材料和试剂

实验室繁殖加迷宫初级小鼠
注意：将小鼠以每笼4-5只，保持在具有控制温度（约23℃）和湿度的环境中，在12-12小时光 - 暗循环下，食物和水随意进食。 em>
纸巾和70％乙醇用于清洁

设备

Elevated Plus迷宫（定制设备或商用设备）
摄像机（直接放在迷宫上方）
间接白光
数字照度计（Instrutherm，Mastech，Dr. Meter或类似物）
用于手动分析的数字计时器，或用于自动分析的计算机软件（任意迷宫，Ethovision或其他）注意：在我们的实验室，我们使用一个定制的加号迷宫大小为小鼠（Leo等人，2014），它是提高50厘米高于地面，包括两个相对的封闭的手臂，两个相反的开放臂和5厘米边的中心正方形（见下图）。闭合的手臂尺寸为30 x 5厘米，由白漆木制成，15厘米高的墙壁包围着手臂。应避免光泽绘画以防止过度眩光，因此建议使用哑光表面。开放臂尺寸为30 x 5厘米，由透明丙烯酸制成;一个0.3厘米高透明亚克力栏杆防止动物跌落，而探索开臂。该装置可以拆卸并移动到实验室，并从实验室移动到设置使用。木制装饰覆盖着木漆，漆成黑色或透明的有机玻璃装置也经常被发现。推荐使用市售的装置，例如来自Stoelting Co.或Panlab S.L.U.的装置作为替代品。房间照明和设备光反射强烈影响高架+迷宫测试。在我们的实验室，使用三星Flashcam数码摄像机，因为它更适合后期离线分析。在开始实验操作（药物，程序，转基因动物等）之前，应始终运行试验实验以建立可靠的基线参数并标准化实验环境。

图1.正形迷宫

软件

自动计算机软件（任意迷宫，Ethovision等）

程序

迷宫应该安装在隔离的房间，远离任何噪音，气味或运动的任何外来干扰。您可以选择在行为实验室中放置一个低强度白噪声源。应当注意，指导提示，例如房间周围的壁上的绘图可能使动物的活动倾斜到迷宫的特定区域。因此，任何可能充当线索的绘画或文物都必须删除 />
实验者必须约束在整个试验期间不产生任何过度的噪音或运动，以及佩戴香水，古龙水或任何具有强烈气味的产品，因为它可以作为小鼠的焦虑性刺激。
房间中的照明必须借助于勒克斯量表来测量，保持恒定并根据要进行的分析进行控制。由于低强度光度降低了开放臂避免（Morato和Castrechini，1989; Bertoglio和Carobrez，2002; Cosquer等人，2005; Pereira等人，2005年）），为了分析焦虑效应，应该优选低强度照明（5-30Lux），而应当在较高强度照明（200-400Lux或更高）下分析抗焦虑效应。
在将这些实验条件调整到标准后，将动物带入实验室，在那里它们将在家笼中放置45至60分钟，以便从移动的应力中恢复。
在开始测试之前用70％乙醇清洁迷宫，以清除设备上积聚的任何污垢或气味
打开摄像机，将第一个鼠标放在迷宫的中心正方形，面向其中一个开放的臂，最好是与实验者相对的一个。
实验者将站在距离迷宫尽可能远的地方，并且在必要时在房间外面的测试动物的视野之外。他还必须避免不必要的运动或声音。
经过5分钟的自由探索，鼠标可能会移出迷宫，并回到其家笼。
所有的尿和粪便boli必须删除，迷宫用70％乙醇完全清除，以消除任何残留的气味从第一只老鼠。之后，下一个鼠标可能会提交测试。
重复步骤6-9，直到所有的动物都被测试
记录的视频可以通过自动计算机软件或者借助于计时器手动地分析。可以考虑几个参数：
1. 闭合武器中的时间和在闭合武器中花费的时间：在整个实验期间对迷宫上的总运动的测量（Carola等人，2002; Walf和Frye，2007）。
2. 在开放臂中的时间和在开放臂中花费的时间：可以用作焦虑的反向测量，也就是说，减少的开放臂避免反映较低的焦虑水平（Carola等人，2002; Walf和Frye，2007; Griebel等人，1993）。
3. 风险评估行为：头部浸没的频率和持续时间（在开放臂上头部朝向地面向下运动）和伸展姿势（伸展姿势，头部和两个或三个爪在开放臂上，缩回到先前位置）可以是焦虑的直接测量，即增加的风险评估行为表示更高水平的焦虑（Carola等人，2002; Weiss等人， et al。，1998; Carobrez and Bertoglio，2005）
统计分析：应通过所有治疗方案的方差分析单独检查参数。如果适用，可以通过事后测试进一步分析数据。

