材料和试剂

1. 50 mL聚丙烯锥形管（Falcon，目录号：352070）
2. 组织培养瓶，250 mL，75 cm 2 （Falcon，目录号：353136）
3. GRI3D 96 孔板（VWR，目录号：MSPPGRI3D-96P-S，订购孔直径为 600 µm 的板），储存在 4°C
4. Eppendorf 管 5.0 mL，带卡口盖，5.0 mL，无菌，无色（Eppendorf，目录号：0030119487）
5. Eppendorf Safe-Lock 管，1.5 mL（Eppendorf，目录号：0030121589）
6. Eppendorf Protein LoBind Tube 1.5 mL（Eppendorf，目录号：022431081）
7. Countess 细胞计数室载玻片（Invitrogen，目录号：C10228）
8. 用于组织切片、磨边、双磨砂端的粘性显微镜载玻片（ Marienfeld Superior，目录号：0800001）
9. 高精度显微镜盖玻片 22 × 22 mm No 1.5H（ Marienfeld Superior，目录号：0107052）
10. 血脑屏障hCMEC /D3内皮细胞系（Millipore Sigma，目录号：SCC066）
11. 人星形胶质细胞（ ScienCell ，目录号：1800）
12. 人脑血管周细胞（ ScienCell ，目录号：1200）
13. 内皮培养基：EGM-2内皮细胞生长培养基-2 BulletKit （Lonza，目录号：CC-3156），在4 °C下储存，不要使用超过1个月
14. 星形胶质细胞培养基（ ScienCell ，目录号：1801），在 4°C 下储存，不要使用超过 1 个月
15. Pericyte Media（ ScienCell ，目录号：1201），在 4°C 下储存，使用时间不要超过 1 个月
16. 类器官培养基：不含 VEGF 的 EGM-2 内皮细胞生长培养基-2 BulletKit （Lonza，目录号：CC-3156），储存在 4°C，不要使用超过 1 个月
17. 胰蛋白酶0.05％（Gibco，目录号：25300-054），从-20°C初始解冻后于4°C储存
18. Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水（DPBS）（Gibco，目录号：14190-094），室温储存
19. 聚-L-赖氨酸（PLL）溶液，mol wt 150,000 – 300,000，0.01% 无菌过滤（Sigma，目录号：P4832-50ml），储存于 4°C
20. 超纯蒸馏水无 DNase/RNase（UPW；Invitrogen，目录号：10977-035），室温储存
21. Eppendorf Protein LoBind 0.5 mL（Eppendorf，目录号：022431064）
22. 台盼蓝染色剂0.4％（Invitrogen，目录号：T10282），室温储存
23. Brain Shuttle – 定制的抗转铁蛋白受体抗体 (Sade et al. , 2013)。储存在-80 °C。该分子可以被任何其他抗转铁蛋白受体抗体替代，例如 MEM-189（Abcam，目录号：ab1086）。
24. 细胞事件TM Caspase-3/7 Green Detection Reagent（Thermo Fisher Scientific，目录号：C10423），储存在-20 °C
25. 16％多聚甲醛水溶液EM级（PFA）（电子显微镜科学，目录号：50-980-487），室温储存
26. Triton X-100 水溶液 10%（w/v）（Roche，目录号：11332481001），储存于 4°C
27. 驴血清无菌过滤（ Canvax Biotech，目录号：SUD004），储存在-20 °C
28. 人 IgG (H+L) AlexaFluor 488 偶联山羊AffiniPure Fab 片段（Jackson Immunoresearch ，目录号：109-547-003），按照供应商的说明用甘油和 dH 2 O 重悬，并储存在 -20 °C。
29. DAPI（Sigma，目录号：D9542-5mg），储存于 4°C
30. 一次性湿巾 KIMTECH ® Science 精密湿巾，7552（Carl Roth，目录号：AA64.1）
31. Fluoromount -G（电子显微镜科学，目录号：17984-25）
32. 用于显微镜的 Leica Microsystems F 型浸油（Fisher Scientific，目录号：11944399）
33. 聚-L-赖氨酸溶液（见配方）
34. 4% PFA 溶液（见配方）
35. 透化缓冲液（见配方）
36. 稀释缓冲液（见配方）
37. 洗涤缓冲液（见配方）

