材料

聚丙烯反应管：1.5、2 和 15 mL（例如， Sarstedt，目录号：72.690.001、72.691、62.554.502）
带旋盖的 15 mL 玻璃管（例如， Oehmen ，目录号： 7920120、6702588）
注意：为避免磷酸盐污染，玻璃器皿应在使用前用不含磷酸盐的清洁剂清洗。
滤芯吸头：10、200 和 1,000 μL （例如. , Starlab，目录号：S1120-3810、S1120-8810、S1126-7810）
5 mL 移液器吸头（例如. , 吉尔森，目录号：F161571）
4 mL闪烁瓶（PerkinElmer，目录号：1200-421）
玻璃烧杯 (100 mL )
玻璃烧瓶 (500 mL)
量瓶 (100 mL)
磁力搅拌子
护目镜
手套

化学品

N-十二烷基β-麦芽糖苷（ DDM）（Glycon，目录号：D97002）
4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸（HEPES ）（Roth，目录号：6763.3）
氯化钠( NaCl) （Fisher Scientific，目录号：10284640）
甘油，> 99%（VWR，目录号：24388.295）
氢氧化钠（NaOH）（Signa-Aldrich，目录号：30620）
六水氯化镁（MgCl 2 ）（Sigma-Aldrich，目录号：M2670）
异丁醇，99%（Alfa Aesar，目录号：B23091）
环己烷， 99.5%（VWR，目录号：23224.293）
丙酮， 99.5%（Sigma-Aldrich，目录号：904082）
5'-三磷酸腺苷二钠盐水合物（非放射性 ATP）（Sigma，目录号： A3377)
七钼酸铵四水合物， 99%（ Roth，目录号：3666.1）
用于亲水性和亲脂性样品的闪烁液（Roth，目录号： 0016.3)
盐酸 (HCl)（VWR，目录号：20252.290）
85%（w/w）正磷酸 ( H 3 PO 4 )（ VWR，目录号：20624.295）
氢氧化钾（KOH）（Fisher Scientific，目录号：P564060）
[ γ - 32 P]-ATP 3,000 Ci/mmol、5 mCi/mL、250 μCi（PerkinElmer，目录号： BLU502H ）。储存在 4 °C，半衰期为 14.29 天
注意：我们建议使用这种“easy Tide”版本，它在液体中包含绿色染料以帮助移液。此外，这种 ATP 可以储存在 4°C 下，以避免冻融循环。 [ γ - 33 P]-ATP 也可以使用。
原钒酸钠（西格玛，目录号：450243）
测定缓冲液 (100 mL)（参见配方）
20% (w/v) DDM 原液 (5 mL) （参见配方）
1 M HCl (100 mL) （参见配方）
试剂 A (15 mL)（见配方）
试剂 B (33.3 mL)（见配方）
20 mM H 3 PO 4 (5 mL) （参见配方）
100 mM ATP (10 mL) （见配方）
500 mM MgCl 2 (10 mL) （参见配方）
700 mM 原钒酸盐 (35 mL) （参见配方）

设备

分析天平（Sartorius Entris-i II，220 g/0.1 mg，Buch Holm，目录号：4669128）
Eppendorf Research ® plus 移液器 P20、P200、P1000、P5000 （例如， Eppendorf，目录号：3123000039、3123000055、3123000063、3123000071）
Thermomixer （例如， Eppendorf ，目录号：5382000015）
β-辐射防护罩（例如， Thermo Fisher Scientific，目录号：6700-1812）
Beta 计数器（例如， Berthold ，目录号：LB 1210B）
涡旋混合器（例如， Vortex Genie 2，Scientific Industries Inc.，目录号：SI-0236）
闪烁计数器（例如，MicroBeta2，PerkinElmer，目录号：2450-0020），带有用于 4 mL 闪烁瓶的样品盒（PerkinElmer，目录号：1450-117）
pH 计（例如，SevenCompact S220，Mettler Toledo，目录号： 30019028）
带加热选项的磁力搅拌平台（例如，RCT basic、IKA，目录号：0025005927）
通风柜

