材料和试剂

25号针（用于接种）（BD，目录号：305127）
组织培养处理培养皿（Corning，目录号：430293）
Eppendorf管（1.5ml）（Eppendorf，目录号：022363204）
Falcon 15 ml锥形离心管（Corning，目录号：352196）
低温小瓶
套管针注射器，10号（美国创新研究，目录号：MP-182）
1cc U-100胰岛素注射器，28磅x½"针（用于酮洛芬注射）（BD，目录号：329410）
口服管饲技巧，22磅x 1"，1¼毫米球（Cadence，目录号：7901）
结核菌素注射器，1ml（用于接种）（BD，目录号：309659）
Betadine溶液拭子棒（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，目录号：19-061617）
无菌酒精制品垫，70％异丙醇（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，目录号：22-363-750）
无菌细胞制剂或患者来源的肿瘤组织
4-7周龄的Athymic裸鼠[Crl：NU（NCr）-Foxn1 ^nu]（Charles River Laboratories Internetional，目录号：490）
4-7周龄NSG小鼠（NOD γ，NOD-scid IL2Rg ^null，NOD- scid IL2Rgamma ^null）（JACKSON LABORATORY，目录号：005557）
胰蛋白酶或适当的酶
汉克斯平衡盐溶液（HBSS）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：14170112）}
研究动物诊断实验室（RADIL）感染性微生物PCR扩增试验（IMPACT）（IDEXX BioResearch）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）pH 7.4（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：10010049）}
青霉素 - 链霉素（5,000U/ml）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：15070063）}
70％乙醇
手术清洁剂
异氟烷液体吸入剂OD 99.9％（Henry Schein Medical，目录号：1182097）
Ketofen ^{®（酮洛芬）（Patterson Veterinary Supply，目录号：10004029）}
吸收性垫片（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，目录号：S67011）
10％中性福尔马林（Sigma-Aldrich，目录号：HT501128-4L）
FBS
DMSO
可选材料和试剂

17β-雌二醇，60天释放丸（美国创新研究，目录号：SE-121）
兽医级手术胶（Patterson兽医用品，目录号：07-805-5031）
低温培养基（见下表）
细胞冷冻容器（Corning，目录号：432010）
内螺纹低温小瓶，2.0毫升（康宁，目录号：430488）
液氮

设备

数字卡钳（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，目录号：06-664-16或美国三丰，目录号：500-163-30）
安全解剖刀（Merit Medical Systems，目录号：SMS210）
伤口夹钳9毫米（Roboz手术器械，目录号：RS-9260）
9 mm伤口夹（Roboz Surgical Instrument，目录号：RS-9262）
伤口夹去除器4"（Roboz手术器械，目录号：RS-9263）
耳冲2毫米; 2"长（Roboz手术器械，目录号：65-9900）
微解剖剪刀4''锋利尖锐（Roboz手术器械，目录号：RS-5912）
莫洛尼钳锯齿状轻微曲线4.5"长（Roboz手术器械，目录号：RS-8254）
微解剖钳锯齿状，全曲线，4"长（Roboz手术器械，目录号：RS-5137）
异氟醚室和鼻锥
Fisher科学幻灯片加热器型号77（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，目录号：12-594）
Oster Cord/Cordless trimmer（Patterson Veterinary Supply，目录号：07-880-1877）
文化罩

程序

准备移植细胞
1. 根据推荐条件生长和扩大细胞。如果细胞从低温储存中解冻，在收获前应确保至少两次传代细胞进行移植。
2. 在使用胰蛋白酶或特定细胞系合适的酶的指数生长期（约80-90％汇合）收获细胞。将细胞悬浮于培养基加血清。
3. 计数单元格。
4. 旋转细胞在225℃下在4℃下5分钟。将HBSS中的细胞重悬于0.5-2百万个细胞/200μl的浓度。
5. 将细胞放在冰上并运送至生殖细胞。