设备

1. Thermo Scientific Precision Water Bath GP 15-D 5L 和 10L（双）（Thermo Scientific，目录号：TSGP15D）
2. 伯爵夫人TM II FL 自动细胞计数器（Thermo Fisher Scientific，Invitrogen，目录号：AMQAF1000）
3. Centrifuge 5804R（Eppendorf，目录号：5804000520）
4. Zeiss Axio Observer 3 LED 或 DMi8 Leica 宽场显微镜
5. VWR Rotator Multimix 230V Swis （VWR Collection，目录号：444-0501）
6. 弯曲和锋利的镊子（VWR，目录号：232-0078）
7. 扫描激光共聚焦显微镜（徕卡，型号：SP5）

软件

1. ImageJ/Fiji 软件版本 1.53n（可下载： https ://imagej.net/ ）

程序

A. 细胞解冻

1. 通过将供应商提供的所有补充剂添加到基础培养基瓶中，制备人类星形胶质细胞培养基、人类周细胞培养基和内皮细胞培养基。
2. 使用前在室温下预热所有介质。
3. 用 PLL 溶液预涂两个 T75 烧瓶（见表 1），用于人类周细胞和人类星形胶质细胞系的subcutluring 。
4. 在室温下孵育烧瓶至少 1 小时。
5. 孵化后，吸出 PLL 溶液，在每个烧瓶中加入 15 mL 适当的培养基，然后将它们放入培养箱（37°C，5% CO 2 ）以平衡培养基。
6. 同时，在 T75 烧瓶中加入 15 mL 的内皮培养基，然后放入培养箱中。
7. 从液氮中取出小瓶细胞（星形胶质细胞、周细胞和hCMEC /D3）。
8. 37°C的水浴解冻小瓶，直到只剩下少量冰。
9. 用适当的介质将细胞悬液从冷冻管中移入 T75 烧瓶中。用 1 mL 新鲜培养基冲洗小瓶，以确保所有细胞都转移到 T75 烧瓶中。
10. 第二天更换所有烧瓶的介质。

B. 96 孔 GRI3D 板的制备

1. EGM-2 内皮细胞生长培养基-2 BulletKit的所有成分添加到基础培养基瓶中，制备有机体培养基，VEGF除外。使用前让它达到室温。
2. 在无菌环境中，从盖子上取下 96 孔 GRI3D 板并打开盖子。
3. 使用移液器吸头，轻轻去除板上的保护膜。
4. 通过在每个井的储液器中放置一个吸气器来吸出液体。一旦液体从储液罐中取出，将吸气器放在井内，并去除微孔上方的多余液体。小心不要触摸微孔，因为吸气器会损坏它们（图 1A - 侧视图示意图）。
5. 从所有孔中取出液体后，在每个孔中加入 200 μL的有机体培养基，然后将板放入培养箱中，直到有机体细胞悬浮液准备好（步骤 D）。

