材料和试剂

加入两台LI-6800

1. 两个比色皿法兰（内部设计，补充 1中的原理图）
2. 下室盖（内部设计，补充2中的原理图）
3. 密封顶室盖（内部设计）
注意：密封顶盖设计与下室盖设计相似，但热电偶支架孔除外。密封的顶室盖没有热电偶支架孔。
4. 密封法兰（内部设计，补充3中的原理图）
5. 柔性不锈钢管，直径 12 毫米
6. 根据示意图的 O 型圈和螺钉
7. 带 3.5 毫米插孔连接器的热电偶延长电缆
8. （推荐）LI-6800 定制腔室歧管（LI-COR，目录号：6800-19）
9. Bev-A-line 输液管

测量前

1. 聚碳酸酯板 2 – 3 毫米厚，大到足以覆盖腔室和密封件的表面

边界层电导估计

1. 玻璃微纤维过滤器 GF/A 9 cm（Whatman，目录号：WHA1820090）
2. PEEK 管e 橙色 1/16 × 0.02（IDEX，目录号：1532）
3. 250 mL 玻璃烧杯
4. 纯净水（反渗透或蒸馏）

设备

1. 两个光合作用系统 LI-6800（LI-COR Biosciences，林肯，内布拉斯加州）

软件

1. LI-6800使用双室的附加脚本（内部编码，下载地址：https: //github.com/PlantPhysiologist/MSF_UpperLower ）

程序

连接两个LI - 6800

如图 1和2所示连接法兰和管道。固定比色皿的上下钳口应保持与 LI-6800 #1 的连接，以便打开和关闭腔室的杠杆保持操作。将热电偶从 LI-6800 #1 放在接触叶子和位置 #2 以测量下比色皿的空气温度。保持 LI-6800 #2 的灯关闭，以避免系统中产生额外的热量。

图2 。法兰和管道连接的 LI-6800 #1 (A) 和 #2 (B)

或者，可以使用 LI-COR 的定制腔室歧管（部件号 6800-19，购买 LI-6800 时不包括）分离来自 LI-6800 #2（图 3 ）的参考气体和样气，然后连接混合 REF _Ref118816508 \h \* MERGEFORMAT 一根管子中的体积和参考气体进入腔室，而第二根管子仅连接到样气入口。建议使用最后一种设置，尽管Márquez 等人未使用它。 (2021)因为它是在出版后开发的。

图3 。 LI-6800 头部的 LI-6800 歧管 (A) 和定制腔室歧管 (B) 的连接。参考气体输出（红色）、样气入口（蓝色）和混合风扇体积（黄色）。连接是 Bev-A-line IV 管。 Custom Chamber Manifold 的输出和输入管道连接到直径为 12 mm 的柔性不锈钢管。

测量前

A. 安装/加载附加脚本

1. 使用拇指驱动器或以太网端口，将附加脚本文件复制到文件夹config 。
2. 在启动/配置选项卡中从 LI-6800 的显示屏加载配置双比色杯。

B. 预热仪器

1. 像往常一样，在使用 LI-6800 时，将新化学品放入水和 CO 2洗涤缸中，在加湿器中重新注满水，然后安装新的 CO 2滤芯。
2. 关闭两个 LI-6800 上的灯。
3. 放置聚碳酸酯板以隔离每个试管中的气体并关闭腔室。
4. 在腔室和连接周围吹 CO 2 （呼吸是一种合适的混合物）来检查是否有泄漏，同时检查 CO 2读数（它们不应改变）。
注意：在继续测量或预热之前纠正任何泄漏。
5. 照常运行仪器的自动预热。
6. 取下聚碳酸酯板。

