材料和试剂

1. 250 mL锥形瓶（ Stoelzle Medical，目录号：21226368000）
2. 0.5 mL Eppendorf 管（Eppendorf，目录号： 0030121.023）
3. 一次性比色皿（BRAND，目录号： 759015）
4. 1.5 mL Eppendorf 管（Eppendorf，目录号： 0030120.086）
5. 细胞刮刀（ Sarstedt ，目录号： 83.3951）
6. 15 mL聚丙烯锥形管（Falcon，目录号： 352096）
7. 细胞过滤器40 µm（Falcon，目录号：352360）
8. 96孔BRAND板（Life Science Products，目录号： 781602）
9. 5 mL一次性注射器（BD，目录号：309050）
10. Luna细胞计数载玻片（ Biocat ，目录号：L201B1C3GB）
11. 6厘米培养皿（TTP，目录号：93060 ）
12. 肠沙门氏菌血清型鼠伤寒 SL1344 表达红色荧光蛋白 (RFP) (Birmingham et al. , 2006 ; Wu et al. , 2017)
13. 溶原肉汤（LB Broth）Lennox（Roth，目录号：X964.2）
14. 甘油（Sigma，目录号：G5516-100ML）
15. 磷酸盐缓冲盐水（PBS；Lonza，目录号： 17-515 F）
16. Agar-Agar Kobe I（Roth，目录号： 5210.3）
17. CASY Cup（OMNI Life Science，目录号： 5651794）
18. CASY Ton Buffer（OMNI Life Science，目录号： 5651808）
19. Aqua bidest （Fresenius Kabi ，目录号： 16.231）
20. 庆大霉素（Gibco，目录号： 15750-037）
21. L-谷氨酰胺（Lonza，目录号： BE17-605E）
22. Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM，Pan Biotech TM ，目录号： P04-01500）
23. 胎牛血清（FBS，Pan Biotech TM ，目录号： P30-3031）
24. BV650抗小鼠/人CD11b（ BioLegend ，目录号： 101239）
25. APC-R700大鼠抗小鼠CD45（ BDHorizon TM ，目录号： 565478）
26. BV421大鼠抗小鼠F4 / 80（BD Biosciences；目录号： 565411）
27. PerCP-eFluor TM 710 抗小鼠 Ly6G（Invitrogen；目录号： 46-9668-82）
28. FITC抗小鼠CD3（ BioLegend ，目录号： 100204）
29. FITC抗小鼠CD19（ ImmunoTools ，目录号： 22220193S）
30. FITC抗小鼠CD49b（ BioLegend ，目录号： 103503）
31. PE-Cyanine7抗小鼠iNOS （Invitrogen；目录号： 25-5920-80）
32. APC 抗小鼠 ARG1（Invitrogen，目录号： 17-3697-82）
33. BD Cytofix / Cytoperm TM （BD Biosciences，目录号： 51-2091K7）
34. BD PermWash TM （BD Biosciences，目录号： 51-2090K7）
35. 50 mL聚丙烯锥形管（Falcon，目录号：352070）
36. 氯胺酮（ Livisto ，目录号：6680219）
37. 甲苯噻嗪（ Animedica ，目录号：7630517）
38. Omnican F 注射器（Braun，目录号：91615025）
39. 一次性皮下注射针100 Sterican R（Braun，目录号：4657519）
40. Pen-Strep（Lonza，目录号：DE17-602E）
41. 红细胞裂解缓冲液（R&D，目录号：WL2000）
42. 吖啶橙/碘化丙啶染色剂（ Biocat ，目录号：F23001 ）
43. LB培养基（见食谱）
44. 含有 30% 甘油的 LB 培养基（参见食谱）

