材料和试剂 L。 campestre 种子农杆菌菌株GV3101（携带用于植物转化的二元载体，包括用于细菌选择的抗性基因和含有Basta抗性基因的T-DNA）幼苗基质（60％白泥炭; 20％冷冻黑泥炭; 20％椰子浆）（Klasmann-Deilmann GmbH，配方编号：080） Osmocote mini（The Scotts Company） Triabon（COMPO）牛肉提取物酵母提取物蛋白胨蔗糖 MgSO 4 4 / 利福平（染色体抗性）庆大霉素（辅助质粒抗性）其他抗生素取决于转化载体 Silwet L-77（Lehle Seeds，目录号：VIS-02） 0.01％basta溶液（Bayer CropScience GmbH，目录号：79011725）土壤（见配方） YEB中（见配方）渗透介质（参见配方）设备植物栽培温室用于植物春化的冷室蛭石（1-2毫米） 28°C孵育器摇动烧杯带温度控制的离心机分光光度计磁力搅拌器小塑料袋程序发芽。油菜种子在土壤上，保持种子潮湿和覆盖直到幼苗出现转移幼苗到个别盆，并在20℃下16小时光周期生长6周，在15℃不照明下生长8小时。在4℃下用8小时的照明春化植物8周将植物移回温室条件。 1-2周后，应出现花序理想情况下，第一次浸渍应在第一次开花前不久进行在浸渍前2天，在YEB培养基中在200rpm恒定旋转下在28℃下培养5ml的GV3101的过夜培养物。使用该培养物接种500ml YEB培养基并如上培养24小时通过在16℃和5,500xg离心15分钟来沉淀土壤杆菌细胞。通过涡旋将细胞重悬在约20ml的浸润培养基中加入浸润介质以达到2.0的最终OD值600（应该导致约400-600ml）。保持细胞在室温黑暗中约2小时。将农杆菌溶液置于烧杯中，并使用磁力搅拌器不断搅拌每个转化构建体应处理至少10-15个植物，以产生几个独立的转基因品系（约0.4％的转化效率导致每株植物约1个转化体）。使用手指轻轻地展开和打开植物花序，以使液体尽可能多地到达表面。将植物的花序浸泡在土壤杆菌溶液中5秒钟。用塑料袋覆盖花序以保持湿度。保持植物没有直接照明24小时（关闭所有的灯直接在你的植物和关闭树荫下，它不需要是完全黑暗，但强光，已知降低动力和感染性 of the Agrobacteria ）。每周重复浸渍，直到没有新鲜花卉产生（3-5次）栽培植物，直到所有的水果是黄色和干燥（约3-6周）通过手动打开水果收集种子。发芽种子，直到子叶出现。以3-4天的间隔用0.01％Basta溶液喷洒幼苗，直到不再出现幼苗，并且可以将Basta抗性植物与Basta敏感植物清楚地区分开（约2周）。几天后，Basta敏感的幼苗停止生长，死亡，而转化的植物继续生长。通过表型PCR或Southern印迹确认转基因整合食谱土壤包括8：1：1幼苗基质，蛭石和补充肥料（每个Osmocote迷你和Triabon 1g/L）的沙子 YEB中等 5g/L牛肉提取物 1g/L酵母提取物 5 g/L蛋白胨 5g/L蔗糖 0.5g/L MgSO 4 4/h 补充利福平（50μg/ml），庆大霉素（25μg/ml）和其他抗生素，取决于转化载体。渗透介质（总是准备新鲜） 5％蔗糖 0.02％silwet L-77 致谢我们感谢AndreasMühlhausen和Klaus Mummenhoff（德国Osnabrück大学植物系）在我们的水果开裂项目中的良好合作。还非常感谢Pia Nutt支持植物转化，FlorianRümpler帮助统计学，Lydia Gramzow支持生物信息学。还要感谢Dominik Schmidt（分子生态系，马克斯普朗克化学生态研究所，德国耶拿）为我们提供农杆菌菌株。该协议已经基于以前公开的工作进行了修改（Clough和Bent，1998; Curtis和Nam，2001; Tague，2001; Martinez-Trujillo等人，2004; Zhang等人，， 2006; Bartholmes等人， 2008）。我们的工作得到了德意志研究所对G.T.的资助。（TH 417/6-1）。参考文献 Bartholmes，C.，Nutt，P。和Theiβen，G。（2008）。牧羊人钱包的种系转化 Capsella bursa-pastoris 409（1）：11-19。通过'花卉dip'方法作为进化和发育生物学的工具。 Clough，S.J。和Bent，A.F。（1998）。花苞片：草酸杆菌介导的 Arabidopsis thaliana Plant J 16（6）：735-743。 Curtis，I.S。和Nam，H.G。（2001）。转基因萝卜（ Raphanus sativus L. 通过花浸渍方法 - 植物发育和表面活性剂对于优化转化效率是重要的。转基因研究 10（4）：363-371。 Lenser，T.和Theißen，G。（2013）。保护水果开裂路径植物J 76（ 4）：545-556。 Martinez-Trujillo，M.，Limones-Briones，V.，Cabrera-Ponce，J.L.and Herrera-Estrella，L。（2004）。通过修改花浸法来提高拟南芥的转化效率。 Plant Mol Biol Rep 22（1）：63-70。 Tague，B.W。（2001）。拟南芥lasiocarpa的种系转化。转基因研究 10（3）：259-267。 Zhang，X.，Henriques，R.，Lin，S.-S.，Niu，Q.-W。和Chua，N.- （2006）。农杆菌 - 介导的< em> Arabidopsis thaliana 使用花浸法。 Nat Protoc 1（2）：641-646。