材料和试剂

怀孕Wistar大鼠是在妊娠14天左右获得的注意：确定P0（出生后第0天）很重要。
完全弗氏佐剂（CFA）（25μl）（Sigma-Aldrich，目录号：F5881）
注意：CFA在使用前用0.9％无菌盐水稀释（2：1，CFA：盐水）。

设备

塑料笼（用于保持动物）
自动温度控制系统
胰岛素注射器超细6 mm（15/64"）x 31 G针
电子秤（灵敏度0.1 g）

程序

<>道德声明：此处讨论的所有程序都符合并获得了圣保罗联邦大学独立伦理委员会的批准。

获得当地伦理委员会的批准。
来自妊娠第14天的怀孕Wistar大鼠必须单独饲养在塑料笼中并放置在配备有自动温度控制系统（23±2℃），通风，12 -h明暗循环（上午7:00点亮），并且不受限制地进入食物和水
出生日期指定为P0。
每只窝在出生后24小时内限制为8只幼仔，不包括体重低于0.5g的幼犬。
从P1（出生后第一天）开始，来自所有窝的动物每周用电子秤（灵敏度0.1g）记录体重，直到实验方案结束。
为了比较在神经发育期间CFA注射的效果，在出生后第1,8或21天，幼鼠接受单次足底皮下注射炎性试剂，即完全弗氏佐剂（CFA;25μl）到左后爪。 > 注意：注意避免每只小狗花费超过2分钟。这将导致坝中的应力水平更高。
将单个垫料中的所有动物分配到特定的组（在P1，P8，P21或对照中CFA刺激），以避免处理不同年龄的幼仔对于对其余的垫料的母体护理的影响。
在注射CFA后，幼仔与他们的大坝回到他们的家笼。
结果，刺激的小狗的爪子在注射后几小时开始显示肿胀，水肿和发红，持续5-7天。水肿可以在视觉上观察到，如图1所示。
对照动物像实验幼崽一样进行针刺，但没有流体输注
所有的仔猪在P21断奶，然后从同一个实验组的5只动物的相同性别组。
为了避免凋落物的影响，来自不同垃圾的幼仔被随机分配到不同的组

图1.在A中，在出生后第1天皮内注射CFA。刚注射后，左爪子皮肤下的漂白和肿胀是可见的。在注射CFA后的第3天和第6天，与右爪相比，左爪仍然肿胀（红色箭头）。

笔记

所有程序在上午10点之前进行，当皮质酮的水平低。

致谢

这项工作得到FAPESP的支持，授予LC（09/53646-0）。

参考文献

Anand，K.J.，Coskun，V.，Thrivikraman，K.V.，Nemeroff，C.B.and Plotsky，P.M。（1999）。新生大鼠幼仔中重复性疼痛的长期行为影响生理Behav 66（4）：627-637。
Anand，K.J.，Palmer，F.B.and Papanicolaou，A.C。（2013）。重复的新生儿疼痛和早产儿儿的神经认知能力。 /em> 154（10）：1899-1901。
Doburg，S.M.，Chau，C.M.，Cheung，T.P.，Moiseev，A.，Ribary，U.，Herdman，A.T.，Miller，S.P.，Cepeda，I.L.，Synnes，A.and Grunau，新生儿疼痛相关的压力，功能性皮质活动和视觉感知能力在学龄儿童出生在极低的胎龄。疼痛 154（10）：1946-1952。
Fitzgerald，M。和Anand，K。（1993）。疼痛的发展神经切开术和神经生理学。 In：Schechter，N.，Berde，C.and Yaster，M。（eds）。婴儿，儿童和青少年的疼痛管理。巴尔的摩：威廉姆斯& Williams，pp。11-32。
Jobe，A. H.（2014）。新生儿重症监护病房感觉剥夺的风险 164（6）：1265-1267。
Kim，J.J.，Foy，M.R.and Thompson，R.F。（1996）。行为压力通过N-甲基-D-天冬氨酸受体激活修饰海马的可塑性。 em> Proc Natl Acad Sci USA 93（10）：4750-4753。
Leslie，A.T.，Akers，K.G.，Martinez-Canabal，A.，Mello，L.E.，Covolan，L.and Guinsburg，R。（2011）。新生儿炎症性疼痛增加大鼠幼崽的海马神经发生。 Neurosci Lett < em> 501（2）：78-82。
Lima，M.，Malheiros，J.，Negrigo，A.，Tescarollo，F.，Medeiros，M.，Suchecki，D.，Tannus，A.，Guinsburg，R.and Covolan，性别相关的长期行为和海马细胞改变后伤害性刺激整个产后发育大鼠。/a> Neuropharmacology 77：268-276。
Malheiros，J.M.，Lima，M.，Avanzi，R.D.，Gomes da Silva，S.，Suchecki，D.，Guinsburg，R.and Covolan，L.（2014）。重复的有害的新生儿刺激增加了齿状回脑细胞增殖和海马脑源性神经营养因子水平。 Hippocampus 24（4）：415-423。
Vinall，J.，Miller，S.P.，Bjornson，B.H.，Fitzpatrick，K.P.，Poskitt，K.J.，Brant，R.，Synnes，A.R.，Cepeda，I.L.and Grunau，R.E。（2014）。早产儿的侵入性程序：学龄期的大脑和认知发展。 em> Pediatrics 133（3）：412-421。
Vinall，J.，Miller，S.P.，Synnes，A.R.and Grunau，R.E。（2013）。父母的行为在出生非常早的儿童中矫正18个月矫正年龄的新生儿疼痛和内在化行为之间的关系。疼痛 154（9）：1831-1839。
Wilson，D.A。（1995）。 NMDA受体介导由嗅觉剥夺诱发的一种形式的功能可塑性的表达。 Brain Res 677（2）：238-242。