设备

1. 层流柜； EuroClone Safe Mate Eco 1.2 ( Politakis Laborgeräte ，目录号：EN 12 469）
2. 摇动培养箱（VWR，目录号：GFL 3031）
3. 贺利氏® HERAcell ® CO 2培养箱（Thermo Fisher Scientific，目录号： 3615-45 )
4. 光度计（Eppendorf， BioPhotometer D30，目录号：6133000001）
5. 离心机（Hettich Micro 200R 和Rotanta 460R，目录号：Z652113、Z623520）
6. CASY TT 计数系统（OMNI Life Science，目录号：TT-20A-2571）
7. CytoFLEX S V4-B4-R2-I2 流式细胞仪（13 个检测器，4 个激光器，Beckman Coulter，目录号：C01161）
8. LUNA 自动细胞计数仪 ( Biocat , L10001-LG)

软件

1. FlowJo v10.7.0（BD Biosciences， https: //www.flowjo.com/solutions/flowjo ）
注意：任何用于分析流式细胞仪数据的软件包都可以与此协议一起使用。

程序

A. 鼠伤寒沙门氏菌 ( S. tm) 原液的制备
1. 取出一份表达红色荧光蛋白 (RFP) 的肠沙门氏菌鼠伤寒血清型 SL1344。
2. 在室温下解冻等分试样。
3. S. tm移液器放入 250 mL 锥形瓶中的 10 mL LB 培养基中。
4. 用锡箔盖住烧瓶的顶部。
5. 孵育过夜。
6. 第二天，将 50 μL 的隔夜培养物移液到 10 mL 的新鲜 LB 培养基中，放入250 mL Erlenmeyer 烧瓶中。
7. S.tm的隔夜文化。清洗和消毒250 毫升锥形瓶。
8. 用锡箔盖住烧瓶的顶部。
9. 在 200 rpm 和 37°C的摇动培养箱中孵育培养物1 – 2 小时。
10. 校准光度计，在一次性比色皿中使用 500 μL 的 LB 介质作为空白。
11. 测量 OD 600 ，检查S. tm是否达到 0.5。
600在 0.5 – 0.7之间时， S. tm达到最佳对数生长期。
注意：如果 OD 600值低于 0.5，则如上所述继续在 250-mL 锥形瓶中孵育培养物，直到 OD 600值达到 0.5。值得注意的是，S.tm 密度每 20 分钟重复一次。如果 OD 600值高于 0.7，则用 LB 培养基 1:1 稀释培养物，然后在 250 mL 锥形瓶中孵育，直到 OD 600值为 0.5。
12. 将培养物转移到 50 mL 锥形管中。
13. S. tm培养物在室温下以4、967 × g离心5分钟。
14. 弃去上清液。
15. 将颗粒重新悬浮在 1 mL 新鲜制备的 LB 介质 + 30% 甘油中。
16. 在 0.5-mL Eppendorf 管中制备 50 µL 等分试样，并将其储存在 -20°C。

B. S. tm培养至最佳生长期
1. 解冻一份S. tm库存。
2. 将 10 µL 等分试样移液到250 mL 锥形瓶中的10 mL LB 培养基中，然后用锡纸盖住烧瓶的顶部。
3. 在 200 rpm 和 37°C 的摇动培养箱中孵育过夜。
4. 第二天，将 50 µL 这种过夜培养物移液到250 mL 锥形瓶中的10 mL LB 培养基中，然后用锡纸盖住烧瓶的顶部。
5. S.tm的隔夜文化。清洗和消毒250 mL 锥形瓶。
6. 在 200 rpm 和 37°C的摇动培养箱中孵育1 – 2 小时。
7. 校准光度计，在一次性比色皿中使用 500 μL 的 LB 介质作为空白。
8. 测量 OD 600以检查S. tm是否达到 0.5，这相当于最佳对数生长期。
注意：如果 OD 600值低于 0.5，则如上所述继续在 250-mL 锥形瓶中孵育培养物，直到 OD 600值达到 0.5。值得注意的是，S.tm 密度每 20 分钟重复一次。如果 OD 600值高于 0.7，则用 LB 培养基 1:1 稀释培养物，然后在 250 mL 锥形瓶中孵育，直到 OD 600值为 0.5。

