材料和试剂

Solanum lycopersicum 种子
Agar
次氯酸钠（NaClO）
硝酸钾（KNO 3）
硝酸铵（NH 4 NO 3）
硝酸钙[Ca（NO 3）2] 2 SiO 4 [O]
硫酸镁（MgSO 4）7H 2 O 3）
乙二胺-N，N双（2-羟基苯基乙酸）铁钠复合物（Fe-EDDHA）
硼酸（H 3 BO 3）
氯化锰（MnCl 2→4H 2 O）
硫酸锌（ZnSO 4，7H 2 O，7H 2 O）
硫酸铜（CuSO 4钠）5 H 2 O 2）/
钼酸钠（Na 2 MoO 4）2/2H 2 O 2）。
氯化钠（NaCl）
硫酸钠（Na 2 SO 4）*
氯化镁（MgCl 2）*
硫酸镁（MgSO 4）*
注意：这些盐只有在必须进行测定时才是必要的。标准测定用NaCl进行。
无盐营养液（见配方）
盐储备溶液（见配方）

设备

Eppendorf型管（1.5ml）注意：取下盖子，用剪刀剪切管端（图1A）。将管置于管架（具有密封底部，图1B）中，并使用50ml注射器（图1C-D）填充自来水中的0.6％琼脂（在微波中熔融）。

A）切割管，B）具有密封底部的架子，C）在架子中填充琼脂，和D）填充琼脂的管子。
不透明10升带盖的容器
使用聚乙烯容器（40cm长×30cm宽×12cm高）。用钻子钻孔以允许放置Eppendorf型管（图2）。

图2.带有钻孔盖以容纳Eppendorf型管的容器示例
培养皿
50 ml注射器
生长室
水族箱式空气泵
定时器控制
微波炉
巴斯德移液器
带有密封底部的Eppendorf型管的支架
塑料托盘，湿度圆顶
精密平衡（±0.001）

程序

种子萌发
1. 将种子在具有0.1％吐温20的次氯酸钠溶液（2.5％）中表面灭菌15分钟，随后在无菌蒸馏水中洗涤三次。
2. 将种子置于9cm直径的培养皿（每个培养皿中20-50粒种子）的三层湿润吸墨纸（图3A）的顶部，并在25℃下保持黑暗，直到发芽（3-6天，取决于基因型）（图3B）
  
  图3.种子准备和发芽的细节 A）培养皿中的种子，B）显示胚根出芽的发芽种子和C）填充有琼脂的Eppendorf型管中的发芽种子。
3. 将均质发芽的种子（3-6mm根长）放置在切割端填充有0.6％琼脂的Eppendorf型管中（图3C）。使用巴斯德吸管用水滴润湿琼脂表面。将保持管的架放置在托盘中并用湿度圆顶覆盖以保持高空气湿度（图4A）。将一些水（50-100毫升）放入托盘，以确保托盘内高的空气湿度。在25/18℃的生长室中在16/8小时光/暗光周期中保持苗
4. 通过稍微打开（1-2cm）湿度圆顶（图4C）和在一周转移到容器之后，将植物（完全膨胀的子叶阶段的幼苗，图4B）逐渐暴露于环境大气。
  
  图4.在覆盖的托盘中生长的小植物。A）用于幼苗培养的具有湿度圆顶的托盘，B）在完全膨胀的子叶阶段的幼苗的细节，和C）打开圆顶以允许驯化（由箭头指示）。
文化
1. 容器中充满营养培养基并定期充气（每半小时用"水族箱"型空气泵10分钟）。营养溶液（见配方）每4天更新一次（旧溶液必须完全除去）
2. 插入Eppendorf型管与同种植物（充分膨胀的子叶阶段有活性根生长）到盖孔，允许切口端与营养液接触（图5）。
  
  图5.生长在容器中的小植株（12-16天龄）的细节
3. 在实验期间，在25/18℃下在16/8小时光/暗光周期（200μmol光子m -2 s -1 s -1 ）中的生长室中维持植物。
4. 3-4周后，当植物具有三叶（图6）时，将等份的盐储备溶液（参见Recipes）加入到营养液中以获得所需的盐浓度（参见代表性数据）。将在含有非盐水营养液的容器中培养的植物用作对照。每种条件和基因型使用8到12株植物
5. 植物生物量（干重和鲜重）可以在10-15天后测量以确定盐度的影响。分离根和芽并在精密天平上称重鲜重。在将材料在60℃下保持48小时后记录干重
  
  图6.生长在容器中的番茄小植株（30-40天）。查看A）芽和B）根。

代表数据

已经描述了75-100mM NaCl显着降低了几种番茄品种中的生长（Nebauer等人，2013和本文中的参考文献; Corrales等人，2014）。在图7中，显示了在RAF番茄栽培品种中获得的代表性数据。较小量（50-75mM）的MgCl 2，MgSO 4和Na 2 SO 4，实现了类似的还原，并发现镁的毒性更高。

图7.不同盐和浓度对在暴露4,8和12天后测量的RAF番茄的总鲜重的影响。○：对照; ●：25mM; ▲：50mM; ◆：100mM（Nebauer等人 2013）

笔记

还提供了协议的代表性视频。

视频1.番茄中的盐度测定

食谱

非盐水营养液（对照培养基）
非盐水营养液（对照培养基）基于Hoagland 2号溶液（Hoagland和Arnon，1950）。

大量营养素	储备溶液（g/1L）	ml原液/L培养基
1 M KNO ₃	101.11克	3
1 NH NH 4 H H 2 PO 4 4	115.03克	0.5
1 M Ca（NO 3）2 sub 2 4H 2 O	236.15克	2
1 M MgSO 4。 7H 2 O	246.48克	1
0.5％（w/v）Fe-EDDHA	5克	0.5
微量营养素
H ₃ BO ₃	2.86克	1
MnCl 2 ^。 4H 0	1.81克	1
	0.22克	1
CuSO 4 ^。 5H ₂ 0	0.051克	1
Na 2 MoO 4 sub 。 2H O	0.09克	1

盐储备溶液
盐储备溶液（在蒸馏水中）：
5 M NaCl（292.2 g NaCl /升储液）
1 2M Na 2 SO 4（142.04g Na 2 SO 4 4）/升储备溶液）
2.5M MgCl 2（508.25g MgCl 2·6H 2 O /升储备溶液）
2M MgSO 4（492.96g MgSO 4）/7H 2 O 2 /升储备溶液）
将等份的盐储备溶液加入对照培养基中以制备盐水培养基

致谢

我们衷心感谢来自国家农业技术研究所（INIA;项目编号：2009-0004-C01,2012-0008-C01）和西班牙科学和创新部的拨款（项目编号：BIO2010-14871和ERA-NET GEN2006-27772-C2-2）。

参考文献

Corrales，AR，Nebauer，SG，Carrillo，L.，Fernandez-Nohales，P.，Marques，J.，Renau-Morata，B.，Granell，A.，Pollmann，S.，Vicente-Carbajosa，J.，Molina ，RV和Medina，J。（2014）。番茄循环因子的表征揭示了控制开花时间和非生物胁迫反应的保守和新功能。 65（4）：995-1012。
Hoagland，D.R。和Arnon，D.I。（1950）。。加利福尼亚农业实验站 347（第二次编辑）。
Nebauer，S.G.，Sanchez，M.，Martinez，L.，Lluch，Y.，Renau-Morata，B.and Molina，R.V。（2013）。光合性能的差异及其与番茄品种对不同盐响应的生长的相关性。 Plant Physiol Biochem 63：61-69