C 的摇动培养箱中以 200 rpm 的转速孵育培养物 1–2 小时。
8.在一次性试管中使用 500 μL 的 LB 介质校准光度计作为空白。
9.测量 OD 600以检查 S.tm 是否达到0.5。
600在 0.5 和 0.7 之间时，S.tm 达到最佳对数生长期。如果 OD 600值低于 0.5，则继续如上所述在 250 mL Erlenmeyer 烧瓶中培养培养物，直到达到 OD 600值 0.5。值得注意的是， S .tm 密度每 20 分钟重复一次。如果 OD 600值高于 0.7，则用 LB 培养基按 1:1 稀释培养物，并在 250 mL Erlenmeyer 烧瓶中孵育培养物，直到 OD 600值为 0.5。
10.将培养物转移到 50 mL Falcon 管中。
11.在室温下以 4,600 × g离心S.tm培养物 5 分钟。
12.使用真空泵去除上清液。
13.用 30% 甘油将颗粒重新悬浮在 1 mL 新鲜制备的 LB 培养基中。
14.在 0.5 mL Eppendorf 管中制备 50 μL 等分试样。
15.将等分试样储存在 -20°C。

D.S .tm的培养和计数

注意事项：
a.在无菌生物安全 2 级层流柜中执行后续步骤。
b.Brigo 等人最近描述了 S.tm 的培养和计数程序。 ( 2022 ) 。

1.在室温下解冻S.tm的等分试样。
2.用锡箔盖住顶部后，将10 µL S .tm 等分试样移至 250 mL 锥形瓶中的 10 mL LB 培养基中，在 200 rpm 的摇动培养箱中在 37°C 下过夜。
3.第二天，在新鲜的 250 mL Erlenmeyer 烧瓶中准备 10 mL 的LB 介质和移液器 50 μL 的过夜培养物。
4.处理剩余的过夜培养物，并对锥形瓶进行清洗和消毒。
5.在 37°C 下振荡孵育 1-2 小时。
6.测量 OD 600 ：
a.在一次性试管中用 500 μL 的LB 介质测量空白来校准光度计。
b.吸取 500 µL S .tm 培养物并进行测量。
c.OD 600应在 0.5 和 0.7 之间；在这种状态下， S .tm 处于对数生长期。
7.将 5 µL 的S .tm 培养物移至 Casy 杯中的 10 mL Casy Ton 缓冲液中，并计数活的S .tm。将剩余的细菌保持在冰上，直到进行细胞感染。

E.使用 Casy 计数系统对活S.tm进行计数

注意：最近在Brigo 等人中描述了该过程以及 Casy 计数系统特定程序的使用。 ( 2022 ) 。
1.使用 45 µm 毛细管。
2.通过在测量单元下方放置一个带有新鲜 10 mL Casy Ton 缓冲液的新 Casy 杯来测量背景。
3.为背景测量选择程序。
4.测量背景活动。它应该低于 30 个计数和 1 µm 大小。否则，清洗 Casy 计数系统。
5.准备一个带有 10 mL Casy Ton 缓冲液的新 Casy 杯，并添加 5 µL S .tm OD 600 0.5。
6.轻轻摇晃。
7.将样品放入测量单元中。
8.选择测量 1到3 µm 之间的程序。
9.措施。
10.单击“下一步”以获取可行计数/mL = 可行S .tm /mL。
600为 0.5的 S.tm 培养物的活细胞计数介于 2.5 × 10 8和 3 × 10 8活细胞计数/mL 之间。
F.用 CellROX TM染色并用S .tm感染

注意：在无菌生物安全 2 级层流柜中执行后续步骤。抗氧化剂 NAC 用作阴性对照，因为它可以显着降低细胞中的 ROS 压力。重要的是，在感染或其他治疗之前添加 NAC，以增加细胞的抗氧化能力。我们建议每个处理条件至少重复三次孔（例如，未感染控制、未感染 + NAC、感染和感染 + NAC 各四口井，如图 1 所示）。

1.将 5 μL 的 500 mM 抗氧化剂 NAC（最终浓度：2.5 mM）添加到阴性对照样品中（图 1）。
2.在 37°C 和 5% CO 2的细胞培养箱中孵育细胞 15 分钟。
3.孔中移取 1 µL CellROX TM Deep Red 试剂（终浓度 2.5 µM）。
4.在 37°C 和 5% CO 2的培养箱中孵育细胞 15 分钟。
5.S .tm感染细胞；因此，将比细胞多 10 倍的S.tm添加到每个孔中。
6.S .tm的计算示例：
要获得 MOI 10 ，请将细胞数乘以 10：1.5 × 10 5 × 10 = 1.5 × 10 6
将计算出的细胞数除以获得的活沙门氏菌计数（例如，2.5 × 10 8 ）： 1.5 × 10 6活细胞计数/mL： 2.5 × 10 8活细胞计数/mL = 0.006 mL = 6 µL
7.S.tm的计算量直接添加到含有 1 mL DMEM 的细胞培养井中，其中含有 1% L-谷氨酰胺和 10% FBS。
8.感染后立即将盘子放入预热的读板器 (TECAN Spark) 中。

