材料和试剂

胰岛素注射器（Thermo Fisher Scientific，目录号：14-841-31）
0.22μm过滤器
C57BL/6小鼠，通常为8-12周龄小鼠（雄性或雌性）
LPS大肠杆菌0111：B4（Sigma-Aldrich，目录号：L2630-100MG）
Dulbecco磷酸盐缓冲盐水（DPBS）（Corning，目录号：21-030-CV）
XenoLight RediJect炎症探针（PerkinElmer，目录号：760535）
鲁米诺钠盐（Sigma-Aldrich，目录号：A4685）
异氟烷（Henry Schein，Isothesia ^TM，目录号：10014450）
5mg/ml LPS（参见配方）
20 mg/ml鲁米诺钠盐储备溶液（见配方）

设备

麻醉机（VetEquip，型号：901808）或类似的麻醉设备
可充电微调器（Braintree Scientific，目录号：VLP-323 75）
Scale（Kent Scientific，目录号：SCL66110）
生物安全柜
IVIS光谱（PerkinElmer，型号：124262）或类似的发光成像设备

软件

生活图像软件（PerkinElmer）

程序

在LPS腹膜内注射前两天，麻醉机中的小鼠和一旦小鼠麻醉，用修剪器刮剃腹部区域，作为毛发淬灭发光信号（图1）。

图1.在麻醉下用微调器剃除其腹部区域的小鼠的代表性图片
称重小鼠。
在实验当天，在DPBS中稀释LPS，并制备注射用注射器
腹膜内注射2.5mg/kg LPS或相同体积DPBS的小鼠用于对照组（注射体积约200μl）。
3小时后，用200mg/kg的XenoLight Rediject炎症探针或200mg/kg鲁米诺钠盐（注射体积约200μl）腹膜内注射小鼠。
将小鼠在IMPAC6麻醉室连接到IVIS光谱。
将小鼠转移到IVIS光谱，将小鼠腹部朝上放入小室，并将每个鼻子放在提供异氟烷的锥体内（图2）。
开始成像麻醉的小鼠XenoLight Rediject炎症探针注射后10分钟，5分钟暴露捕获由MPO活性产生的体内生物发光作为嗜中性粒细胞浸润的标志物。为了想象5只小鼠选择视野D并选择1.5cm对象高度（图2和3）（Gross等人，2009; Tseng和Kung，2012）。

图2. i.p.后8周龄雄性C57BL/6小鼠体内成像的代表性实例。注射PBS（左）或LPS（2.5mg/kg体重）（右）

图3. IVIS采集控制面板的屏幕截图
使用Living Image软件对MPO信号进行量化。首先使用ROI工具选择感兴趣区域（ROI），并选择自动绘制测量ROI，并执行ROI分析以测量光子辐射。还测量背景ROI，并从您的ROI测量中减去。使用平均辐射率绘制图表。

食谱

5mg/ml LPS
在DPBS中稀释LPS。
用0.22μm过滤器和等分试样储液在-80℃下过滤灭菌
20mg/ml鲁米诺钠盐储备液
在DPBS中制备20mg/ml鲁米诺钠盐储备溶液注意：注射的鲁米诺钠盐必须每次在DPBS（20mg/ml）中新鲜制备，用0.22μm过滤器过滤除菌，并避光使用。

致谢

该方案改编自以前发表的研究（de Almeida等人，2015）。这项工作得到国立卫生研究院（AI099009和AR064349至C.S.，AR066439至A.D.，AI120625和AI120618至C.S.和A.D.，T32AR007611至L.d.A.和美国心脏协会13GRNT17110117至C.S.）的赠款支持。

参考文献

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