C. 使用Casy计数系统计数可行的S. tm
1. 使用 45 µm 毛细管。
2. 装有 10 mL 新鲜Casy ton 缓冲液的新Casy杯来测量背景。
3. 选择背景测量程序（表 1 背景测量）。
4. 测量背景。这应该低于 30 个计数和 1 µm 的大小。否则，清洗系统。
5. 用 10 mL 的Casy ton缓冲液准备一个新的Casy杯，并添加 5 μL 的S. tm OD 600 0.5。
6. 轻轻摇晃。
7. 将样品放在测量单元下方。
8. 选择测量 1 – 3 µm 的程序（表 1 S. tm 测量）。
9. 措施。
10. 单击下一步，以获得可行计数/mL = 可行S. tm / mL 的数量。
600为 0.5的新鲜制备的 S.tm 培养物中的活菌计数应在 2.5 × 10 8 –3 × 10 8活菌计数/ mL 之间。
11. 测量完成后，取出样品杯，加入一个新的装有 10 mL Casy ton 缓冲液的Casy杯。
12. 执行五次Casy Clean。
13. 选择洗涤程序（表 1 洗涤程序）。
14. 洗涤完成后，再次检查背景。
15. 如果背景低于 30，可以关闭Casy计数系统。否则，继续洗涤。

表 1. CASY TT 计数系统程序
背景
测量测量
鼠伤寒沙门氏菌洗涤程序
毛细管 45 µm X 轴：5 µm 45 µm X 轴：3 µm 45 µm X 轴：5 µm
样品量 200 µL 循环：1 200 µL 循环：3 200 µL 循环：10
稀释 1.001e+00 2.001e+03 1.001e+00
Y轴汽车汽车汽车
评估光标 1.00 – 4.89 微米 0.75 – 2.93 微米 0.00 – 5.00 µm
规范。光标 0.5 – 4.89 微米 0.3 – 2.93 微米 0.00 – 5.00 µm
％计算 %通过碎片：开 %通过碎片：开 %通过碎片：开
聚合。正确的：汽车汽车自动 P
界面 Par P.Feed : 开 Par P.Feed : 开 Par P.Feed : 开
打印模式手动图形：开手动图形：开手动图形：开

D. 骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 的制备
Zanoni等人已经描述了 BMDM 的制备。 (2012;doi:10.21769/BioProtoc.225.)。

可以在以下位置找到演示该过程的视频： https://www.jove.com/de/v/52347/isolation-intravenous-injection-murine-bone-marrow-derived 。
图 1 显示了骨髓衍生巨噬细胞的产生和 S.tm 感染的示意图。

图 1. 实验装置的示意图，显示了骨髓衍生巨噬细胞的生成和S.tm感染。
未感染和感染的 BMDM 的不同形态在ScanR成像平台中可视化（图片由Demetz E. 友情提供）。

