Bencke-Malato，M.，Cabreira，C.，Wiebke-Strohm，B.，Bucker-Neto，L.，Mancini，E.，Osorio，MB，Homrich，MS，Turchetto-Zolet，A.，De Carvalho，M 。，Stolf，R.，Weber，R.，Westergaard，G.，Castagnaro，AP，Abdelnoor，RV，Marcelino-Guimaraes，FC，Margis-Pinheiro，M.and Bodanese-Zanettini，大豆WRKY家族的全基因组注释和参与响应的基因的功能表征 Phakopsora pachyrhiziz 感染。 BMC Plant Biol 14（1）：236。

Scherb，C.T。和Mehl，A。（2006）。 SBI杀真菌剂，也适用于其他杀真菌剂类 - 离体叶试验。 FRAC （杀菌剂抗性行动委员会）

Twizeyimana，M.，Ojiambo，P.，Ikotun，T.，Paul，C.，Hartman，G.and Bandyopadhyay，R。（2007）。大豆种质田间，温室和独立叶评估的比较 Plant Dis 91（9）：1161-1169。

Wiebke-Strohm，B.，Pasquali，G.，Margis-Pinheiro，M.，Bencke，M.，Bucker-Neto，L.，Becker-Ritt，AB，Martinelli，AH，Rechenmacher，C.，Polacco， Stolf，R.，Marcelino，FC，Abdelnoor，RV，Homrich，MS，Del Ponte，EM，Carlini，CR，De Carvalho，MC和Bodanese-Zanettini，MH（2012）。无处不在的尿素酶影响大豆对真菌的易感性。植物分子生物学> 79（1-2）：75-87。

...

无菌碘伏湿巾
无菌骨蜡
感应室
立体定位装置（KOPF ，型号：900小动物立体定位仪）
立体定位钻（KOPF ，型号：1474高速立体定位钻）
动物气体麻醉系统（RDW Life Science）
温度控制器和温度传感器系统（RDW Life Science，型号：69001）
显微注射泵（KD Scientific，型号：KDS310）
Hamilton注射器26G（5μl）
磁共振成像（MRI）
脑基质（RDW Life Science，目录号：68710）

程序

立体定向装置设置，并在手术前记录老鼠的体重（图1）
在诱导室中用3％异氟烷将大鼠深度麻醉
为了确保麻醉深度，通过脚趾测试大鼠。
失去知觉后，使用鼻夹和两个耳杆将大鼠固定在立体定位框架上（图1）。
将温度传感器插入大鼠肛门，并且通过温度控制器将大鼠的温度维持在37℃。
用2％异氟烷通过防毒面罩将大鼠保持麻醉
在剃毛后，通过无菌碘浮床擦拭器作为手术区域制备大鼠头部的上表面
在头部表面上形成纵向切口以暴露前囟
使用立体定向装置，标记前囟点侧边3mm处的左点
通过高速立体定位钻在标记点钻穿过颅骨的钻孔。
注意：钻孔的深度取决于操作者的经验。我们可以通过免疫组织化学评估损伤。
通过5μlHamilton注射器26G以0.2μl/min的缓慢速率将1μlIV型胶原酶（0.25IU /μl）注射入纹状体（在颅骨下方5mm）。
注射器在注射完成后约7分钟保持在该位置
约7分钟后，缓慢取出注射器。
一旦注射器被取出，无菌骨蜡被用来快速堵塞孔
头部表面的皮肤用4-0 monocryl封闭
将大鼠从立体定向装置中取出，并允许在温热的笼子中恢复，自由进食和水。
注意：恢复期约为20-30分钟。
为了评估由胶原酶IV诱导的ICH的大鼠模型，处死大鼠，并且在手术后将脑切成切片以评估血肿的体积（参见注释3）（图2A和2B）。此外，评估ICH大鼠的神经行为（Bederson检验）（图2C-2F）。最后，还通过MRI分析血肿的体积（图2G-2H）

图1.表示一组立体定位装置系统和安装在立体定位框架中的老鼠的图片。 A.立体定位框架; B.输液泵; C.立体定位钻; D.鼻夹; E.耳杆; F. Hamilton注射器26 G.