G.板读取器 (TECAN Spark) 的设置和感染阶段的测量

注意：设置屏幕的捕获图像显示在图 2 中。

图 2. 酶标仪 (TECAN Spark) 方法编辑器设置的屏幕截图

1.打开读板器方法编辑器。
2.选择 24 孔板。
注意：选择正确型号的 24 孔板，以避免在“底部读取模式”下测量不准确，并避免损坏检测器。
3.选择测量“荧光强度”。
4.将仪器温度设置为 37°C。
5.将 CO 2流量设置为 5%。
6.将模式更改为“底部”以读取荧光强度底部。
7.将荧光团设置更改为“其他”。
8.将荧光团参数设置为：
a.单色仪 625 nm 激发；带宽 20 纳米
b.单色仪 670 nm 发射；带宽 20 纳米
9.将“闪烁”设置为 60。
10.选择周期：
a.每 5 分钟重复测量一次。
b.周期：12
11.将增益更改为“手动”并使用 130。
12.将 z 位置设置为“手动”。
注意：z 位置可以在测量并根据需要进行更改（参见步骤 G19）。
13.每口井选择“多次读取”：
a.用户自定义
b.类型：实心圆 (4 × 4)
c.边界：800 µM
14.保存设置。
15.打开板读取器仪表板控件。
16.加载 CellROX TM测量设置。
17.确认温度为 37°C，CO 2为 5%。
18.将 24 孔板放入读板器中。
19.让机器校准 z 位置（图 3）：
a.在左下方的菜单中选择“z 位置”。
b.在扫描子菜单中，选择用于信号检测的孔。
c.单击左下角的扫描按钮。
d.在生成的图表中，可以看到不同 z 位置的信号强度。

图 3. 酶标仪仪表板控件的屏幕截图

20.应用自动建议的 z 位置或输入手动值。关闭扫描子菜单。
21.单击“开始”。
22.测量完成后，将自动打开一个 Excel 文件。
23.保存 Excel 文件并进行数据分析。
24.将 24 孔板从读板器中取出，继续进行庆大霉素中和测定。

H.在庆大霉素存在下长期测量 ROS（清除期）

注意：在无菌生物安全 2 级层流柜中执行后续步骤。使用此测定可避免未被巨噬细胞吞噬的细菌不受控制地增殖。庆大霉素不能穿透真核细胞，因此不能影响内化细菌。如图 1 所示，通常在此细菌清除阶段添加处理或阳性对照 (IFNγ)。
1.的水浴中预热培养基和 PBS，以避免对细胞造成额外的压力。
2.使用细胞培养抽吸泵去除含有非吞噬 S.tm 的介质。
3.用 1 mL PBS + 25 μg/mL 庆大霉素清洗细胞两次。
4.添加 1 mL 的 DMEM，辅以 10% FBS、1% L-谷氨酰胺和 25 μg/mL 庆大霉素。
5.在阳性对照样品中加入 100 ng/mL IFNγ。
6.将 5 μL 的 500 mM 抗氧化剂 NAC（最终浓度 2.5 mM）添加到负控制样品中。
7.在细菌清除阶段，将细胞在细胞培养箱（37°C，5% CO 2 ，95% 相对湿度）中孵育长达 24 小时。仅在每小时测量时取出细胞培养板。

I.读板器 (TECAN Spark) 的设置和清除阶段的测量

注意：在细菌清除阶段，我们建议在读板器中进行单次测量。在这些测量之间，细胞培养板被保存在细胞培养箱中，以确保细胞的最佳环境条件（37°C，5% CO 2 ，95% 相对湿度）。此外，建议始终将酶标仪的温度保持在 37°C，气氛始终保持在 5% CO 2 。
1.打开读板器 (TECAN Spark) 方法编辑器。
2.将 G 部分的“设置”加载到方法编辑器中。
3.删除“选择周期”（步骤 G10）以仅执行单次荧光测量。
4.使用之前“设置”（G 节）的参数。
5.保存设置。
6.打开读板器控件。
7.加载 CellROX TM测量设置。
8.确认温度为 37°C，CO 2为 5%。
9.将 24 孔板放入读板器中。
10.让机器校准 z 位置。
11.如果需要，应用新的 z 位置。
12.单击“开始”。
13.测量完成后，将自动打开一个 Excel 文件。
14.保存此 Excel 文件并继续进行数据分析。
注意：或者，也可以将板读取器设置为在整个 24 小时细菌清除阶段每小时测量一次，并在板读取器中不断孵育 24 孔板，以最大限度地减少动手时间。在这种情况下，我们建议使用湿度盒以及与细胞培养箱相同的环境条件（37°C，5% CO 2 ）。

数据分析_

1.从感染阶段打开生成的 Excel 文件。
Excel 文件显示了实验设置中执行的所有操作。
2.向下滚动至测量数据显示为止。
Excel 文件描述了每个孔的结果（表 1 显示了一个示例）。