1. 腹腔注射 50 μL 的100 mg/kg 氯胺酮 + 10 mg/kg Xylazine来麻醉野生型 C57Bl/6N 小鼠。
注意：在小鼠腹腔注射中可以找到演示一般程序的视频： https ://researchanimaltraining.com/articles/intraperitoneal-injection-in-the-mouse/ 。
2. 对深度麻醉的小鼠进行安乐死。因此, 将一个大镊子放在麻醉小鼠头骨的底部后面, 并以 45° 角急剧向后拉尾巴。
3. 将动物固定在聚苯乙烯泡沫塑料板上，并用 75% 酒精喷洒动物表面。
4. 用无菌剪刀从脚后跟向上切割，从一条腿上去除皮肤和肌肉组织。
5. 在股骨头周围切开。
6. 在膝关节中间切开。小心不要伤到骨头。
7. 切开踝关节。
8. 用纸巾去除多余的肌肉。
9. 拉上大腿，将股骨头从髋关节中移除。
10. 将骨头放入冰上含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 PBS。
11. 移动到层流罩，并在冰上执行所有步骤。
12. 用一把无菌剪刀剪开骨头的末端。
13. 在 50 毫升猎鹰管上放置一个 40 微米的细胞过滤器。
14. 冲洗骨髓：
a. 使用一次性皮下注射针头和 5 毫升注射器。
b. 用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 PBS 填充注射器。
c. 将一根针放在打开的骨头的一端。
d. 将骨髓冲洗到 40 µm 细胞过滤器上。
e. 重复冲洗骨头，直到它完全变白。
15. 用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 10 mL PBS 清洗细胞过滤器。
16. 使用注射器的柱塞，通过细胞过滤器拉紧细胞。
17. 用含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 10 mL PBS 清洗细胞过滤器。
18. 将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 锥形管在 300 × g和 4°C 下离心 5 分钟。
19. 用双蒸水按 1:10 稀释红细胞裂解缓冲液
20. 弃去上清液。
21. 在 2 mL 稀释的红细胞裂解缓冲液中重新悬浮颗粒。
22. 在室温下孵育 3 分钟。
23. 在红细胞裂解缓冲液上加入 15 mL 的 PBS，其中含有 1% 青霉素和 1% 链霉素。
24. 将装有冲洗过的骨髓的 50 mL 锥形管在 300 × g和 4°C 下离心 5 分钟。
25. 弃去上清液。
26. 在含有 1% 青霉素和 1% 链霉素的 15 mL PBS 中重新悬浮颗粒。
27. 重复步骤 24-26。
28. 离心 50 mL 锥形管，弃去上清液。
29. 在 45 mL 的 DMEM 培养基中重新悬浮细胞颗粒，辅以 10% FBS、1% L-谷氨酰胺、1% 青霉素、1% 链霉素和50 ng/mL 重组鼠 M-CSF。
30. 将 15 mL 的细胞悬浮液移入三个 20 厘米的猎鹰培养皿中。
31. 每隔一天更换一次培养基。
32. 在第 5 天，可以收获细胞（程序 E）。

E. 细胞的收获和计数
1. 从细胞培养皿中取出培养基。
2. 用 10 mL 的 PBS 清洗细胞两次。
3. 添加 8 mL 的 DMEM 培养基，辅以 10% FBS 和 1% L-谷氨酰胺。
4. 使用一次性细胞刮刀刮擦细胞。
5. 用另外 2 mL 的 DMEM 培养基清洗盘子，辅以 10% FBS 和 1% L-谷氨酰胺。
6. 将细胞转移到 50 mL 锥形管中。
7. 关闭试管，将细胞倒置 2-3 次。
8. 将 9 μL 的细胞悬浮液放入 0.5 μL Eppendorf 管中。
9. 将 1 μL 吖啶橙/碘化丙啶染色溶液与细胞等分混合。
10. 将 10 μL 的混合物放入 Luna 细胞计数幻灯片中。
11. 使用 LUNA-FL 荧光和明场自动细胞计数器对细胞进行计数。
注意：在分离和培养两条后腿的骨髓后，从一只小鼠中获得大约 4.5 × 10 7 个细胞。
12. 将细胞播种在 6 厘米培养皿中，密度为 1.5 × 10 6 个细胞/mL，在 DMEM 培养基中添加 10% FBS 和 1% L-谷氨酰胺。
13. 为荧光减一 (FMO) 控制添加四个额外的培养皿（参见步骤 G3）。
14. 让细胞在细胞培养箱中过夜。

F. S. tm体外感染骨髓来源的巨噬细胞
1. 在感染复数 10 (MOI 10) 处用S. tm感染 BMDM 。因此，添加比细胞多10倍的S. tm。
600为 0.5 的S.tm 培养物可用于制备新的 S.tm 等分试样（程序 A ），或丢弃。
2. 将细胞在细胞培养箱（5% CO 2 ，37°C）中孵育 1 小时。
3. 去除含有非吞噬S. tm的培养基。
4. 用 1 mL 的 PBS + 25 μg/mL 庆大霉素清洗细胞两次。
5. 添加 1 mL 的 DMEM 培养基，辅以 10% FBS、1% L-谷氨酰胺和 25 μg/mL 庆大霉素。
6. 在细胞培养箱中孵育细胞 4 小时。