注意：

不是所有的细胞系都将在体内生长。强烈建议进行一项初步研究，以确定在注射后2-5周内发展成100 mm 3/sup的肿瘤所需的细胞的最佳浓度。
细胞应该进行测试，以确保它们不会被对免疫缺陷小鼠有害的病毒污染。这可以使用传统的鼠抗体生产（MAP）测试或更灵敏的基于PCR的测试之一进行，例如研究动物诊断实验室（RADIL）感染性微生物PCR扩增试验（IMPACT）（IDEXX BioResearch）。 em>

皮下注射或乳腺脂肪垫注射细胞
注意：请查看视频以了解有关步骤的其他信息（视频1）。

<！ - flashid2100v147开始 - >
视频1.异种移植手术的准备

<！ - flashid2100v147结束 - >
1. 如果使用带头发的免疫缺陷小鼠，可能需要用电动剪刀剃须。
  1. 对于皮下注射，将后腿的右侧背侧剃刮至前肢。
  2. 对于乳房脂肪垫注射，定位第四个乳腺脂肪垫（在腹侧），并将毛皮刮去第四个乳腺脂肪垫，并向上靠近鼠标的背侧。
2. 以适当体积（通常为0.1-0.2毫升）填充25号针头，仔细排出可能进入注射器的任何气泡。
3. 注入细胞：
  1. 对于皮下注射，通过用拇指和食指抓住肩膀上的皮肤使得前腿伸出到侧面，保持前脚不要将注射器推开，从而将动物限制在直立位置。
  2. 对于乳房脂肪垫注射，通过用拇指和中指抓住肩膀上的皮肤使得前腿伸出到侧面，使动物处于直立位置。
4. 此时，鼠标可以放回笼子中。

注意：要进行适当的放置，染色如台盼蓝可以注射到皮下袋或乳房脂肪垫中。重要的是避免注射到乳房脂肪垫的腹股沟淋巴结中。

准备原发肿瘤组织进行移植
建议使用肿瘤片段进行原代和连续的肿瘤移植，而不是单细胞制剂，以保持分子和组织学异质性。
1. 收到患者样本时，请始终将其保持在冰上，直至组织被处理
2. 使用人体组织的专用组织培养罩，取组织样品并放入无菌的100毫米组织培养皿中。
3. 将1ml含1％青霉素 - 链霉素的PBS吸移到组织上以保持其湿润。这也有助于防止组织在处理时粘到仪器上。
4. 使用无菌剪刀和镊子将肿瘤切割成可植入的块（约3 x 3 x 3 mm）。
5. 将肿瘤片放在含有1％青霉素 - 链霉素的冰冷的PBS中，根据肿瘤块的体积将其放入Eppendorf管或15ml锥形管中，并放在冰上。
6. 如果需要，将剩余的肿瘤冻结在液氮中，以备将来分析
7. 用70％乙醇喷洒所有仪器，然后用手术清洁剂清洗，并通过高压灭菌消毒
8. 一旦肿瘤块被运送到vivarium，请按照下面的手术步骤。

注意：患者样品不是常规测试血源性病原体。处理人体组织时应遵循适当的技术和安全方案

准备冷冻保存的肿瘤组织进行移植
1. 在37℃水浴中将低温小瓶中的肿瘤解冻约2分钟
2. 使用人体组织的专用组织培养罩，用无菌镊子从低温小瓶中取出肿瘤，并置于无菌的100毫米组织培养板中。
3. 如果肿瘤组织大于27 mm 3，使用无菌剪刀将肿瘤切割成可植入的大小块（约3 x 3 x 3 mm）。
4. 将肿瘤片放在含有1％青霉素 - 链霉素的冰冷的PBS中，根据肿瘤块的体积将其放入Eppendorf管或15ml锥形管中，并放在冰上。
5. 将肿瘤片段运送到生殖器后，按照下面的手术方法进行。
收集患者来源的异种移植物进行连续移植
注意：请查看视频以了解有关步骤的其他信息（视频2）。

