材料和试剂

单元格
HEPES（Sigma-Aldrich，目录号：H3375）
MgCl 2（Sigma-Aldrich，目录号：M2670）
EDTA（Sigma-Aldrich，目录号：E5134）
EGTA（Sigma-Aldrich，目录号：E4378）
蔗糖（MP Biomedicals，目录号：821713）
DTT（Life Technologies，目录号：15508013）
将蛋白酶体底物[溶于DMSO（Sigma-Aldrich，目录号：D8418）至终浓度为10mM，并冷冻保存在-20℃下]
1. Suc-LLVY-AMC（胰凝乳蛋白酶样活性底物）（Enzo Life Sciences，目录号：P802）
2. Z-ARR-AMC（胰蛋白酶样活性底物）（EMD Millipore，目录号：539149）
3. Z-LLE-AMC（胱天蛋白酶样活性底物）（EMD Millipore，目录号：539141）
PBS（不含Ca 2+和Mg 2+）（Sigma-Aldrich，目录号：P802）。
考马斯蛋白测定试剂（Thermo Fisher Scientific，目录号：1856209）
BSA蛋白标准品（Thermo Scientific，目录号：23209）
ATP（Sigma-Aldrich，目录号：A3377）
蛋白酶体裂解/测定缓冲液（见配方）

设备

程序

食谱

致谢

此协议改编自Valera等人（2013）。研究得到NIH（RO1AG035055），Fritz B. Burns基金会和阿尔茨海默病协会的资助。

参考文献

Betarbet，R.，Sherer，T.B.and Greenamyre，J.T。（2005）。泛素 - 蛋白酶体系统和帕金森病。 Exp Neurol 191 Suppl 1：S17-27。
Chung，K.K.，Dawson，V.L。和Dawson，T.M。（2001）。泛素 - 蛋白酶体途径在帕金森病和其他神经变性疾病中的作用。 em> Trends Neurosci 24（11 Suppl）：S7-14。
Ciechanover，A。（2005）。蛋白水解：从溶酶体到泛素和蛋白酶体。 Cell Biol 6（1）：79-87。
Ciechanover，A。和Brundin，P。（2003）。神经退行性疾病中的泛素蛋白酶体系统：有时是鸡，有时是鸡蛋。 em> Neuron 40（2）：427-446。
Kisselev，A.F。和Goldberg，A.L。（2001）。蛋白酶体抑制剂：从研究工具到候选药物。 em> 8（8）：739-758。
Valera，E.，Dargusch，R.，Maher，P.A。和Schubert，D。（2013）。在蛋白毒性和阿尔茨海默氏病中调节5-脂氧合酶 J Neurosci 33（25）：10512-10525。