G. 培养的 BMDM 的流式细胞术染色
1. 细胞外染色
a. 使用一次性细胞刮刀在培养基中刮取 BMDM。
b. × g和 4°C下离心5 分钟。
c. 弃去上清液。
d. 将颗粒重新悬浮在 1 mL 的 PBS 中，并将其转移到1.5 μL Eppendorf 管中。
e. 在 10,860 × g和 4°C 下短时间旋转 30 秒，使细胞沉淀。
f. 弃去上清液。
g. 将颗粒重新悬浮在 50 μL 的表面抗体混合物中（PBS 中的所有抗体 1:200；表 2）。

表 2. 流式细胞术抗体——细胞外染色。
抗体克隆公司目录编号表达于
CD3 FITC 17.A2 生物传奇 100204 T细胞
CD19 FITC PeCa1 免疫工具 22220193S B细胞
CD49b FITC HMa2 生物传奇 103503 NK细胞
CD11b BV650 M170 生物传奇 101239 中性粒细胞、单核细胞
CD45 APC-R700 30-F11 BD 地平线 565478 白细胞
F4/80 BV421 T45-2342 BD 地平线 565411 巨噬细胞
Ly6G PerCP-eFlour 710 1AB-Ly6g 英杰公司 46-9668-82 中性粒细胞

注意：为确保骨髓来源的巨噬细胞不受 T 细胞、B 细胞或 NK 细胞的污染，流式细胞仪面板中添加了针对 CD3、CD19 和 CD49b 的抗体。所有这些抗体都用 FITC 标记；因此，所有 FITC +细胞都可以排除在门控策略中（图 2）。 BMDM 培养物（未感染和感染 S.tm）的典型细胞分布如表 4 所示。

h. 4°C 避光孵育 10 分钟。
i. 用 500 μL 的 PBS 清洗。
j. 通过短时间旋转 (10,860 × g , 4°C, 30 s) 使细胞沉淀。
k. 弃去上清液。
l. 在 100 µL Cytofix / CytoPerm TM缓冲液中重悬沉淀，以渗透和固定细胞。
m. 4°C 避光孵育 20 分钟。
n. 用 Aqua bidest以 1:10稀释PermWash TM缓冲液。
o. 在 100 µL Cytofix / CytoPerm TM缓冲液上添加 500 µL 稀释的PermWash TM缓冲液。
p. 通过短时间旋转 (10,860 × g , 4°C, 30 s) 使细胞沉淀。
q. 弃去上清液。
2. 细胞内染色
a. PermWash TM缓冲液中制备细胞内抗体混合物（ iNOS 1:100 和 ARG1 1:100；表 3）。

表 3. 流式细胞术抗体——细胞内染色。
抗体克隆公司目录编号表达于
iNOS PE-花青7 长鑫通英杰公司 25-5920-80 促炎巨噬细胞
ARG1 装甲运兵车 A1exF5 英杰公司 17-3697-82 抗炎巨噬细胞

b. 将样品重新悬浮在 50 μL 的细胞内抗体混合物中。
c. 将样品在室温下避光孵育 45 分钟。
d. PermWash TM清洗细胞一次。通过短时间旋转 (10,860 × g , 4°C, 30 s) 使细胞沉淀。
e. 丢弃上清液，将颗粒重新悬浮在 200 μL 的 PBS 中。
f. 通过 40 µm 过滤器将样品转移到平底 96 孔板中。
g. 直接在流式细胞仪中进行分析。

