材料和试剂

1. 群居小鼠
2. 50 mL 锥形管，侧面有孔（用于束缚应力引起的厌食症；图 1 ）

图 1. 限制性应激引起的厌食装置的设置。单独的笼子分别用于雄性和雌性小鼠

3. 清洁老鼠笼
4. 标准松鼠饮食（Formulab Diet 5008 或经批准的类似小鼠饮食）
5. 标准家笼水瓶
6. 标准食物希望
7. 笼养（如雀巢）
8. 用于测量食物摄入量和体重的秤（Satorius Entris II Essential Precision Balance 或类似产品）
9. 用于记录食物摄入量和体重的实验室笔记本

约束应力装置制作说明
一个简单的约束应力——厌食装置可以由 50 mL 锥形管构成（图 1）。根据您可以容纳的数量，在锥形管的两侧打 6-12 个孔，以使小鼠能够呼吸。应注意使孔足够大以供空气流通，但又不能大到让老鼠的鼻子伸进去，以免它们在边界处伤到自己。可以使用诸如用于熔化塑料的热笔之类的工具来制作孔。小鼠识别信息（即耳标编号和性别）可以写在每个管的侧面。在约束期间，可以将小鼠放入其驻留笼内的约束器中（图 1）。每次约束后，应使用肥皂和水清洗约束管，并在每只小鼠重新使用前让其干燥。

程序

A. 束缚压力——诱发厌食症

1. 将家鼠分组，每笼 3-4 只，按性别分开；在开始食物摄入量测量之前，让小鼠适应住房条件一周。在此期间，研究人员应每天处理小鼠，使小鼠适应处理相关的压力。
2. 为了让老鼠适应处理，拿起每只老鼠并轻轻地擦。在基线喂养测量前一小时取出水瓶和食物（以控制小鼠无法获得食物和水的一小时限制期）。在取出食物和水后立即将老鼠放在干净的笼子里，这样老鼠就无法接触到笼子底部可能存在的任何食物碎屑。
注意：所有喂养测量应在同一实验地点的同一时间进行。
3. 去除食物和水一小时后，将水瓶添加到干净的笼子里，里面有新鲜的垫料和小鼠浓缩物（即雀巢或木块），并向食物漏斗中加入 20 至 30 克食物（小鼠吃大约 3–5 克） g/天/小鼠）。在将食物和水添加到笼子之前立即测量小鼠的体重和食物量。
4. 测量添加食物后 1、2、4 和 24 小时食物料斗中剩余的食物量。每只小鼠的食物摄入量是在每个时间点通过将消耗的食物量除以每个笼子中的小鼠数量来计算的。
5. 添加食物后 24 小时测量小鼠的体重。
6. 重复步骤 A2 - A4 3 至 5 天，以确定每只小鼠在约束压力之前的食物摄入基线水平。
7. 在约束压力日（在基线食物摄入量测量之后），抓住老鼠的尾巴并将每只老鼠放在 50 mL 锥形管中（参见图 1）60 分钟，首先插入动物的头部，然后插入其其余部分身体，包括尾巴。对于对照动物，只去除食物和水，给它们一个与约束小鼠相似的食物和水限制环境 60分钟。
笔记：
a. 必须获得机构动物护理和使用批准 (IACUC) 才能对小鼠进行实验工作。必须在约束期间监控每只小鼠，以确保小鼠呼吸充分。
b. 为了获得有和没有束缚压力的单个小鼠的食物摄入量，上述过程（步骤1-7 ）也可以在单独饲养的小鼠上进行。然而，在开始束缚应激-厌食症实验之前，小鼠应该被单独关在笼子里至少一周，以使小鼠适应单一的住房。
8. 经过 60 分钟的约束，将小鼠与它们的同窝仔一起放回笼中，并按照步骤 A3 中的说明添加食物和水。
9. 如步骤 A4 所述测量食物摄入量。
10. 重复步骤 A7 – A9 7 – 10 天，以检查慢性约束压力对食物摄入和体重的影响。

B. 社会孤立——诱发厌食症

1. 将家鼠分组，每个笼子 3-4 只，并在开始食物摄入量测量之前让小鼠适应住房条件一周。在此期间，研究人员应每天处理小鼠，使小鼠适应处理相关的压力。
2. 将老鼠换成新鲜的笼子，里面有新鲜的被褥和老鼠的浓缩物。测量每只小鼠的体重。将 20–30 克食物添加到笼子中，并测量添加到每个笼子中的食物量。返回以测量 1、2、4 和 24 小时后剩余食物的数量。通过将消耗的食物总量除以笼子里的老鼠数量来计算每只老鼠消耗的食物量。
注意：所有喂养实验都应在一天中的同一时间在同一实验地点进行。由于小鼠是夜间活动的并且在黑暗周期中消耗大部分食物，因此通过在啮齿动物的黑暗周期开始时进行喂养实验可以获得最佳结果。
3. 连续 3-5 天重复步骤 B2，以在社交隔离之前建立食物摄入量和体重的基线测量值。
4. 在步骤 B2-B3 的同一时间，将每只老鼠单笼，测量每只老鼠的体重，并向每个笼子添加10-15克食物。在 1、2、4 和 24 小时后返回测量每个笼子中的食物量。对于对照组，通过将消耗的食物总量除以笼子里的老鼠数量，继续计算每只老鼠消耗的食物量。
注意：小鼠根据昼夜节律结构进食。必须注意每天在同一时间进行所有喂养测量。
5. 再重复步骤 B4 3 – 14 天。

数据分析

排除标准：在压力引起的厌食症实验中，研究人员必须遵守 IACUC 批准的排除标准，将动物从实验条件中移除。这些排除标准在每个研究机构都会有所不同，个别研究人员应在开始实验之前与兽医人员讨论排除标准。通常，当观察到疼痛或不适迹象（例如活动减少或立毛）或任何动物的体重下降超过 20% 时，小鼠就会被从实验环节中移除。
在完成束缚压力诱发的厌食症或社会隔离厌食症实验后，比较每只小鼠在无束缚与束缚压力（配对，样本比较内）后的食物摄入量和体重。预计束缚应激会减少小鼠的食物摄入量和体重。对于约束压力引起的和社会隔离引起的厌食症，我们通常会在约束压力后的几小时内立即观察到食物摄入量发生 10%–20% 的变化，尽管结果会因小鼠品系、性别和小鼠年龄而异。还可以通过确定操作对食物摄入和体重的影响来评估药理学或其他操作减少或增强压力引起的厌食症的效果。具体的实验设计会根据具体的研究问题略有不同。

结论
在这篇文章中，我们描述了两种用于诱导应激性厌食症的简单小鼠模型。这些模型为有兴趣确定将压力与进食行为联系起来的神经机制的研究人员提供了一个有价值的实验工具。

致谢

这项工作部分由奖项 R00 DK127065 (PS)、大脑和行为研究基金会青年研究者奖 (PS) 和普拉德威利研究基金会 (PS) 资助。
本文中的原始方法基于我们之前的出版物 ( Sweeney et al., 2021; DOI: 10.1126/ scitranslmed.abd 6434)。

利益争夺

不存在利益冲突或利益冲突。

伦理

所有实验均经伊利诺伊大学机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 批准。

参考

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