<！ - flashid2100v148开始 - >
视频2.收集患者来源的异种移植物进行连续移植

<！ - flashid2100v148结束 - >
对于用于药物研究的连续移植或移植，通常可以从单个肿瘤移植物获得20-50个可移植片。至关重要的是要避免肿瘤的坏死区域
1. 根据您的机构IACUC方案对携带病人来源的肿瘤的小鼠进行安乐死。理想情况下，安乐死应在与肿瘤植入手术相同的房间内进行
2. 安乐死后立即用无菌技术清除PDX肿瘤，如下所示：
  1. 将鼠标放在吸收垫上，用70％乙醇将整只小鼠向下喷，并集中在肿瘤区域上
  2. 设置两套无菌镊子和剪刀，放在100毫米培养皿中，以避免表面污染。
  3. 使用两套分开的镊子和剪刀去除肿瘤。第一套用于切入皮肤（脏面）。第二组应用于肿瘤的内部解剖（干净侧）。小心不要让肿瘤接触鼠标的外部皮肤或任何其他潜在污染的地方。
  4. 将肿瘤置于新的无菌100毫米组织培养皿中。
3. 用含有1％青霉素 - 链霉素的冰冷的PBS冲洗肿瘤（每个肿瘤约1ml）。
4. 切割和处理切片之前冷冻保存，组织学或快速冷冻所需的任何组织
5. 根据需要将肿瘤切割成尽可能多的植入物（约3 x 3 x 3 mm），尽可能快地工作。
6. 将片放在含有1％青霉素 - 链霉素的冰冷的PBS中，放入冰上的新的无菌培养皿中。
7. 继续将肿瘤块移植到新的小鼠中，如方法F所述
8. 处置供体小鼠尸体。
乳腺脂肪垫或皮下移植肿瘤移植物
注意：请查看视频以了解有关步骤的其他信息（视频3）。

<！ - flashid2100v149开始 - >
视频3.乳腺脂肪移植肿瘤移植

<！ - flashid2100v149结束 - >
1. 将无菌吸收垫放在台面上（30 x 15厘米）进行外科手术。
2. 麻醉小鼠移植5批或笼子组，以尽量减少麻醉时间。下面描述的是在我们的机构使用异氟烷作为麻醉的程序。
  1. 将异氟烷胶囊粘贴到吸收垫的左边缘。
  2. 在工作开始前检查麻醉机上的废气清除系统。将阀门打开到室内真空，以便在气体清除界面装置中保持负压。
  3. 检查通向鼻锥的阀门的位置，以确保其处于"关闭"位置。在开始工作和整个程序过程中，不能监控阀的位置，可能会导致过量的气体逸出到实验室空间，对实验室的人员造成健康危害。
  4. 打开阀门到氧气罐。将压力调节至10-15 psi，流量每分钟达到1 L。请注意，根据正在麻醉的小鼠数量，流量可能需要增加。
  5. 打开麻醉室，将鼠标放在里面。在开始麻醉之前关闭房间的盖子。
  6. 将蒸发器调节至3％异氟醚在氧气中。
  7. 监视动物。当运动停止时，关闭阀门并打开阀门到鼻锥。如果不止一只老鼠被麻醉，请保持麻醉流向腔室。
3. 当小鼠被麻醉时，建立手术台的其余部分，尽可能保持一切无菌（开放的无菌剪刀，镊子和套针管注射器，并置于灭菌袋的内部或放入无菌的100毫米组织培养皿中，打开betadine拭子，放出无菌酒精垫，并将钉书钉装入外科缝合器）。
4. 达到手术麻醉水平后，从异氟醚室取出一只小鼠
5. 拉起小鼠颈部的皮肤，并用28号针头皮下注射100μl5 mg/kg酮洛芬（或同等止痛剂）。
6. 乳腺脂肪移植：
  1. 打开阀门到鼻锥，将鼠标的鼻子放在鼻锥上，鼠标的背面向下朝向吸收垫。
  2. 找到第四个乳腺脂肪垫，然后使用电动剪刀将皮毛剃除在第四个乳房脂肪垫上，并在鼠标的背侧上方。
  3. 用betadine擦拭剃光皮肤。
  4. 用无菌酒精制剂垫擦去betadine。
  5. 用镊子将乳头上方的皮肤拉起，并用剪刀（4-5毫米）横切第四个乳房脂肪垫切割小切口。
  6. 使用套管针注射器在肿瘤的皮肤下面形成一个垂直的引导路径，沿着靠近鼠标背部的脂肪垫。
  7. 取出套管针，用镊子将肿瘤块放入注射器的尖端。
  8. 通过将套管针插入切口并将其推向鼠标的后部通过引导路径将肿瘤块移植到第四乳腺脂肪垫中，排除肿瘤。
  注意：肿瘤移植距离鼠标的乳头或腹股沟区域越远，用卡尺测量越容易。
1. 或者，可以使用一对小的弯曲的镊子来代替套管针，以在肿瘤的皮肤下面形成引导路径。轻轻地将镊子插入第四个乳房脂肪垫，并以小的圆周运动移动，以创建肿瘤的口袋。然后将这些相同的镊子放入第四个乳腺脂肪垫。
2. 慢慢地轻轻取出套管针，确保肿瘤在第四个乳腺脂肪垫内保持深度。