3. 荧光减一 (FMO) 对照
a. 如步骤 G1 中所述，在额外播种的未感染和感染的 BMDM 样本中执行 BMDM 的细胞外染色（参见步骤 E13）。
b. 在 100 µL Cytofix / CytoPerm TM缓冲液上用稀释的PermWash TM缓冲液洗涤后弃去上清液。
c. 在细胞内抗体混合物中重新悬浮一个未感染和一个感染的 BMDM 细胞颗粒，仅含有针对 ARG1 的抗体。重悬细胞内抗体混合物中的其他未感染和感染的 BMDM 细胞颗粒，仅使用针对iNOS的抗体。
d. 将样品在室温下避光孵育 45 分钟。
e. PermWash TM清洗细胞一次。
f. 通过短时间旋转 (10860 × g , 4°C, 30 s) 使细胞沉淀。
g. 丢弃上清液，将颗粒重新悬浮在 200 μL 的 PBS 中。
h. 通过 40 µm 过滤器将样品转移到平底 96 孔板中。
i. 直接在流式细胞仪中进行分析。

图 2. 受感染的骨髓衍生巨噬细胞的门控策略 - 上图和未感染的骨髓衍生巨噬细胞 - 下图。
在排除双峰后，白细胞被描述为 CD45 + 。排除 T 细胞、B 细胞和 NK 细胞（CD3 – CD19 – CD49b – ），巨噬细胞门控为 Ly6G – CD11b + F4/80 + 。根据研究问题，有可能将促炎巨噬细胞表征为表达iNOS的细胞，将抗炎巨噬细胞表征为表达 ARG1 的细胞。此外，含有 S.tm 的巨噬细胞的特点是在 PE 通道中表达红色荧光蛋白 (RFP)。

数据分析

FlowJo软件用于分析数据。门控策略如图 2 所示。
在由 C57BL/6N 小鼠产生的 BMDM 中，这些小鼠要么未感染，要么被 S.tm 感染，然后进一步孵育 4 小时，分析的细胞亚群的典型值如表 4 所示。

表 4. BMDM 培养的典型细胞分布。
细胞类型门控平均值± SEM 未感染平均± SEM 感染
细胞 FSC-A 到 SSC-A 94.7 ± 2.1 95.2±2.1
单细胞 FSC-A 到 FSC-H 90.0 ± 2.7 91.7±2.2
白细胞 CD45 转 FSC-A 98.6 ± 1.3 99.5±0.3
FITC -阴性细胞 FITC（CD3、CD19、CD49b）转 FSC-A 98.6 ± 0.7 97.7±0.6
单核细胞 (Ly6G-) Ly6G 转 FSC-A 98.8 ± 0.7 98.4±0.5
巨噬细胞 F4/80 到 CD11b 98.0 ± 0.9 98.8±1.1
抗炎巨噬细胞 ARG1 到 FSC-A 1.8 ± 0.5 1.4±0.3
促炎巨噬细胞 iNOS转 FSC-A 4.2 ± 2.3 77.7±3.8
含有巨噬细胞的沙门氏菌 STR 转 FSC-A 0 24.7 ± 1.78

故障排除

A. S.tm的培养（见程序 A 和 B）
沙门氏菌在 37°C 时生长最好，并且需要氧气才能实现最佳生长。因此，它们应该在覆盖有锡箔的锥形瓶中培养。必须严格保证37℃的温度。

B. BMDM 的制备（见程序D）
对于骨髓来源的巨噬细胞的产生，以无菌方式工作很重要。细胞只能在层流柜中处理。隔离整个胫骨和股骨很重要，并且仅在无菌条件下使用高压灭菌的剪刀和镊子将它们切开。

C. BMDM 的收获、计数和播种（参见程序 E）
通过刮擦收获 BMDM 需要相当温和，以获得高细胞活力。我们建议从身体上刮下来，不要对一次性细胞刮刀施加太大的力。
将细胞接种在无抗生素培养基中以进行感染。因此，在播种前一天，建议在放置在细胞培养箱中的细胞培养皿中孵育 5 mL 无抗生素培养基过夜，以确保培养基不受细菌污染。