C. 胰蛋白酶化星形胶质细胞、周细胞和内皮细胞

1. 使用前让 0.05% 胰蛋白酶溶液达到室温。
2. 用 10 mL 的预热有机体介质准备三个 50 mL Falcon 管。将管标记为星形胶质细胞、周细胞或hCMEC /D3 细胞。
3. 对于每个细胞系，将其烧瓶从培养箱中取出，吸出培养基，用 10 mL 的 DPBS 洗涤，去除 DPBS，然后加入 5 mL 的 0.05% 胰蛋白酶。将烧瓶放回培养箱中3-5分钟。
4. 在烧瓶进行胰蛋白酶消化时，准备三个 0.5 mL 管，其中含有 10 μ L台盼蓝染色剂，并用星形胶质细胞、周细胞或hCMEC /D3 细胞标记三个细胞计数室载玻片。
5. 对于hCMEC /D3 细胞，检查烧瓶中的细胞是否已被胰蛋白酶化，并在烧瓶中加入 5 mL 的有机体培养基以中和 5 mL 的胰蛋白酶。移液器几次以打破细胞团块。
6. 将 10 mL 的hCMEC /D3 细胞悬浮液（5 mL 胰蛋白酶 + 5 mL 有机体介质）从 T75 烧瓶移至相应的标记猎鹰管。管中的最终体积应为 20 mL。
7. 充分混合细胞悬浮液，以确保没有细胞团块，并且细胞均匀分布在整个体积中。
8. 从hCMEC / D3 细胞悬液中吸取 10 μL ，并在 0.5 mL 管中与 10 μL 台盼蓝染料混合。将10 μ L的台盼蓝染色细胞悬液移至标记的细胞计数室载玻片的每一侧。
9. 对星形胶质细胞和周细胞重复步骤 5-8 。
10. 将三个 Falcon 管以 180 × g离心5 分钟。

D. 计算细胞浓度，制备类器官细胞悬液

1. 将细胞计数室滑入细胞计数器。
2. 选择适当的细胞计数配置文件，然后按计数。
3. 记录载玻片每一侧的每毫升活细胞数和活细胞百分比。计算活细胞的平均数量。我们预计每个融合的 T75 烧瓶中有 3 – 500 万个星形胶质细胞、5 – 700 万个周细胞和 8 – 1200 万个 hCMEC /D3 细胞。
4. 计算将每个细胞沉淀重悬至最终浓度为 2.75 × 10 6 个细胞/mL 所需的介质（查看本节末尾的注释 1 以了解计算说明）。
5. 从离心机中取出 Falcon 管。每个管的底部应该有一个可见的细胞沉淀。
6. 从每个 Falcon 管中吸出有机体介质，而不会干扰每个管底部的细胞颗粒。重要的是要尽可能多地去除培养基，以确保准确的细胞数量。
7. 适量的有机体培养基重新悬浮每个细胞沉淀。上下移液，以确保细胞在整个培养基体积中均匀分布。
8. 在 5 mL 管中，混合等体积的星形胶质细胞、周细胞和hCMEC /D3 细胞悬浮液。这代表了类器官细胞悬浮液，它由所有三种细胞类型组成，比例为 1:1:1。

E. 类器官形成

1. 一旦有机体细胞悬浮液准备就绪，从培养箱中取出 96 孔 GRI3D 板，并从每个孔中吸出有机体介质。尽量去除尽可能多的介质，而不会干扰微孔。使用 P20 移液器吸头执行此操作（请阅读本节末尾的注释）。
2. 混合类器官细胞悬液，确保细胞混合均匀。
3. 在每口井的微孔顶部（不在水库中）添加 60 μL的有机体细胞悬浮液。
4. 检查显微镜下的孔。您应该看到漂浮在微孔上方的细胞（图 1B）。
5. 将盘子放入培养箱中至少 20 分钟。避免板的突然移动，以防止 60 - μL有机体细胞悬浮液泄漏到水库中。
6. 20-30 分钟后，在显微镜下检查细胞，以确保它们已落入微孔中（图 1B）。
7. 轻轻地将 200 μ L的有机体介质添加到每个井的水库中，确保不会从微孔中冲洗掉细胞。
8. 24 小时后，在显微镜下检查有机体的形成。细胞应该已经自组装成有机体（图 1B）。如果细胞没有聚集（例如，由于起始细胞悬浮液的低活力、细菌污染或细胞毒性），则需要重复类器官的形成。
9. 水库中吸出有机体介质，并添加 200 μL的新鲜预热有机体介质。也无需从微孔顶部吸出培养基。
10. 将有机体放回孵化器中 24 小时。在 48 小时，有机体已准备好进行实验（图 1B）。