皮下移植：

打开阀门到鼻锥，将鼠标的鼻子放在鼻锥中，鼠标的腹侧面向下朝向吸收垫。
刮下右腿，背部的背部从后肢到前肢
用betadine擦拭剃光皮肤。
用无菌酒精制剂垫擦去betadine。
用镊子将背部的背部向上拉，用剪刀（4-5毫米）水平切割小切口。
使用无菌剪刀或镊子在皮肤下方形成一个小口袋，并将肿瘤碎片放在皮肤下面。确保将肿瘤片断距开口至少3mm。

用镊子抓住初始手术口的两端，拉起并调整手和镊子，以便用一个镊子抓住切口的边缘。同时仍然拉起皮肤，缝合切口关闭。避免装订到鼠标的体腔。
将鼠标转移到37°C保温箱上的临时，干净的笼子上。密切监视动物，直到恢复意识。
继续对剩下的四只小鼠的肿瘤植入物，手术后转移到加温笼。当所有小鼠恢复意识并正常移动时，可以将其转移到标准的笼子上。
当第五只小鼠完成手术时，您可以将另外5只小鼠转移到异氟醚室麻醉。
完成后，关闭异氟烷机，用70％乙醇喷洒所有表面，然后擦拭，然后进行防腐处理，如Clidox。
通过在水中冲洗清洁所有仪器，然后用手术器械清洁剂清洗。高压釜消毒。
7-14天后取出订书钉。