表格1。一口井在 1 小时内每 5 分钟连续测量一次的输出数据示例

3.表中显示了每孔 4×4 多次读取的每个单独测量值。每个单独测量的位置都显示在地图中，也可以在 Excel 文件中找到（如图 4 所示）。

图 4. 在 Excel 表中找到的每个孔的多个读数的位置（左）和一个孔中多个测量的图示（右）

4.在表中，在时间 [sec]、大气 [% CO 2 ] 和温度 [°C] 下方，显示了单个孔的所有单独测量值的平均值和标准偏差。
5.打开 GraphPad 棱镜。
6.选择“XY”图表。
7.在 y 轴的子列中并排选择“4”技术复制值。
注意：将此数字调整为实验设计中使用的重复孔数。
8.用分析时间点 0 – 60 分钟标记x 轴。
9.用实验组标记列。
10.在相应的子列中为每个实验组添加技术复制的方法。
注意：如果需要，可以将数据标准化为未感染的控制条件。
11.检查图表并为不同的条件分配颜色。
12.将y 轴标记为 CellROX TM的荧光强度。
13.将x 轴标记为时间 [分钟]。
注意：图 5 显示了 1 小时感染阶段的示例图。

在 1 小时的过程中， S .tm感染阶段CellROX TM的荧光强度。数据显示为平均荧光强度±SD，归一化为未感染的控制条件（虚线）。

14.S.tm感染阶段相同的方式分析 S.tm 清除阶段的数据。
15.将 x 轴的标签更改为时间 [h]。
注意：图 6 显示了 2 – 7 h S .tm 清除阶段的示例图。

图 6. 洗去未被吞噬的 S.tm 后 2 到 7 小时内 CellROX TM 的荧光强度（清除期）。数据显示为平均荧光强度±SD，归一化为未感染的控制条件（虚线）。左图显示未感染细胞的处理，右图显示感染细胞的处理。

16.显示_ 单个时间点（例如，24 小时）的差异，请在 GraphPad 棱镜中选择一个柱形图。
17.根据组标记列。
18.将每组的技术一式四份添加到每列中。
19.检查图表。
20.将y 轴标记为 CellROX TM的荧光强度。
21.将x 轴标记为 24 小时刺激。
注意：图 7 显示了测量的 24 小时时间点的示例图。

感染或未感染刺激 24 小时后CellROX TM的荧光强度。数据显示为平均荧光强度±SD，归一化为未感染的控制条件（虚线）。

食谱

1.LB培养基
200 毫升无菌水
2 克 LB 中粉
高压灭菌器（121°C 20 分钟，50°C 10 分钟）

2.含 30% 甘油的 LB 培养基
将 300 μL 的甘油添加到 700 μL 的 LB 介质中

3.细胞培养基
500 毫升的 DMEM
50 mL 的胎牛血清
5 mL 的 L-谷氨酰胺
5 mL 青霉素/链霉素

4.链球菌的细胞培养基
500 毫升的 DMEM
50 mL 的胎牛血清
5 mL 的 L-谷氨酰胺

致谢

GW 得到了基督教多普勒协会和奥地利研究基金（FWF 博士项目 W1253 HOROS；和 FWF-docfund-82-CBD）的资助。 NB 得到了 FWF 博士项目 - W1253 HOROS 的支持。 PG 和 IT 得到了奥地利科学基金 (FWF docfound 82-CBD) 的支持。 MN 由奥地利科学基金 (FWF, P33062) 资助。
Wu等人之后进行了改编和修改。（ 2017 年）。

利益争夺

作者宣称没有利益冲突。

参考

Brigo, N.、Pfeifhofer-Obermair, C.、Demetz, E.、Tymoszuk, P. 和 Weiss, G. (2022)。体外感染鼠伤寒沙门氏菌表达红色荧光蛋白的巨噬细胞的流式细胞术表征。生物协议12(11)：e4440。
Brigo, N.、Pfeifhofer-Obermair, C.、Tymoszuk, P.、Demetz, E.、Engl, S.、Barros-Pinkelnig, M.、Dichtl, S.、Fischer, C.、Valente De Souza, L. , Petzer, V., 等人。 (2021)。细胞因子介导的巨噬细胞 ARG1 调节及其对控制鼠伤寒沙门氏菌血清型感染的影响。单元格10(7)：1823。
Burnett, LC、Lunn, G. 和 Coico, R. (2009)。生物安全：处理病原体和传染性微生物的指南。 Curr Protoc Microbiol第 1 章：单元 1A 1。
Burniat, W.、Toppet, M. 和 De Mol, P. (1980)。三名慢性肉芽肿病患儿的急性和复发性沙门氏菌感染。 J 感染2(3)：263-268。
Byrd, JJ、Emmert, E.、Maxwell, R.、Townsend, H. 和 ASM 2012 年实验室生物安全指南修订工作委员会。（2019）。教学实验室生物安全指南 2.0 版：2019 年修订和更新手册。 J Microbiol Biol Educ 20(3)：20.3.57。
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