材料和试剂

选择植物材料或细胞壁制剂（见注1）
环己烷二胺四乙酸（CDTA）（Fluka，目录号：34588）
Tris-碱（Sigma-Aldrich，目录号：T6066）
氢氧化钠（Thermo Fisher Scientific，目录号：S318）
液氮
CDTA提取缓冲液（参见配方）

设备

液氮容器
油漆振动器（例如Harbil，型号：5G-HD）和滚珠轴承（例如直径3mm的钢珠）（灰浆和杵或珠磨机）
媒体瓶
单通道移液器
适于在95℃下使用和用于在液体N 2中冷冻的Microfuge管（Thermo Fisher Scientific，目录号：02-707-355）
注意：我们使用2毫升螺帽管。
移液器提示
水浴或培养箱
涡流搅拌器
能够以10,000 x g 旋转的微量离心机
可选：螺旋盖管或盖锁

程序

预热水浴或培养箱至95°C和预热CDTA提取缓冲液
收集植物组织在管 - 我们使用叶材料从约。 4周龄拟南芥植物。三个完全扩展的拟南芥叶重约250mg
在液氮中冷冻含有组织的管（组织可以储存在-80℃）
使用球轴承和油漆搅拌器，研钵和杵或珠磨机粉碎冷冻的组织。用于粉碎组织的方法不是关键的。保持组织冷冻。如果使用油漆搅拌器，三次循环三分钟，通常足以粉碎组织
向250mg冷冻粉碎的拟南芥组织中加入1ml CDTA提取缓冲液。
将管置于95℃。使用注意，液体会变得很热，盖子可能打开; 因此使用螺旋盖管或盖锁来固定盖子
孵育15分钟，每5分钟涡旋一次。
在室温下以10,000×g离心10分钟
上清液含有果胶
上清液可以冷冻和冷冻干燥用于下游应用

笔记

我们直接使用粉碎的拟南芥叶片材料（Bethke ，，2014）。或者粗制细胞壁制剂，如醇不溶性残留物（Gille等人，2009）制备物等。可以使用（预热水浴和提取缓冲液，然后进行步骤5）
不同的组已报道了不同的提取时间和温度，例如在95℃（Siedlecka等人，2008）下15分钟或在室温下4小时（Moller等人al。，2008）。根据我们的经验，当在95℃下进行提取15分钟时，与在室温下更长的提取相比，可以提取两倍的果胶量。
不同的组利用类似的方案从各种单子叶和双子叶植物中提取果胶，黄瓜，番茄，芹菜（Jarvis等人，1982），杨树（Siedlecka等人，2008），大豆（Huisman等人。，2001）或小麦（Wiethölter等人，2003）。
提取缓冲液可以在室温下储存数周
使用该程序提取的果胶可以用于各种下游应用，包括用果胶特异性抗体的点印迹分析，糖分析，离子交换层析或测定果胶的酯化程度（Bethke等人， 2014; MacDougall等人，1997）。

食谱

CDTA提取缓冲区
50mM CDTA
50mM Tris-碱
使用氢氧化钠将pH调节至7.2

致谢

这项工作由美国能源部基础能源科学办公室的化学科学，地球科学和生物科学司通过授予DE-FG02-05ER15670的J.G.
许多实验室在过去使用类似的协议。我们已经从Siedlecka等人（2008）修改了该协议。

参考文献

Bethke，G.，Grundman，R.E.，Sreekanta，S.，Truman，W.，Katagiri，F.and Glazebrook，J。（2014）。拟南芥 PECTIN METHYLESTERASE有助于针对丁香假单胞菌的免疫植物生理学 164（2）：1093-1107。
Gille，S.，Hansel，U.，Ziemann，M。和Pauly，M。（2009）。通过使用水解酶的正向化学遗传方法鉴定植物细胞壁突变体。 Proc Natl Acad Sci USA 106（34）：14699-14704。
Harholt，J.，Suttangkakul，A。和Vibe Scheller，H。（2010）。果胶的生物合成植物生理学 153（2）：384-395。
Huisman，M.M.H.，Fransen，C.T.M.，Kamerling，J.P.，Vliegenthart，J.F.G.，Schols，H.A.and Voragen，A.G.J。（2001）。钙结合果胶在植物细胞壁中的比例 /em> 154（4）：344-346。
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Mohnen，D。（2008）。果胶结构和生物合成 Curr Opin Plant Biol 11 （3）：266-277。
Moller，I.，Marcus，S.E.，Haeger，A.，Verhertbruggen，Y.，Verhoef，R.，Schols，H.，Ulvskov，P.，Mikkelsen，J.D.，Knox，J.P.and Willats，通过其碳水化合物微阵列结合谱的分层聚类，高通量筛选针对植物细胞壁聚糖的单克隆抗体。 Glycoconj J 25（1）：37-48。
Siedlecka，A.，Wiklund，S.，Peronne，MA，Micheli，F.，Lesniewska，J.，Sethson，I.，Edlund，U.，Richard，L.，Sundberg，B.and Mellerowicz，EJ（2008）。果胶甲酯酶抑制毛白杨木材细胞中的侵入性和对称性细胞生长 >。 Plant Physiol 146（2）：554-565。
Wiethölter，N.，Graeβner，B.，Mierau，M.，Willats，W.G.T.，Knox，J.P.，Moerschbacher，B.M。（2003）。使用HF溶剂分解从类胡萝卜素单子叶植物小麦的II型细胞壁分离和表征同聚半乳糖醛酸/a>。 Carbohydrate Res 338（5）：423-431。