植入雌激素颗粒
注意：请查看视频，了解有关程序的其他信息（视频4）。

<！ - flashid2100v150开始 - >
视频4.皮下移植肿瘤移植

<！ - flashid2100v150结束 - >
如果使用乳腺癌细胞或患有雌激素依赖性的患者来源的乳腺癌肿瘤，则需要用雌激素补充肿瘤生长。推荐使用持续释放超过60-90天的雌激素颗粒。
1. 该过程需要麻醉，并且可以在移植肿瘤或细胞接种之前或之后进行。
2. 根据您的机构IACUC协议麻醉与异氟烷的鼠标。
3. 将头发从肩胛骨上方的颈部背侧剃掉。使用脱毛膏不推荐用具有SCID背景的免疫缺陷型模型。
4. 用betadine棉签擦拭暴露的皮肤，并用无菌酒精垫擦拭。
5. 做一个直径相等于切片的切口。
6. 使用镊子拉开切口一侧的皮肤，并用一对镊子或剪刀将水平方式制成口袋，距离切口部位约1厘米。
7. 使用镊子将雌激素颗粒插入口袋。
8. 缝合或胶合切口（一些老鼠不会忍受他们的颈部的钉子，并将其刮掉，导致雌激素颗粒的损失）。
9. 7-14天后取出订书钉。
肿瘤组织的低温保存
1. 准备冷冻介质：培养基+ 10％FBS +无菌10％DMSO。
2. 将无菌收获的肿瘤组织置于无菌培养皿中，并用约5ml的含有1％青霉素 - 链霉素的无菌PBS冲洗。
3. 可见地检查组织以从肿瘤标本中小心地去除和丢弃任何坏死和非肿瘤组织
4. 使用镊子和手术刀，将肿瘤组织切割成3×3×3 mm片段;取决于肿瘤类型，一些组织可能通过用镊子分开分开而不是用手术刀切割更容易解剖。
5. 标记具有肿瘤组织ID的低温小瓶，收获日期，加入1ml冷冻培养基
6. 将单个肿瘤片段放入低温小瓶中，拧紧帽子并置于慢速冷冻设备中
7. 将盖子放在冷冻设备上并置于-80°C冷冻室过夜。肿瘤组织以0.5°C/min的速度冷冻至-20°C，1°C/min至-80°C。
8. 过夜冷冻后，将低温小瓶储存在液氮冷冻箱中，并记录冻存温度的位置和日期
肿瘤测量和药物治疗（口服管饲和腹膜内注射）
1. 应使用卡尺（长度，宽度和高度）每周测量2〜3次肿瘤生长。
2. 以允许进入肿瘤的方式轻轻地限制鼠标。
3. 将卡尺带到肿瘤的最长侧以测量长度。轻轻地将卡钳挤压在一起，直到肿瘤的边界在卡钳钳口内。
4. 将卡尺放在肿瘤较窄的一侧以测量宽度。
5. 高度测量可以通过尝试使用卡尺来测量肿瘤的高度。或者，塑料尺可以放置在与肿瘤底部平齐并且肿瘤的高度读取。
6. 适当记录长度，宽度和高度。
  注意：对于大多数一致的结果，同一个人应在研究期间测量肿瘤。否则，可能会观察到变异性，因为每个人在测量期间可能会不同地挤压肿瘤。
7. 可以通过椭圆体积公式（π/6×L×W×H）或体积公式（L x W x H）（Tomayko和Reynolds，1989）来计算肿瘤体积。
8. 开始药物治疗的肿瘤体积取决于实验的目标，但通常肿瘤应至少为100毫米以上，以确保肿瘤生长。如果实验的目标是测试"预防"肿瘤生长，则应调整药物治疗时间表。
9. 口服管饲。
  1. 称重动物以确定所需的平均体重和剂量/体积。可以在小鼠中灌胃的最大体积为200μl。
  2. 通过连接到1cc注射器来准备22号管饲枪。
  3. 通过用拇指和食指抓住肩膀上的皮肤使得前腿伸出到侧面，保持前脚不要将管饲管推开，将动物限制在直立的位置。
  4. 通过轻轻地将头部向后延伸（头部的这个延伸部分通过颈部和食道创建一条直线）将动物的头部保持在位。
  5. 管饲针用于测量从嘴到小鼠的最后一个肋（胃）的距离。这是几乎要插入管饲针以确保有效的程序。
  6. 将针的灯泡插入口角。将灯泡重新放置在中心，沿着嘴巴的顶部运行。
  7. 使用针作为杠杆，轻轻地向后（直立）鼠标的头部和鼻子。（限制手保持直立，不弯曲。）
  8. 慢慢地将管饲针沿着食道喂给预先测量的距离。如果感觉到阻力，请勿进一步推针。如有必要，请将针头缩回，直到灯泡在嘴部前方（但不是外面）并重新插入。不要尝试插入3次以上。如果3次尝试后插入失败，必须允许动物休息2小时。在休息期之后，可以再次尝试插入3次。如果第二轮不合格，则在继续口头管治之前，应咨询参加兽医的事宜
  9. 推进针头，使头部和鼻子进一步向后或直立。
  10. 在推动柱塞之前，请确保针头完全插入到预先测量的目标点。
  11. 推动柱塞将内容物释放到动物的胃中。
  注意：在研究中可以在多只动物上使用管饲针。但是，治疗之间应该改变针头。
10. 腹膜内（IP）注射

数据分析

对于药物治疗实验，基于肿瘤大小将小鼠随机分为对照组或治疗组。每个实验/治疗组所需的小鼠数量通过功率分析来确定。在治疗前和治疗后纵向监测肿瘤体积。生化统计学家对治疗状态不了解，以缓解对统计分析引入的偏倚。线性混合效应模型用于测试跨治疗组的药物反应的显着差异，如果存在不良生长的异种移植/PDX受试者，则利用XenoCat建模框架来增加统计学功能（Laajala等人， 2012）。引用适当的模型对比来正式测试药物反应中的协同作用或拮抗作用。 Bonferroni校正被应用于控制家庭错误率。