图 1. 使用 96 孔SunBioscience GRI3D 微阵列板形成血脑屏障类器官。
A. 96 孔 GRI3D 微阵列板的示意图和具有其微阵列和相关储库的单孔的代表性相差图像。比例尺，1 毫米。改编自西蒙诺等。（2021 年）。侧视图示意图（未按比例）突出显示了水库中以及 PEG-水凝胶微孔上方的介质。 B.类器官形成过程中微阵列的相差图像。在 0 小时，细胞被添加到空井的顶部，并均匀分布在整个介质中。在 0.5 小时时，细胞已落入微孔并更紧密地聚集在一起，导致在 24 小时内形成自组装的类器官。在 48 小时，有机体已准备好进行治疗。比例尺，200 μm 。

F. 使用 CellEvent Caspase-3/7 染料评估类器官的活力

1. 48 小时后，在有机体培养基中每孔制备 200 μL的2 μM CellEvent Caspase - 3/7 染料（稀释度为 1:1,000）。
2. 从井的水库中取出培养基，并添加新制备的含有CellEvent Caspase-3/7 染料的培养基。
3. 将板放回培养箱中至少 30 分钟。
4. 30 分钟后，使用带有 GFP/FITC/ AlexaFluor 488滤光片的 DMi8 Leica 宽场评估 CellEvent Caspase-3/7 染料的信号。如果没有明亮的核心，则类器官是可行的，可用于进一步的实验（图 2）。

CellEvent Dye 在 48 小时评估血脑屏障类器官的活力。
第一行显示从 Caspase 3/7 CellEvent染料获得的信号，第二行显示与类器官的明场图像合并的半胱天冬酶信号。第一列显示 Caspase 3/7 CellEvent 染料在活有机体中的信号。信号微弱，显示单个凋亡细胞的斑点。第二列显示了无活力的类器官中明亮的凋亡核心。 Caspase 3/7 CellEvent染料图像的强度已调整到相同的动态范围。比例尺，150 µm。

G. 使用 BBB 类器官阵列进行转胞吞检测

1. 准备四管以下溶液（计算每孔 150 μL的体积，并始终准备超过每个条件所需的总体积）：
a. 管 1：仅包含有机体介质的未经处理的样品。
b. 管 2：含有有机体培养基的小鼠脑穿梭治疗，含有 100 nM的针对小鼠转铁蛋白受体的定制人源化单价抗体。
c. 管 3：人脑穿梭治疗，含有类器官介质，含有 100 nM的针对人转铁蛋白受体的定制人源化单价抗体。
d. 管 4：IgG 对照，含有 100 nM非靶向人 IgG 的有机体培养基。
2. 从井的水库中吸出有机体介质。等待几分钟，使微孔顶部的多余介质泄漏到水库中。再次从水库中吸出培养基。
3. 井中，在水库中加入 150 μL的相应处理剂。
4. 将板在37°C、5% CO 2下孵育4 小时。
5. 在孵化步骤中, 准备 4% 多聚甲醛 (PFA) 溶液 (见表 2)。
6. 4 小时后，从每口井的水库中吸出处理溶液，并用150 μL的有机体介质洗涤。将有机体孵育 5 分钟，吸出培养基，然后再次洗涤。重复六次。
7. 培养基，每孔加入 200 μL的 4% PFA 溶液。
8. 用 4% PFA 溶液孵育 45 min 后，除去 4% PFA 溶液，每孔加入 200 μL DPBS 。
9. 几分钟后，从水库中取出 DPBS，加入 200 μL新鲜 DPBS 。
10. 染色前将板在 4°C 下存放过夜。