软件

MicroBeta2 Windows 工作站版本 2.3.0.12
微软Excel

程序

2+的反应缓冲液中混合纯化或重组的 ATP 酶、5 μCi [γ- 32 P]-ATP 和 1 mM 非放射性 ATP来进行。对照反应包括不添加蛋白质的样品和在 1 mM 原钒酸盐（一种 P 型 ATP 酶的经典抑制剂）存在下孵育 ATP 酶。此外，蛋白质的催化失活突变体可以作为反应的阴性对照，以评估蛋白质制剂中存在的潜在污染 ATPases 的存在。每个反应中使用的非放射性 ATP 的量必须过量，因此它不是限速的。通常，每个反应使用大约 1 mM 的非放射性 ATP。但是，应首先测试蛋白质的数量、ATP 浓度和 ATP 水解反应的孵育时间。图 1 显示了工作流程的概览。通过将样品置于冰上并添加酸来终止 ATPase 反应。随后，通过钼酸盐-磷酸盐萃取分离反应组分，并通过闪烁计数确定释放的无机磷酸盐的量。与不含蛋白质的缓冲液样品的比较用于背景校正。具有来自 [γ- 32 P]-ATP 库存的已知体积的校准参考样品允许将测量的闪烁信号校准为样品中的[γ- 32 P] ，从而对水解的 ATP 进行量化。

图 1. 用于测量 ATPase 活性的实验设计和工作流程。制备样品后，加入 ATPase 混合物，将样品转移到加热块上开始反应。通过将样品置于冰上并添加试剂 A 来终止反应，该试剂含有与游离无机磷酸盐形成复合物的钼酸盐。将溶液转移到装有正磷酸的玻璃管中，加入试剂B进行相分离法萃取磷酸盐。分离后，将500μL的上相加入闪烁瓶中的闪烁液中，并进行测量。

样品制备

我们建议将每个样品准备一式两份或一式三份。
在冰上单独的 2 mL 反应管中准备最终体积为 45 μL 的测试样品。表 1 显示了一个示例性的移液方案。通常，每个反应使用 40–250 ng 纯化的 ATPase。如果蛋白质的特定 ATPase 活性范围未知，则应测试多种稀释度。使用测定缓冲液总体积为 45 μL。
注意：建议将纯化的蛋白质以小等分试样储存在 -80 °C，以避免多次冻融。在进行实验之前，必须在冰上缓慢解冻。

表格1。样品和缓冲液的示例性移液方案一式两份，校准参考一式三份。 10 × ATPase 反应混合物在后面的步骤中加入（见 C 部分）。
样本回复蛋白质 (微升) 抑制剂 (μL) 缓冲液 (μL) 10 × ATPase 反应混合物 (μL)
缓冲我 - - 45 5个
二 - - 45 5个
样本我 39 - 6个 5个
二 39 - 6个 5个
样品 + 抑制剂我 39 1个 5个 5个
二 39 1个 5个 5个
校准参考我 - - - 0.2（2 μL 1:10 稀释）
二 - - - 0.2（2 μL 1:10 稀释）
三 - - - 0.2（2 μL 1:10 稀释）

使用与之前添加抑制剂相同数量的纯化 ATP 酶制备带有抑制剂的测试样品。使用测定缓冲液总体积为 45 μL。在室温下孵育样品 20 分钟，以进行适当的抑制。
注意：如果原钒酸钠用作抑制剂，则必须在 95°C 下煮沸 15 分钟，然后将其储存在冰上，直到用于破坏聚合物。
通过在单独的 2 mL 反应管中添加 45 μL 测定缓冲液来准备空白。
将样品（如果使用抑制剂，则在孵育后）储存在冰上，直到开始测定。