图2.胶原酶IV诱导的ICH大鼠的评价 A.术后3小时的血肿。 B.手术后3天血肿。 C-F。手术后3天的神经行为测试，例如未充分伸展对侧前肢（C），未能屈曲后肢（E），环绕行走（D）以及未能在梁上保持平衡。 G-J。手术后3天MRI检查的血肿体积。

笔记

胶原酶IV的浓度应该精确地为0.25IU /μl，因为胶原酶IV的浓度的小变化可能导致血肿的体积不同。
注射的立体特异性位置胶原酶IV在前囱的侧面3mm和颅骨下面5mm
大脑由脑基质切片，其可切割约1mm厚度的脑。在切片前，大脑应在-40℃下冷冻约20分钟
Bederson试验（Bederson等人，1986）是对中风大鼠的神经学状态的评价。大鼠将通过握住尾巴悬挂约1米高，将观察和记录前肢屈曲的状态。延伸其两个前肢的大鼠将被认为是正常的或没有可观察到的缺陷，代表0级。如果发生前肢的任何一致的弯曲，例如只有手腕弯曲或具有肘伸展的肩部内收，或甚至手腕的完全屈曲和肘部，其具有对应于梗塞侧的肩部的内收和内旋，大鼠将被分配至少1级。如果进一步，在轻轻地在肩部后面提供侧向压力之后，大鼠不能抵抗侧向推向偏瘫侧然后使大鼠自由移动。是否大鼠将朝向瘫痪侧圈是等级3的指标。通常，显示盘旋行为，即3级的大鼠具有更大的神经缺陷。

致谢

该研究得到了中国国家自然科学基金（81171088）的资助。

参考文献

Andaluz，N.，Zuccarello，M。和Wagner，K.R。（2002）。脑内出血的实验动物模型。 Neurosurg Clin N Am 13（3）：385-393。
Belayev，L.，Saul，I.，Curbelo，K.，Busto，R.，Belayev，A.，Zhang，Y.，Riyamongkol，P.，Zhao，W.and Ginsberg，小鼠实验性脑内出血：双注射模型的组织学，行为和血液动力学表征。笔划 34（9）：2221-2227。
Bederson，J.B.，Pitts，L.H.，Tsuji，M.，Nishimura，M.C.，Davis，R.L。和Bartkowski，H。（1986）。大鼠大脑中动脉闭塞：模型评估和神经系统检查的发展。笔划 17（3）：472-476。
高等学校学报（社会科学版）。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。移植的神经干细胞在大鼠脑内出血后调节调节性T细胞，gammadelta T细胞和相应的细胞因子。/a> Int J Mol Sci 15（3）：4431-4441
Inagawa，T。（2002）。脑内出血的实际发生率和死亡率是多少？ Neurosurg Rev 25（4）：237-246。
Ingall，T。（2004）。中风 - 发病率，死亡率，发病率和风险。 J Insur Med 36（2）：143-152。
James，M.L.，Warner，D.S。和Laskowitz，D.T。（2008）。脑内出血的临床前模型：平移视角。 Neurocrit Care < em> 9（1）：139-152。
Kazui，S.，Naritomi，H.，Yamamoto，H.，Sawada，T.and Yamaguchi，T。（1996）。扩大自发性脑内出血。发病和时间过程。中风 27（10）：1783-1787。
Lu，Q.，Gao，L.，Huang，L.，Ruan，L.，Yang，J.，Huang，W.，Li，Z.，Zhang，Y.，Jin，K.and Zhuge， 2014）。抑制雷帕霉素的哺乳动物靶标改善了大鼠脑内出血后的神经行为缺陷并调节免疫应答。 a> J Neuroinflammation 11：44
MacLellan，C.L.，Silasi，G.，Poon，C.C.，Edmundson，C.L.，Buist，R.，Peeling，J.and Colbourne，F。（2008）。大鼠脑内出血模型：比较胶原酶与血液输注。 Blood Flow Metab 28（3）：516-525。
Qureshi，A.I.，Tuhrim，S.，Broderick，J.P.，Batjer，H.H.，Hondo，H.and Hanley，D.F。（2001）。自发性脑内出血 N Engl J Med 344（ 19）：1450-1460。
Rosenberg，G.A.，Mun-Bryce，S.，Wesley，M。和Kornfeld，M。（1990）。大鼠中胶原酶诱导的脑内出血中风 21 （5）：801-807。
Wang，Z.，Cui，C.，Li，Q.，Zhou，S.，Fu，J.，Wang，X.and Zhuge，Q。（2011）。胎儿神经干细胞的脑内移植改善了小鼠脑内出血中风引起的脑功能障碍。 J Cell Mol Med 15（12）：2624-2633。