H. BBB 类器官的免疫染色，以可视化脑穿梭结构

1. 如配方部分所述，准备透化缓冲液 (PB)、稀释缓冲液 (DB) 和洗涤缓冲液 (WB) 。
2. 从井水库中吸出 DPBS。
3. 孔加入 150 μL PB ，室温孵育 1 h。
4. 孵育结束后，从容器中吸出 PB，加入 150 μL WB 。再用 WB 清洗一次，以去除任何 PB 痕迹。将最后一次洗涤留在盘子中，直到下一步。
5. 将板中的类器官冲洗到 1.5 mL 蛋白质LoBind管中。要冲洗有机物，将 150 μ L的 WB移液器直接放在微孔顶部。重复几次，将所有类器官从微孔中取出。移取溶液并将其转移到蛋白质LoBind管中。请记住收集从微孔顶部泄漏到水库中的任何溶液，因为它也将包含类器官。您可以将经过相同处理的孔中的类器官汇集到同一管中。
6. 重复步骤 5，将 150 μ L的 WB 添加到水库中。
7. 一旦有机体转移到 1.5 mL 管中，让它们在 2-3 分钟内沉淀到底部（图 3）。
8. 当有机体正在沉淀时，稀释 DB 中的二级抗体溶液（山羊抗人类 AF488 1:250）和 DAPI（1:5,000，库存：5 mg g）。每管准备 150 μ L溶液。
9. 使用连接到吸气器的移液器尖端，从含有类器官的蛋白质 LoBind 管中取出 WB，在管底部留下 50 μ L。请勿将移液器尖端接触管底部，以免吸入有机物。
10. 加入 150 μ L抗体溶液。
11. 在室温下在黑暗中在旋转摇床上孵育 1 小时。
12. 孵化后，让有机体沉淀到管底。
13. 添加 1 mL 的WB，并将管倒置几次以重新悬浮有机体。
14. 让有机体沉淀到底部，然后取出 WB。
15. 重复步骤 13 和 14 三次。

I. 在成像幻灯片上安装类器官

1. 吸出WB，但在管中留下 50 μ L溶液。
2. 将 20 μL 移液器设置为 20 μL，上下移液，将有机物重新悬浮到 50 μL溶液中。
3. 取 20 μL溶液，让有机物沉淀在移液器尖端的底部。
4. 将类器官转移到显微镜载玻片上，并尽可能减少在载玻片上添加的液体量。
5. 如果您愿意，可以重复步骤 3 和 4，以在载玻片上放置更多类器官。
6. 使用kimwipe组织小心去除多余的 WB，同时避免接触有机体（图 3）。
7. 添加 40 μ L的安装介质，并使用镊子在顶部轻轻添加盖玻片。
8. 让载玻片在室温下过夜干燥。
9. 第二天成像，或在 4°C 下储存。

图 3. 悬浮并转移到载玻片上的血脑屏障类器官。
左图显示了直接转移到 1.5 mL 管中的悬浮液中可见的 BBB 类器官。中央图像显示 BBB 类器官在 2-3 分钟后沉淀在管底部。右图显示了转移到显微镜载玻片上的可见 BBB 类器官。

J. 类器官的共聚焦成像

1. 使用激光扫描共聚焦显微镜（例如Leica SP5）和 HCX PL APO CS 40 × /1.3 油物镜和变焦 = 1.26 对类器官进行成像。这导致 512 × 512 帧的像素大小为 604.5 nm 。
2. 找到一个有机体，并相应地设置采集设置。至少需要设置两个通道-一个用于 DAPI（紫外激光），另一个与所用二抗的荧光团匹配，在本例中为AlexaFluor 488（488 激光）。在 Leica SP5 上，调整光谱检测器的范围，使两个荧光团之间没有重叠。
3. 设置针孔以实现 1 μm 的光学截面厚度。
4. 专注于类器官的核心，并检查激光功率和增益是否最大化 12 位动态范围，而不会出现像素饱和。
5. 设置一个总深度为 3.5 μm的z堆栈，使用 8 个步骤，核心放置在中心（0.5 μm 步长）。
6. 每个实验的每个条件下至少成像 20 个有机体。所有图像都存储在一个 . lif文件，具有区分条件的单独名称。

