材料和试剂

设备

程序

在预先装备有骨切片的96孔板中，在存在和不存在颅盖成骨细胞的情况下将破骨细胞铺板（250,000个细胞/孔）。
将细胞在合适的培养基中在37℃下培养至少14天。
此后，用PBS洗涤细胞两次，并通过在250μl的70％异丙醇中在高功率下超声破碎至少15分钟从骨切片中除去。
注意：在超声波处理之前，使用250μl的70％异丙醇，容易清除细胞。
通过在室温下用100μl甲苯胺蓝（1％;溶于水）染色2分钟使吸收坑形成可视化。
然后将切片用250μlMilliQ水漂洗至少5次以洗掉残余物。
吸收凹坑现在被染成深蓝色（图1），吸收区域可以通过骨骼系统或吸收凹陷/孔可以通过光学显微镜计数。

图 1。吸收坑形成

致谢

该协议改编自以前发表的文章Scholtysek等人（2013）。

参考文献

Scholtysek，C.，Katzenbeisser，J.，Fu，H.，Uderhardt，S.，Ipseiz，N.，Stoll，C.，Zaiss，MM，Stock，M.，Donhauser，L.，Bohm，C.，Kleyer A.，Hess，A.，Engelke，K.，David，JP，Djouad，F.，Tuckermann，JP，Desvergne，B.，Schett，G.andKrönke，G。（2013）。 PPARbeta/delta支配Wnt信号转导和骨转换。 em> 19（5）：608-613。