D. BMDM 感染（见程序 F）
感染后，需要彻底冲洗掉未被吞噬的 S.tm。 _完全去除培养基很重要，并用PBS + 庆大霉素至少清洗细胞两次。可以使用显微镜来查看S. tm 是否仍然存在于培养物中。如果是，则应重复洗涤步骤。
重要的是在 PBS 中加入庆大霉素进行洗涤，并在 DMEM 中进一步孵育。庆大霉素通过阻断蛋白质生物合成来抑制 S.tm的增殖。

食谱

1. LB培养基
广告与
2% LB-肉汤
高压釜（121°C 20 分钟，50°C 10 分钟）
2. 含 30% 甘油的 LB 培养基
将 300 μL 的甘油添加到 700 μL 的 LB 培养基中

致谢

GW 得到了 Christian Doppler Society 的资助和 FWF（EPICROSS，I-3321）的 ERA-NET 资助，NB 得到了 FWF 博士学院项目 W1253 HOROS 的支持。
表达红色荧光蛋白的鼠伤寒沙门氏菌是由 Dirk Bumann教授（瑞士巴塞尔大学）赠送的礼物。该协议在 Fritsche等人之后进行了调整和修改。（2008 年）。

利益争夺

作者宣称没有利益冲突。

参考

1. Bhutta, ZA, Gaffey, MF, Crump, JA, Steele, D., Breiman, RF, Mintz, ED, Black, RE, Luby, SP 和 Levine, MM (2018)。伤寒：前进之路。 Am J Trop Med Hyg 99（3_Suppl）：89-96。
2. 伯明翰, CL, Smith, AC, Bakowski, MA, Yoshimori, T. 和 Brumell, JH (2006)。自噬控制沙门氏菌感染以响应对含沙门氏菌的液泡的损害。生物化学杂志 281（16）：11374-11383 。
3. 波格丹，C.（2015 年）。先天性和适应性免疫中的一氧化氮合酶：更新。趋势免疫36（3）：161-178。
4. Brigo, N.、Pfeifhofer-Obermair, C.、Tymoszuk, P.、Demetz, E.、Engl, S.、Barros-Pinkelnig, M.、Dichtl, S.、Fischer, C.、Valente De Souza, L. , Petzer, V.等人。（2021 年）。细胞因子介导的巨噬细胞中 ARG1 的调节及其对控制肠道沙门氏菌鼠伤寒血清型感染的影响。单元格10（7）。
5. Buchmeier, NA 和 Heffron, F. (1991)。鼠伤寒沙门氏菌抑制巨噬细胞吞噬体-溶酶体融合。感染免疫59(7)：2232-2238。
6. De Muylder, G.、Daulouede, S.、Lecordier, L.、Uzureau, P.、Morias, Y.、Van Den Abbeele, J.、Caljon, G.、Herin, M.、Holzmuller, P.、Semballa, S.等人。（2013）。布氏锥虫驱动蛋白重链通过触发宿主精氨酸酶活性促进寄生虫生长。 PLoS Pathog 9（10）：e1003731。
7. El Kasmi, KC, Qualls, JE, Pesce, JT, Smith, AM, Thompson, RW, Henao-Tamayo, M., Basaraba, RJ, Konig, T., Schleicher, U., Koo, MS等。（2008 年）。 Toll 样受体诱导的巨噬细胞精氨酸酶 1 阻碍了对细胞内病原体的有效免疫。 Nat Immunol 9（12）：1399-1406。
8. Fritsche, G.、Nairz, M.、Werner, ER、Barton, HC 和 Weiss, G. (2008)。 Nramp1 功能通过抑制 IL-10 的形成来增加 iNOS 的表达。 Eur J Immunol 38（11）：3060-3067。
9. Gordon, S. 和 Martinez-Pomares, L. (2017)。巨噬细胞的生理作用。 Pflugers Arch 469（3-4）：365-374。
10. Hannemann, N., Cao, S., Eriksson, D., Schnelzer, A., Jordan, J., Eberhardt, M., Schleicher, U., Rech, J., Ramming, A., Uebe, S.,等。（2019）。转录因子 Fra-1 靶向精氨酸酶 1 以增强巨噬细胞介导的关节炎炎症。临床投资杂志 129（7）：2669-2684。