边界层电导估计

A. 准备蒸发面（图4 ）

1. 用蒸馏水填充烧杯并将 PEEK 管的一端浸入其中。
2. 吸过 PEEK 管，使其充满水。
3. 弄湿两张超细纤维滤纸。
4. 将 PEEK 管放在两个阻尼微纤维过滤板之间。
5. 将过滤器放在 LI-6800 腔室中并关闭它（管子必须位于过滤器之间的腔室中间）。
6. 放置烧杯，使水面比过滤器高几厘米，形成虹吸连接，注意不要溢出滤纸。
7. 确保 LI-6800 #1 中的热电偶接触微纤维过滤器，而 #2 没有接触它。

图4 。测量边界层电导的装置示意图

B. 测量不同风扇速度下的边界层电导

1. 设置参数：
μmol s -1的流速；样品CO 2浓度为400 μmol mol -1 ；并熄灯。
LI-6800 #1 的空气温度为 25 °C，空气饱和度不足 (ASD) 为 1.2 kPa。
LI-6800 #2 的叶温（热电偶）为 25 °C，蒸气压差 (VPD) 为 1.2 kPa。
2. 从两个试管进行测量，将风扇转速 (rpm) 从 5,000 转至 13,000 rpm，步长为 1,000 rpm（图 5 ）。
注意：流速也会影响估计的边界层电导，但通常对使用 LI-6800 进行的测量影响较小。

图5 。边界层电导的测量

进行测量

A. 在房间里放一片叶子

1. 叶子必须覆盖房间的整个区域。
2. 确认只有 LI-6800 #1 的热电偶接触到叶子。
3. 将两个 LI-6800 的超压设置为 0.1 kPa。始终在两个比色皿中保持相同的超压，以避免质量流过叶子。
4. 启动测量协议并打开一个文件以保存数据。

数据分析

A. 6800s添加新的边界层估计

1. 从两个 LI-6800 中提取 Excel 日志文件。
2. 在 LI-6800 #2 的数据文件中，将叶温的值替换为 LI-6800 #1 的文件中给出的值。
3. 计算对水的边界层电导 ( g bw )。

（等式 1）

其中E是蒸腾作用， w sat是过滤器温度下的蒸汽饱和摩尔分数， w a是比色杯空气中的水含量。请注意，这与LI-6800 结果电子表格中的总电导 ( g tw )等式相同。
4. 提取gbw数据并拟合二次方程 ( g bw =斧头2 +斧头 + c ) 使用每千风扇转速 (rpm/1 , 000) 作为x输入。
a. Excel 中的二阶趋势线多项式是拟合方程的合适工具。
b. 脚本中的a 、 b和c调整为四位有效数字。
5. 在选项卡 Constants/User 中插入变量a 、 b和c的值。
6. 如果未修改连接中的管道和歧管，则无需重新计算用于估计g bw的方程。

B. 后处理数据

将Tair值替换为 LI-6800 #2 电子表格中的Tleaf ，并将#2 电子表格的Tleaf值替换为 #1 中的值。附加组件包含的新计算将聚集在结果电子表格的第一列中，但不会取代正常的计算。因此，用户在检索数据时应注意不要混淆数据。

笔记

1. 尽可能在每台 LI-6800 上使用 500 μmol s -1或更高的流速。
2. 在两个 LI-6800 上设置相同的超压，以避免质量流过叶片。
3. PEEK 管可以用一块微纤维过滤器代替，一端在烧杯中，另一端在两个微纤维过滤器之间，但要采取额外的预防措施，以防止腔外的微纤维在测量过程中变干。
4. 在两个比色皿上设置相同的空气温度，以在修改水参数时保持比色皿条件相同（注意热电偶正在测量 LI-6800 #2 中的空气温度）。

致谢

我们感谢 P. Groeneveld 提供技术支持和构建 LI-6800 连接器。我们还感谢 ANID Doctorado ， Becas Chile/2015 Folio 72160160 以发现补助金（编号 DP210103186）的形式资助部分研究和 ARC 支持。这里采用的方法首次发表于Márquez等人。 (2021)自然植物DOI：10.1038/s41477-021-00861-w。

利益争夺

作者声明没有竞争利益。

参考

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