制备 10 × ATP酶反应混合物

32 P]-ATP的衰减速率，计算其在进行测定当天的活性。制造商指定与放射性标记试剂的指示活性相对应的校准或参考日期。该日期可用于确定放射性同位素在使用以下等式进行测定当天的残留活性：

A(t)=A_0∙e^((ln⁡(2))/14.3∙t)

t的活动
A 0 = 初始活动（在t = 0 时）
t = 时间点（ t = 0后的天数）

32 P]-ATP (BLU502H)的参考编号可用于通过 PerkinElmer 主页获得以 mCi/mL 为单位的浓度和以 Ci/mmol 为单位的储备溶液的比活性：
https://www.perkinelmer.com/tools/calculatorrad#/product/BLU502H
注意：推荐的 [ γ - 32 P]-ATP (BLU502H) 仅包含 50 μL。在校准日期之后越早进行实验，可以测试的样品就越多。
计算制备 10 × ATPase 反应混合物（1 mM ATP、5 mM MgCl 2 、0.4 μCi/μL [γ- 32 P]-ATP 测定缓冲液）所需的体积，如表 2 所示。对于每个样品，需要5 μL的混合物，并且应准备过量的一个样品用于制备校准参考样品。根据计算，先准备 10 × 不含[ γ - 32 P]-ATP 的ATPase 反应混合物。

表 2 。一个和六个样品的10 × ATPase 反应混合物的示例性移液器方案。对于每个样品，需要5 μL 混合物和总共 2 μCi [γ- 32 P]-ATP。 [γ- 32 P]-ATP的量必须根据半衰期和校准日期进行计算（此处以实验日期的浓度 5 μCi/μL 为例）。应始终使用测定缓冲液将反应混合物的总体积调整为每个样品 5 μL。
10 × ATPase 反应混合物每个样品 (μL) 对于 6+1 个样品 (μL) 最终浓度
三磷酸腺苷 (100 毫米) 0.5 3.5 1毫米
氯化镁2 (500 毫米) 0.5 3.5 5毫米
测定缓冲液 3.6 25.2 -
[γ- 32 P]-ATP 0.4 2.8 0.4 微居里/微升
总容积 5个 35 -

从这一步开始，必须采取放射性物质处理预防措施。这些包括使用适当的屏蔽材料，例如有机玻璃屏蔽（3/8 英寸厚），所有工作都应在其后完成，以及有机玻璃 Eppendorf 管支架。表面应由盖革计数器定期监测，环形剂量计可用于监测个人暴露。放射性同位素只能由授权人员按照机构规定在指定地点使用。放射性物质的征用和贮存、固体和液体放射性废物的处置、溢出物净化等，应当按照本单位规定执行。

根据 B.2 中的计算，通过从溶液储备中添加适当体积的 [ γ - 32 P]-ATP 来完成 10 × ATPase 反应混合物。

ATP酶测定

在冰上的每个样品中加入 5 μL 的 10 × ATPase 反应混合物，辅以[ γ - 32 P]- ATP。
注意：多余的 10 × ATPase 反应混合物稍后用于 D 部分中参考样品的制备。
通过在 28°C 下轻轻摇动（不超过 700 rpm）将样品转移到热混合器来启动 ATPase 反应。
注意：最佳温度取决于 ATPase，最初应进行测试。
孵育 60 分钟。
注意：由于测定基于终点测定，因此反应不受可用 ATP 量的限制很重要。为防止完全消耗 ATP 从而低估样品活性，应测试多种 ATPase 稀释液。
通过将样品置于冰上并随后添加 1.5 mL 试剂 A（配方 4）来停止反应。
注意：所有 ATP 酶都应失活，反应完全停止。然而，为了防止 [γ- 32 P]-ATP 的自水解，应通过提取磷酸盐直接处理样品。

钼酸盐萃取

注意：需要钼酸盐-磷酸盐提取来将无机32 P-磷酸盐与非水解的32 P-ATP 分离，如图 2 所示。

图 2. 钼酸盐-磷酸盐萃取程序的图示。 ATPase 反应后，游离的32 P-磷酸盐和未水解的γ - 32 P-ATP 存在于同一溶液中。添加含有钼酸铵的试剂 A 并与无机磷酸盐形成络合物。添加试剂 B 导致下层水相和上层有机相发生相分离。钼酸盐-磷酸盐复合物定位于上层有机相，而未水解的 ATP 保留在水相中。取有机相样品进行闪烁计数，以确定形成的无机磷酸盐的量。