代表数据

上图显示了我们设置中升高加迷宫（EPM）的典型数据，适用于调查焦虑反应（10 Lux）。对照组的行为是相对分布的，但是正确的统计学有效数据已经用每组6-8只小鼠的样品收集。药物1是一种清楚的抗焦虑药物，显示减少的开放臂时间和开放臂条目，没有改变所花费的时间和在闭合臂中的条目数量。药物2表明焦虑性样药理学特征的相对缺陷的解释，因为治疗的小鼠显示减少的运动，如通过每个臂中的条目的数量所揭示的。在这种情况下，我们建议药物剂量略有减少，以确定一个剂量，允许区分药物诱发的情绪和运动效应。还提供了我们在（Leo ，，2014）发表的一个实验的代表性视频。

笔记

通常，当进行行为实验时使用雄性小鼠，因为发情周期的变化通常影响雌性在这样的测试中的表现（Simpson等人，2012; da Silva等人 >，2014）。
基线活性可以根据小鼠品系，性别和年龄而变化（Leo等人，2014; Carobrez和Bertoglio，2005; Hogg，1996）。
动物应该被允许至少一周的习惯到家笼，因为他们往往在来自动物饲养设施到达时表现出高焦虑水平。
在我们的实验中，动物只处理笼清洁，称重，药物治疗和在测试期间。此外，动物只在光周期中测试;在黑暗循环中的测试可能产生不同的结果（Bertoglio和Carobrez，2002）
为了确保均匀的亮度，应始终使用间接光以避免产生硬阴影，这可能是小鼠偏好的地方，将其运动活动倾斜到迷宫的该区域。这可以通过适当的光反射器来完成
在测试每只动物后，应始终清洁迷宫。
确保清洁后迷宫完全干燥，或清洁剂的强烈气味可能改变小鼠的行为
如果在测试期间鼠标从开放臂脱落，实验者必须立即将其拾起并将其放回开放臂上。这在执行时应该注意和考虑实验分析。该动物可以从最终分析中排除。
只有当动物将所有四只爪子从中心正方形中放到一个臂上时，才考虑打开或关闭臂中的入口。然而，给定手臂上的两只爪子已经足以停止计算进入手臂的时间。如果动物用这两只爪子回到手臂，计时器应该继续，但没有登记。只有在完全退出后才会注册新条目。
在高架加迷宫中没有行为测试的年龄相关限制的证据。尽管数据支持青少年和老年动物中增加的焦虑样状态（Lynn和Brown，2010; Bessa等人，2005; Chen等人，2007），但是，任务已经被证实用于成功评估青少年，成年，中年和老年啮齿类动物中的焦虑样行为（Leo等人，2014; Warneke等人 2014; Carrasco等人，2013; Joshi和Pratico，2011; Pietrelli等人，2012; Doremus等人，2006）。

致谢

这里描述的协议已经改编自先前的研究（Leo等人，2014），其成功地鉴定小鼠的焦虑样样以及抗焦虑样行为。该项目得到了FAPERJ-Brasil（E-26/112.448/2012）和CNPq-Brasil（474443/2012-4）的财政支持。

参考文献

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