数据分析

用于分析的代码可在此处获得： https ://github.com/phagozyt/Fiji/blob/fb365d7c1275a6b013dc32b982504dfef9653d42/MIP75ROI 。
简而言之，用户提供输入目录的位置，其中 . .lif文件，以及应存储结果的输出目录的位置（图 3）。然后用户选择哪个通道将用作掩码 (DAPI)，以及哪个通道将用于分析（488 通道）。这取决于采集的顺序，例如，如果 DAPI 作为第二个通道采集，则选择 Ch2。收到用户输入后，宏会打开存储在 . .lif文件。它将多通道 z 堆栈转换为多通道最大投影图像（图 4）。然后它将多通道最大投影图像拆分为单独的通道图像，并通过阈值处理将 DAPI 最大投影图像创建一个蒙版（图 4）。然后，宏会根据掩码的大小和形状将掩码转换为感兴趣区域 (ROI)。太小或在图像边缘发现的类器官不符合 ROI 标准，并被排除在外。然后将 ROI 减少到 75 %，仅覆盖类器官的核心，并排除类器官内皮表面的测量值。缩小的 ROI 覆盖在感兴趣的通道（488 通道）的顶部，并计算相关测量值（图 4）。然后该脚本继续移动到存储在 . .lif文件。宏存储一个图像，该图像显示使用具有 75% ROI 的 DAPI 图像生成的掩码、所有通道的最大投影的叠加以及具有 75% ROI 的感兴趣通道的最大投影图像。处理完所有图像后，会生成一个 .csv 文件，其中包含图像中识别的所有对象的测量值。我们通过将原始积分密度除以面积 (µm 2 ) 来报告每 µm 2的荧光强度（图 4 中的灰色柱）。

图 4. 用于评估运输到血脑屏障类器官的成像采集和分析的标准化工作流程。
获得了围绕有机体核心的 3.5 μm 的 z 堆栈。为了启动分析，用户定义输入和输出目录、掩码通道 (DAPI) 和感兴趣的通道 (488)。 z 堆栈被转换为最大强度投影，并基于 DAPI 进行分段，以生成掩码。然后将掩码缩小到 75% 以定义 ROI，该 ROI 用于测量感兴趣的通道。对下一张图像自动重复该过程。处理完所有图像后，用户打开保存的 .csv 文件，计算RawIntDen /Area（灰色列），并将结果绘制为每 µm 2的荧光强度。在所有图像中，细胞核都用 DAPI（青色）标记。比例尺，100 µm。

在第一次开始分析之前，用户需要在斐济设置测量值。为此，用户可以转到分析设置测量...并选择面积、平均值、积分密度和显示标签。这些是我们分析所需的最少选择，但如果用户愿意，可以选择更多。

用户可能需要通过以下方式调整宏：
1. 宏设置为 open 。 lif文件，这是徕卡的专有文件。如果图像是用不同的显微镜获得的，用户必须相应地修改代码。
2. 使用的阈值是“三角形暗”（第 138 行）。如果用户发现此阈值在他们的图像上表现不佳，则可以探索其他选项。在斐济打开具有代表性的 DAPI 最大投影图像，转到图像调整自动阈值，然后在方法中选择全部尝试。这将打开具有 20 个不同阈值结果的图像。用户可以选择哪一个表现最好，并相应地修改代码。
3. 用户可以选择使用不同类型的投影。这可以在第 105 行进行修改。
4. 如果类器官的大小不同，用户可以在第 148 行进行调整。
5. 如果用户希望查看不同大小的 ROI，他们可以修改第 165 行。