3 PO 4的 15 mL 玻璃管中（配方 6）。
3 PO 4的磷酸盐作为下一步ATPase反应的无机磷酸盐的载体。
在所有样品中加入 3 mL 试剂 B，盖上盖子，涡旋 30 s。
注：试剂 B 易挥发。在通风橱下工作。
在冰上孵育 10 分钟以允许相分离。
将 2 mL 闪烁液添加到 4 mL 闪烁瓶中；每个样品和三个校准参考都需要单独的试管。
注意：此处使用的闪烁计数器通过盖子进行测量。因此，试管应标记在小瓶的侧面，而不是盖子上。阐明您的设备如何测量并相应地更改标签位置。
相分离后，取 500 μL 含有放射性正磷酸盐-钼酸盐复合物的黄色上部有机相，并将其添加到闪烁瓶中的闪烁液顶部。
注意：有机相的表面张力低，容易从移液器中掉出。
注意：不要在小瓶中上下移液，因为闪烁液会卡在吸头中。
为了对闪烁测量进行量化，准备 10 × 10 的 1:10 稀释液 ATP 反应混合物（2 μL + 18 μL H 2 O），并用闪烁液将 2 μL 的 1:10 稀释液添加到闪烁管中。将此校准参考一式三份。

使用 MicroBeta2 进行闪烁计数

正确拧紧闪烁瓶的盖子。
将小瓶放入测量盒中，将其倒置几次以进行混合，然后将其放入闪烁计数器中，停止盒位于下方。
启动MicroBeta2 Windows 工作站程序。
32 P 测量创建协议，如图 3 所示。
将标签 1 设置为32 P，将标签 2 设置为无。
将板/过滤器设置为 4 mL 板 6 × 4.
将检测类型设置为正常。
将计数时间设置为 1 分钟。
将检测器归一化和背景校正设置为无。
将计数精度设置为 0.2 2 西格玛%。
将循环参数设置为每板 1 次。

图 3.显示协议设置的 MicroBeta2 Windows 工作站程序的用户界面。 A：通用设置； B：校正设置； C：计数控制设置； D：其他设置。

更改板设置以仅测量包含小瓶的插槽。
开始测量。
将每个样本的 CPM 值提取为 .txt 文件。

数据分析

从 .txt 文件中提取信号强度并将其加载到 Microsoft Excel 中进行分析。
数据分析：
首先，参考样品中热 ATP 的量必须根据其在实验当天的比活性和从 10 × ATPase 反应混合物中取出的体积来计算。将校准参考样品中的热 ATP 量与其测得的 cpm 值相关联，可以校准测得的 cpm 值。表 3 列出了用于计算的示例性样本值。
接下来，可以通过缓冲液样品信号对样品信号进行背景校正，并可以量化水解热 ATP 的量。
在校正总上相体积和水解非放射性标记 ATP 的外推后，可以指定每分钟和每毫克蛋白质的水解 ATP 总量，以产生特定的 ATP 酶活性。

表 3.闪烁测量的示例数据。校准参考、缓冲液和样品分别一式三份和一式两份制备。每个样品包含 40 ng 蛋白质。
样本样本信号 [cpm]
校准参考 I 221,331
校准参考 II 218,048
校准参考 III 221,200
缓冲区我 8,874
缓冲区二 8,444人
样品一 50,037
样本二 53,292

量化参考计算：
对于参考计算，从10 × 浓度为 0.4 μCi/μL [ γ - 32 P]- ATP的 ATPase 反应混合物，产生 0.08 μCi [ γ - 32 P]- ATP 。

(activity in reference [Ci])/(specific activity [Ci/mmol])=hot ATP in reference sample [mmol]
(0.08×10^(-6) Ci )/(3,000 Ci/mmol)=2.667×10^(-11) mmol

