材料和试剂

载玻片（Micro Slides Superfrost Plus）（VWR，目录号：48311-703）
微盖玻片（VWR，目录号：48393-081）
玻璃巴斯德吸管（VWR，目录号：14672-380）
玻璃载玻片染色皿（DWK Life Sciences，Wheaton TM ，目录号：900200）
Coplin染色皿（多种玻璃，目录号：674EMD）
50毫升圆顶盖管（SARSTEDT，目录号：62.547.254）
小鼠
100％乙醇（Greenfield Global，Commercial Alcohols，目录号：P016EAAN）
冰醋酸（默克，目录号：AX0073-9）
胭脂红染料：Carmin Alum（Fisher Scientific，目录号：C579-25）
十二水合铝酸钾（默克，目录号：101042）
盐酸（HCl，Sigma-Aldrich，目录号：H1758）
二甲苯（LabChem，目录号：LC269704）
Permount SP15（Fisher Scientific，目录号：SP15-100）
Carnoy的解决方案（见食谱）
胭脂红明矾溶液（见食谱）
Destaining解决方案（见食谱）

设备

小剪刀（精致解剖剪刀，Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：08-951-5;尖头解剖剪刀，Fisher Scientific，Fisherbrand TM ，目录号：08-940）
镊子（Fisherbrand弯曲中点通用镊子）
化学罩（Fisher Scientific）
用数码相机解剖显微镜（Q color 3相机，OLYMPUS，型号：SZX 12）
搅拌加热板（Fisher Scientific）
称重秤（丹佛仪器，型号：XS-310D，目录号：8531.1）
pH计（Fisher Scientific，Accumet Research，型号：AR15，目录号：13-636-AR15）

软件

ImageJ：可从 https://imagej.nih.gov/ij 免费下载

程序

为整个坐骑准备乳房腺体超过2周的雌性小鼠
注意：＆NBSP;
1. 可以使用任何小鼠品系。我们经常使用我们在动物设施中繁殖的C57Bl / 6和FVB小鼠。这些小鼠也可以从商业育种者那里获得（TACONIC型号＃B6-F和FVB）。
2. 也可能使用大鼠乳腺，但需要增加固定，染色，去染色和脱水时间。
3. 为了研究妊娠期间小鼠乳腺分支，必须知道妊娠的开始。为了获得定时怀孕，培育一名成年男性和两名6-8周龄的女性。在一天结束时将雌性添加到雄性笼子中，并在第二天早晨检查雌性的交配插头。从雄性笼子中移除两只雌性。显示交配插头的小鼠可能怀孕，应分开放置。观察交配栓的那天是怀孕的第1天。交配插头的图像可在线获取，例如育种小鼠的生殖生物学（Soper，杰克逊实验室）。
为了分离乳腺，使用CO 2 吸入在所需的妊娠日处死小鼠。使用小剪刀，在腹部切开一个皮肤，在中线下方切开第二个切口。皮肤现在可以剥去皮肤，皮肤下面可以看到乳腺。
用小剪刀去除皮肤上的乳腺。有关详细信息，请参阅提供的视频（视频1）。

视频1
将腺体转移到静电粘附的显微镜载玻片上，并使用钝端钳尽可能地将玻璃片上的腺体展开，而不会撕裂组织。
将组织面朝上放置在平坦表面上5分钟，使组织部分干燥并粘在玻璃表面上。
将载玻片浸入足够量的Carnoy溶液中以覆盖整个乳腺，并在室温下储存在化学罩内18-24小时。
组织染色，脱色，脱水和安装必须在化学罩内进行。
将载玻片转移到胭脂红明矾溶液中，并在室温下根据乳腺的厚度在24小时至3天内储存在溶液中。当红色染料渗透整个组织并且可见未染色区域时，染色完成。胭脂红明矾溶液最多可使用三次。
胭脂红明矾会染色腺体的上皮结构。为了除去过量的染料，将载玻片浸没在室温下的脱色溶液中。每30分钟更换一次溶液直至溶液保持澄清。去染所需的时间各不相同，取决于乳腺的厚度，但大多数样本3小时就足够了。
通过将载玻片浸泡在70％，80％，95％和100％乙醇中5分钟使乳腺脱水，然后在室温下将载玻片浸入二甲苯中过夜。
载玻片可以浸没在玻璃容器中的二甲苯中，也可以用Permount SP15进行安装。带有载玻片和二甲苯的玻璃容器需要存放在化学通风橱内。蒸发的二甲苯需要不时更换，以防止样品变干。因此，使用Permount安装滑块是长期存储的更好选择。
安装样品：将组织面朝下放在化学罩内的平坦表面上。用足够的Permount SP15覆盖样品以覆盖乳腺组织。慢慢降低乳房组织顶部的盖玻片并施加轻微压力。
将组织面朝上放在化学罩内的平坦表面上。让载玻片干燥24小时。 Permount在干燥时会收缩，露出乳腺组织的外缘，并且需要添加更多的Permount。使用带有橡胶球的玻璃巴斯德吸管在盖玻片边缘下方添加Permount。将组织面朝上放在化学罩内的平坦表面上，并在24小时后再次检查载玻片。继续添加Permount 3-7天或直到乳房组织仍然被Permount覆盖。将安装好的载玻片平放在化学通风罩内放置一周。幻灯片可以存放在塑料滑动盒内。
可以使用连接到解剖显微镜的数码相机拍摄乳腺图像

数据分析

参考

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Kolla，S.，Pokharel，A。和Vandenberg，L。N.（2017）。小鼠乳腺作为哨兵器官：区分具有不同环境历史的“对照”群体。 Environ Health 16（1）：25。
Plante，I.，Stewart，M。K.和Laird，D。W.（2011）。评估小鼠模型中的乳腺发育和功能。 J Vis Exp （53）。
Tolg，C.，Yuan，H.，Flynn，SM，Basu，K.，Ma，J.，Tse，KCK，Kowalska，B.，Vulkanesku，D.，Cowman，MK，McCarthy，JB and Turley，EA（ 2017年）。透明质酸以大小依赖的方式调节生长因子诱导的乳腺分支。 Matrix Biol 63：117-132。
Tucker，D.K.，Foley，J.F.，Bouknight，S.A。和Fenton，S.E。（2017）。切除乳腺整个坐位以确定病变。 J Vis Exp （125）。
Tucker，D。K.，Foley，J。F.，Hayes-Bouknight，S。A.和Fenton，S。E.（2016）。从啮齿动物乳腺整个坐骑中制备高质量的苏木精和伊红染色切片进行组织病理学检查。 Toxicol Pathol 44（7）：1059-1064。
Soper，BW 育种小鼠的生殖生物学。
Sympson，C.J.，Talhouk，R.S。，Alexander，C.M.，Chin，J.R.，Clift，S.M.，Bissell，M.J。和Werb，Z。（1994）。乳腺中溶基质素-1的靶向表达提供了蛋白酶在分支形态发生中的作用的证据。需要完整的基底膜用于组织特异性基因表达。 J Cell Biol 125（3）：681-693。