笔记

1. 我们只使用 P0（解冻）到 P3 之间的原代细胞，以及从 P4 到 P15 的hCMEC /D3 细胞。每次解冻新小瓶时，我们都会制作新的培养基，并且超过一个月不使用任何培养基。
2. 细胞来源非常重要，因为我们发现来自同一产品的不同批号可能表现不同。在实验之前，特别是如果使用新的批号，用户需要通过常见标记物的免疫染色来评估每个细胞来源，例如星形胶质细胞的 GFAP、周细胞的 NG2 或 CD13 以及hCMEC /D3 细胞的 CD31。此外，无论何时使用新的批号，用户都应进行活力测定，以确保类器官内没有凋亡核心。

食谱

1. 聚-L-赖氨酸溶液（表 1）

表 1. 聚-L-赖氨酸溶液（每个 T75 烧瓶 10 mL）

试剂 10 毫升的量供应商产品编号最终浓度
超纯水 9.850 毫升英杰公司 C10283
聚-L-赖氨酸 150微升西格玛 P4832-50ml 2微克/厘米2

2. 4% PFA 溶液（表 2）

表 2. 4% 多聚甲醛溶液

试剂数量供应商产品编号最终浓度
16% 多聚甲醛 10 毫升电子显微镜科学 50-980-487 4% PFA
DPBS 30 毫升吉布科 14190-094

3. 透化缓冲液（表 3）

表 3. 透化缓冲液

试剂最终重量百分比库存数量供应商产品编号
驴血清 10% 100% 1毫升 Canvax生物技术公司 SUD004
海卫一 X 0.6% 10% 0.6 毫升罗氏 11332481001
DPBS 8.4 毫升吉布科 14190-094

4. 稀释缓冲液（表 4）

表 4. 稀释缓冲液

试剂最终重量百分比库存数量供应商产品编号
驴血清 10% 100% 0.1 毫升 Canvax生物技术公司 SUD004
海卫一 X 0.1% 10% 0.01 毫升罗氏 11332481001
DPBS 0.89 毫升吉布科 14190-094

5. 洗涤缓冲液（表 5）

表 5. 洗涤缓冲液

试剂最终重量百分比库存数量供应商产品编号
海卫一 X 0.1% 10% 0.5 毫升罗氏 11332481001
DPBS 49.5 毫升吉布科 14190-094

致谢

最初的协议在Simonneau中描述等。（2021 年）。我们感谢 SUN bioscience 在原始出版物中支持将 Gri3D 板用于 BBB 类器官的生长。 CS 得到了罗氏博士后奖学金 (RPF ID:491 2018-2020) 的支持。

利益争夺

在编写本协议期间，所有作者都是 F. Hoffmann-La Roche 的有偿雇员。

参考

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Hajal, C., Offeddu, GS, Shin, Y., Zhang, S., Morozova, O., Hickman, D., Knutson, CG 和 Kamm, RD (2022)。用于血管通透性分析的工程人血脑屏障微流体模型。国家协议17（1）：95-128 。
Nzou , G., Wicks, RT, Wicks, EE, Seale, SA, Sane, CH, Chen, A., Murphy, SV, Jackson, JD 和 Atala, AJ (2018)。具有功能性血脑屏障的人类皮质球体，用于高通量神经毒性筛查和疾病建模。科学代表8（1）：7413。
Sade, H.、Baumgartner, C.、Hugenmatter, A.、Moessner, E.、Freskgard, PO 和 Niewoehner, J. (2014)。人类血脑屏障转胞吞作用测定揭示了受 pH 依赖性受体结合影响的抗体转胞吞作用。公共科学图书馆一号9(4)：e96340。
Simonneau，C.，Duschmale，M.，Gavrilov，A.，Brandenberg，N.，Hoehnel，S.，Ceroni，C.，Lassalle，E.，Kassianidou，E.，Knoetgen，H.，Niewoehner，J.，等人。（2021 年）。使用血脑屏障类器官阵列研究受体介导的抗体转胞吞作用。流体屏障CNS 18(1): 43。
Urich , E., Patsch , C., Aigner, S., Graf, M., Iacone , R. 和Freskgard , PO (2013)。血脑屏障的多细胞自组装球体模型。科学代表3：1500。