在示例性实验中，这些 2.667 × 10 -11 mmol的参考样品参考了 220,193 cpm 的校准参考平均值。
样品分析：
我。对每个样本的重复计数进行平均，并对平均背景信号应用背景校正。

av.sample signal [cpm]-av.buffer signal [cpm]=corr.sample signal [cpm]

(50,037 cpm+53,292 cpm)/2-(8,874 cpm+8,444 cpm)/2=43,006 cpm

上层有机相中完整[ γ - 32 P]-ATP的虚假提取的对照，而且还用于[ γ - 32 P]-ATP的量已经在储备中或在实验过程中水解的物质，以及所用溶液中的磷酸盐污染。

二.通过参考计算将每个样品的缓冲液校正计数归一化为毫摩尔水解热 ATP。

(hot ATP in reference sample [mmol])/(av.reference sample [cpm] )×sample [cpm]=hydrolzyed hot ATP [mmol]

(2.667×10^(-11) mmol)/(220,193 cpm)×43,006 cpm=5,208×10^(-12) mmol

三.水解热 ATP 的计算量是指从上相中取出 500 μL 仅用于分析。因此，对于 3 mL 的完整上层有机相，计算值必须乘以六，即体积校正因子 ( 〖CF〗_Vol)。

hydr.hot ATP [mmol]×〖CF〗_Vol=total hydr.hot ATP [mmol]

5,208×10^(-12 ) mmol×6=3,124×10^(-11) mmol

四.由于[ γ - 32 P]- ATP与非放射性标记 ATP 的比率为 1:75,000 (mol:mol)，计算值必须进一步乘以 75,000，即比率校正因子 ( ，以解释〖CF〗_Ratio)所有存在的 ATP .

total hydr.hot ATP [mmol]×〖CF〗_Ratio=total hydr.ATP [mmol]

3,124×10^(-11) mmol×75,000= 〖2,344×10〗^(-6) mmol

样品中的蛋白质量和 60 分钟的反应时间进行归一化，从而得出最终的特定 ATP 酶活性，单位为每毫克蛋白质的毫摩尔水解 ATPm_protein)每分钟。

((total hydr.ATP [mmol])/(reaction time [min] ))⁄(m_protein [mg])=spec.Activity [(mmol⁄min)⁄mg]
((〖2,344×10〗^(-6) mmol)/(60 min ))⁄(0.04×10^(-3) mg)=976.5×10^(-6) [mmol⁄min/mg]

六.总之，可以根据背景校正的 cpm 值计算比活性，如下所示：

(((hot ATP in ref.[mmol])/(ref.[cpm] )×corr.signal [cpm]×〖CF〗_Vol×〖CF〗_Ratio)/(Reaction time [min]))⁄(m_protein [mg] )=specific ATPase activity [mmol⁄mg/min]

参考。 = 参考样品
CF Vol = 总上相体积的校正因子
CF比率= 冷热 ATP 比率的校正因子
m蛋白质=蛋白质的量

七.最终的特定 ATPase 活性可以在有和没有抑制剂的样品之间进行比较。在这里，没有抑制剂的样品设置为 100%，以允许以百分比量化特定抑制（图 4）。

图 4. 使用洗涤剂溶解的 Apt1p/Cdc50p 进行 ATP 酶测定的示例性结果。在不存在 (-) 和存在 (+) 1 mM 原钒酸盐（一种 P 型 ATP 酶抑制剂）的情况下测定纯化的 Apt1p/Cdc50p 的 ATP 酶活性。改编自Stanchev 等人。 (2021) 。

食谱

注意：由于对少量游离磷酸盐进行了量化，因此应尽量减少所用试剂和材料的磷酸盐污染。应使用仅包含缓冲液的对照样品来检测背景信号和数据校正。

检测缓冲液 (100 mL)
20 mM HEPES（4.766 g）、150 mM NaCl（8.766 g）、20%（ w/v ）甘油（20 g）、0.05%（w/v）DDM（250 μL 的 20% 库存；参见配方 2）， pH 值 7.4。
2 O填充至 90 mL。用 1 M NaOH 将 pH 值调整至 7.4。添加 DDM 并用 ddH 2 O填充至 100 mL。
注意：对于其他 ATPases，可以修改此缓冲区。

