材料和试剂

脂多糖（LPS）（Sigma-Aldrich，目录号：L2880）
用于小鼠麻醉的Ketamine（Henry Schein，目录号：010177）和Xylazine（Henry Schein，目录号：033198）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）（见Recipes）

设备

插管平台（图1），其可以使用0.5英寸（1.3cm）板构造。较长的板应该是大约6英寸（15cm）宽×14英寸（36cm）长。较小的支撑板应该是大约6英寸（15cm）宽×7英寸（18cm）长。在较长板的背面上，钉有大约2.5英寸（6.4cm）×1.5英寸（3.8cm）大小的两个矩形木材，形成比0.5英寸（1.3cm）略宽的凹槽。较小的板配合到该凹槽中，从而产生插管平台的45度角。最后，在平台的顶部切割一个V形槽，并在2个图钉（或指甲）之间缝线（3-0或更大）。或者，可以购买啮齿动物插管架（Braintree Scientific，Inc.，目录号RIS 100）

图1。插管平台代表模型
光纤照明器（Cole Parmer Fiber-Lite，型号：9745-00）
弯曲的钝端钳
聚乙烯管PE-10（Intramedic，目录号：427401）
带有针头的胰岛素注射器（无菌）
免提双目放大镜
保暖垫（Gaymar T/Pump Classic，型号：TP650）@ 38°C设置

程序

该方案描述了用于气管内（i.t.）滴注（Su等人，2004）的直接视觉滴注方法的程序。

准备
使用活体动物的所有方案必须获得机构动物护理和使用委员会批准，并且必须遵循官方批准的用于实验动物的护理和使用的程序。此外，用实验动物处理生物危害材料应使用推荐的动物生物安全程序进行处理和处理。在适当的情况下，处理动物的人必须获得官方认证，以便执行动物程序和提交伦理批准程序。
1. 称量动物的天平，以计算每只小鼠所需的LPS剂量。
2. 在Eppendorf管中，制备所需的LPS溶液（稀释于 PBS），体积不超过50μl。 LPS浓度将变化取决于实验目的，但通常在1mg/kg之间（轻度肺损伤）和10mg/kg（严重肺损伤）。库存解决方案可以制备LPS，等分，并在-80℃冷冻以帮助标准化滴注
3. 连接1英寸（2.5厘米）的PE-10管到胰岛素针和注射器并且用LPS溶液加载它。重要的是，注射器应该预装至少50微升的空气确保所有液体体积从针排出。
4. 麻醉动物用氯胺酮（50-80毫克/公斤）和赛拉嗪（8-12 mg/kg）使用胰岛素注射器腹膜内注射。麻醉剂可以在同一注射器中混合。这种麻醉剂量应该保持麻醉20-30分钟。
气管内滴漏
1. 使用爪子夹捏刺激几分钟检查麻醉的水平麻醉后交付。一旦观察到适当的麻醉，通过其门牙悬挂鼠标在仰卧位置插管平台（图2A）
2. 打开光纤照明器并将其放置在气管上。（图2A-B）
3. 使用弯曲的钝端钳，仔细抓住舌头和在向上和向左运动，定位舌头以获得可视化的喉。免提双筒望远镜放大镜可用于改进喉的可视化。
4. 定位光纤光源以透射气管开口
5. 插入PE-10管（连接到胰岛素针和注射器） 0.5-1厘米进入气管，并滴注LPS溶液（体积不超过50μl）。
6. 为了避免气管内滴注物逃离气管，将PE-10管道留在原位5秒钟。
7. 保持鼠标在插管平台上的相同位置至少30秒。
8. 取出鼠标，将其放置在加热垫上以便恢复。
  
  图2。 A-B。鼠标定位在插管平台上。 C。支气管肺泡灌洗（BAL）白细胞积聚（WBC）48 h 在LPS滴注后以5mg/kg的剂量。 WBCs用a 库尔特计数器。

食谱

磷酸盐缓冲盐水（PBS）
0.2g/L KH 2 PO 4 sub/
2.16g/L Na 2 HPO 4
0.2 g/L KCl
8.0g/L NaCl 无菌过滤

致谢

这项工作得到国家心肺血液研究所拨款R01 HL107386（M.R.L.）的支持。

参考文献

Su，X.，Looney，M.，Robriquet，L.，Fang，X.and Matthay，M.A。（2004）。直接视觉灌注作为有效地将流体输送到麻醉小鼠远端空间的方法。 Exp Lung Res 30（6）：479-493。