11. Iniesta, V., Carcelen, J., Molano, I., Peixoto, PM, Redondo, E., Parra, P., Mangas, M., Monroy, I., Campo, ML, Nieto, CG,等。（2005 年）。利什曼原虫主要感染期间的精氨酸酶 I 诱导介导疾病的发展。感染免疫73(9)：6085-6090 。
12. Lahiri, A.、Lahiri, A.、Iyer, N.、Das, P. 和 Chakravortty, D. (2010)。参观沙门氏菌感染的细胞生物学。微生物感染12（11）：809-818。
13. Mastroeni, P. 和 Grant, AJ (2011)。全身感染期间肠沙门氏菌在体内的传播：解开宿主和病原体的决定因素。专家 Rev Mol Med 13：e12。
14. 米尔斯，CD（2012 年）。 M1 和 M2 巨噬细胞：健康和疾病的预言。 Crit Rev Immunol 32（6）：463-488。
15. Mosser, DM 和 Edwards, JP (2008)。探索巨噬细胞活化的全谱。 Nat Rev Immunol 8（12）：958-969。
16. 默里，PJ（2017）。巨噬细胞极化。 Annu Rev Physiol 79：541-566。
17. Nairz, M., Schleicher, U., Schroll, A., Sonnweber, T., Theurl, I., Ludwiczek, S., Talasz, H., Brandacher, G., Moser, PL, Muckenthaler, MU等. （2013）。一氧化氮介导的 ferroportin-1 调节控制沙门氏菌感染中的巨噬细胞铁稳态和免疫功能。 J Exp Med 210（5）：855-873。
18. Navarre，WW，Zou，SB，Roy，H.，Xie，JL，Savchenko，A.，Singer，A.，Edvokimova，E.，Prost，LR，Kumar，R.，Ibba，M.，等。（2010）。 PoxA、yjeK 和延伸因子 P 协同调节肠沙门氏菌的毒力和耐药性。摩尔细胞39（2）：209-221。
19. Ostuni, R. 和 Natoli, G. (2011)。巨噬细胞多样性和特化的转录控制。 Eur J Immunol 41（9）：2486-2490。
20. Paduch, K.、Debus, A.、Rai, B.、Schleicher, U. 和 Bogdan, C. (2019)。在缺乏精氨酸酶 1 的情况下，皮肤利什曼病的解决和主要利什曼病的持续存在。免疫杂志202(5)：1453-1464。
21. Piccolo, V.、Curina, A.、Genua, M.、Ghisletti, S.、Simonatto, M.、Sabo, A.、Amati, B.、Ostuni, R. 和 Natoli, G.（2017 年）。相反的巨噬细胞极化程序显示出广泛的表观基因组和转录串扰。 Nat Immunol 18（5）：530-540。
22. Schleicher, U., Paduch, K., Debus, A., Obermeyer, S., Konig, T., Kling, JC, Ribechini, E., Dudziak, D., Mougiakakos, D., Murray, PJ, et al . （2016 年）。 TNF 介导的骨髓细胞中精氨酸酶 1 表达的限制在感染部位触发 2 型 NO 合酶活性。细胞代表15(5)：1062-1075。
23. Weiss, G. 和 Schaible, UE (2015)。针对细胞内细菌的巨噬细胞防御机制。免疫学第 264(1) 版：182-203。
24. Wu，A.，Tymoszuk，P.，Haschka，D.，Heeke，S.，Dichtl，S.，Petzer，V.，Seifert，M.，Hilbe，R.，Sopper，S.，Talasz，H.，等人。（2017）。沙门氏菌利用锌通过调节 NF-kappaB 信号来破坏巨噬细胞的抗菌宿主防御。感染免疫85(12)。
25. Zanoni, I.、Ostuni, R. 和 Granucci, F. (2012)。小鼠骨髓源性巨噬细胞 (BM-MFs) 的产生。生物协议2(12)：e225。