20%（w/v）DDM 库存（5 毫升）
将 1 克 DDM 溶解在 15 mL 聚丙烯螺帽管中的 3 mL ddH 2 O 中，并通过头顶旋转孵育直至完全溶解。让泡沫凝固并用 ddH 2 O填充至总共 5 mL。储存在 4 °C。

1 M 盐酸（100 毫升）
2 O将 8.3 mL 浓缩 (37%) HCl 稀释至总体积为 100 mL。

试剂 A (15 mL)
将 0.185 克七钼酸铵四水合物溶解在 1 M HCl 中，总体积为 15 mL。
注意：在实验当天准备新鲜的。每个样品需要 1.5 mL 的试剂 A。我们建议为一个额外的样品准备足够的体积。

试剂 B (33.3 mL)
在玻璃烧瓶中以 5:5:1:0.1 (v:v) 的比例通过圆周运动混合异丁醇、环己烷、丙酮和试剂 A，得到 45% (v/v) 异丁醇 (15 mL)，45 % (v/v) 环己烷 (15 mL)、9% (v/v) 丙酮 (3 mL) 和 0.1% 试剂 A (0.3 mL)，用于 33.3 mL。
注意：使用的物质具有挥发性和毒性。在通风橱下工作。在实验当天准备新鲜的。每个样品需要 3 mL 试剂 B。我们建议为一个额外的样品准备足够的体积。

20 毫米 H 3 PO 4 (5 毫升)
2 O中的总量为 5 mL。

100 毫米 ATP（10 毫升）
2 O中，总体积为 8 mL。使用 1 M KOH 将 pH 值调整至 7.0。用 ddH 2 O填充多达 10 mL 。在 -20 °C 下将 1.5 mL 聚丙烯反应管中的 200 μL 等分试样冷冻。避免反复冻融。

500 毫米氯化镁2 (10 毫升)
将 1.017 克 MgCl 2六水合物溶解在总体积为 10 mL 的 ddH 2 O 中。储存在 RT。

700 mM 原钒酸盐 (35 mL)
在玻璃烧杯中将 4.5 g 原钒酸钠添加到 30 mL ddH 2 O 中，搅拌直至完全溶解。
使用 1 M NaOH 或 1 M HCl 将 pH 值调整为 10。
注意：酸化会导致颜色变为黄色。
将溶液在加热板上煮沸，同时不断搅拌，直到溶液失去颜色。
冷却至室温并测量 pH 值。
使用 1 M NaOH 或 1 M HCl 再次滴定至 pH 10，然后重复煮沸和滴定直至 pH = 10 在室温下稳定。
2 O填充至 35 mL。
在 -20 °C 下将 200 μL 的等分试样储存在 1.5 mL 聚丙烯反应管中。
在使用前，将溶液在 95°C 下加热 15 分钟以破坏聚合物（Goodno，1982）并将其置于冰上直至使用。
注意：原钒酸盐是有毒的。在通风橱下工作并穿戴防护装备。

致谢

该协议改编自我们之前的工作（Marek 等人，2011 年；Laub 等人，2017 年；Theorin 等人，2019 年；Stanchev 等人，2021 年）。这项工作由诺和诺德基金会 (NNF18OC0034784) 向 TGP 提供的赠款资助； SV是Studienstiftung des Deutschen Volkes的学者。图形是在 BioRender 中创建的。

利益争夺

作者声明不存在竞争利益。

参考

Banik, U. 和 Roy, S. (1990)。 ATPase 活性的连续荧光测定。生物化学杂志266(2)：611-614。
Baykov, AA、Evtushenko, OA 和 Avaeva, SM (1988)。用于正磷酸盐测定的孔雀石绿程序及其在基于碱性磷酸酶的酶免疫测定中的应用。肛门生物化学171(2)：266-270。
Brune, M.、Hunter, JL、Corrie, JE 和 Webb, MR (1994)。使用新型荧光探针直接、实时测量快速无机磷酸盐释放及其在肌动球蛋白亚片段 1 ATPase 中的应用。生物化学33(27)：8262-8271。
Carter, SG 和 Karl, DW (1982)。孔雀石绿无机磷酸盐测定：改进和评价。 J Biochem Biophys 方法7(1)：7-13。
Feng, J.、Chen, Y.、Pu, J.、Yang, X.、Zhang, C.、Zhu, S.、Zhao, Y.、Yuan, Y.、Yuan, H. 和 Liao, F.（ 2011）。一种改进的磷酸盐孔雀石绿测定法：机理和应用。肛门生物化学409(1)：144-149。
Geladopoulos, TP、Sotiroudis, TG 和 Evangelopoulos, AE (1991)。用于蛋白磷酸酶活性的孔雀石绿比色法测定。肛门生物化学192(1)：112-116。
Goodno, CC, (1982)。 [12] 用钒酸盐离子捕获肌球蛋白活性位点。在：酶学方法，结构和收缩蛋白 B 部分：收缩装置和细胞骨架（第 116 - 123 页）。学术出版社。
Gorbulev, S.、Abele, R. 和 Tampé, R., (2001)。 ABC 转运蛋白 TAP 的肽结合、转运和 ATP 水解之间的变构串扰。 Proc Natl Acad Sci USA 98(7)：3732 - 3737。
Hua, Z.、Fatheddin, P. 和 Graham, TR, (2002)。高尔基复合体和内体/液泡系统之间的蛋白质运输需要 Drs2p 相关 P 型 ATP 酶的一个重要亚科。 MBoC 13：3162 - 3177。
Itaya, K. 和 Ui, M. (1966)。比色法测定无机磷酸盐的一种新微量方法。临床医学学报 14(3)：361-366。
Laub, KR、Marek, M.、Stanchev, LD、Herrera, SA、Kanashova, T.、Bourmaud, A.、Dittmar, G. 和 Günther Pomorski, T.（2017 年）。酵母质膜 ATP 结合盒转运蛋白 Pdr11p 的纯化和表征。 PLoS 一12(9)：e0184236。
Marek, M.、Milles, S.、Schreiber, G.、Daleke, DL、Dittmar, G.、H errmann, A.、Müller, P. 和 Pomorski, TG, (2011)。酵母质膜 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白 Aus1：纯化、表征以及脂质对其活性的影响。生物化学杂志286：21835-21843。
Radnai, L.、Stremel, RF、Sellers, JR、Rumbaugh, G. 和 Miller, CA (2019)。用于筛选小分子抑制剂的 NADH 偶联 ATP 酶测定的半高通量改编。 J Vis Exp (150)。
Stanchev, LD, Rizzo, J., Peschel, R., Pazurek, LA, Bredegaard, L., Veit, S., Laerbusch, S., Rodrigues, ML, Lopez-Marques, RL 和 Günther Pomorski, T.（2021 年） ).).真菌病原体新型隐球菌的 P 型 ATPase Apt1 是一种具有广泛底物特异性的脂质翻转酶。 J Fungi（巴塞尔） 7（10）。
Theorin, L., Faxen, K., Sørensen, DM, Migotti, R., Dittmar, G., Schiller, J., Daleke, DL, Palmgren, M., Lopez-Marquez, RL 和 Günther Pomorski, T., （2019）。脂质头部基团是 P4 ATP 酶 ALA2 识别底物的关键元素：一种磷脂酰丝氨酸翻转酶。生物化学杂志476:783–794。
van der Does, C.、Presenti, C.、Schulze, K.、Dinkelaker, S. 和 Tampé, R., (2006)。 Mdl1 核苷酸结合域 ATP 水解循环的动力学研究，采用新型位点特异性标记技术。生物化学杂志 281, 5694-5701。
Warren, GB、Toon, PA、Birdsall, NJ、Lee, AG 和 Metcalfe, JC (1974)。使用确定的膜组件重构钙泵。 Proc Natl Acad Sci USA 71(3)：622-626。