笔记

在用细胞系运行大型异种移植研究之前，建议进行一项小型试验性研究以确定肿瘤的采集率。如果摄取率小于100％，这将有助于确定需要的额外小鼠的数量。
细胞系异种移植物的成功和可行性可能受到收获时融合的影响。如上所述，当细胞处于指数生长阶段时，最好收获。如果细胞系异种移植物的肿瘤活力差，也可以将Matrigel加入到细胞培养基注射混合物中，以提供植入物的富集基质环境。
使用患者来源的异种移植模型，植入物高度依赖于肿瘤类型。转移性乳腺癌可以获得25％的收获率，但是在我们的研究中，治疗原始乳腺癌的接种率接近5％。

致谢

我们要感谢Bryn Eagleson和VARI Vivarium员工的专业知识。这里描述的方案用于由乳腺癌研究基金会，Muskegon诱惑表和Van Andel基金会支持的多项研究。

参考文献

Bosma，MJ和Carroll，AM（1991）。 SCID小鼠突变体：定义，表征和潜在用途。 Annu Rev Immunol 9：323-350。
DeRose，YS，Gligorich，KM，Wang，G.，Georgelas，A.，Bowman，P.，Courdy，SJ，Welm，AL和Welm，BE（2013）。人乳腺癌的患者衍生模型：体外和在肿瘤生物学和翻译医学中的体内应用。 Curr Protoc Pharmacol 第14章：Unit14 23.

DeRose，YS，Wang，G.，Lin，YC，Bernard，PS，Buys，SS，Ebbert，MT，Factor，R.，Matsen，C.，Milash，BA，Nelson，E.，Neumayer，L.，Randall ，RL，Stijleman，IJ，Welm，BE和Welm，AL（2011）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22019887"目标="_ blank">来自乳腺癌妇女的肿瘤移植物真实反映肿瘤病理，生长，转移和疾病结果。 17（11）：1514-1520。 />

Flanagan，SP（1966）。< a class ="ke-insertfile"href ="https://www.cambridge.org/core/journals/genetics-research/article/div-classtitlenude-a-new-hairless -Gene-with-pleiotropic-effects-in-mousediv/75A3458AF0D712F5475631A4784D2ED9"target ="_ blank">"裸体"，一种新的无毛基因，在小鼠中具有多效性。 Genet Res 8（03）：295-309。

Fruchter，RG，Nayeri，K.，Remy，JC，Wright，C.，Feldman，JG，Boyce，JG和Burnett，WS（1990）。< a class ="ke-insertfile"href ="http： /www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2343960"target ="_ blank">移民加勒比妇女的宫颈癌和乳腺癌发病率。 Am J公共卫生 80（6）：722-72

Gao，H.，Korn，JM，Ferretti，S.，Monahan，JE，Wang，Y.，Singh，M.，Zhao，C.，Schnell，C.，Yang，G.，Zhang，Y.，Balbin OA ，Barbe，S.，Cai，H.，Casey，F.，Chatterjee，S.，Chiang DY，Shannon，C.，Cogan，SM，Collins，SD，Dammassa，E。，Ebel，N.，Embry，M 。，Green，J.，Kauffmann，A.，Kowal，C.，Leary，RJ，Lehar，J.，Liang，Y.，Loo，A.，Lorenzana，E.，McDonald III，ER，McLaughlin，ME， Merkin，J.，Meyer，R.，Naylor，TL，Patawaran，M.，Reddy，A.，Röelli，C.，Ruddy，DA，Salangsang，F.，Santacroce，F.，Singh，AP，Tang，Y 。，Tinetto，W.，Tobler，S.，Velazquez，R.，Venkatesan，K.，Arx，FV，Wang，Q.，Wang，Z.，Wiesmann，M.，Wyss，D.，Xu，，Bitter，H.，Atadja，P.，Lees，E.，Hofmann，F.，Li，E.，Keen，N.，Cozens，R.，Jensen，MR，Pryer，NK，Williams，JA和Sellers， WR，（2015）。高通量筛选使用p来源于肿瘤的异种移植物以预测临床试验药物反应。 Nat Med 21（11）：1318-1325。

Hait，WN（2010）。抗癌药物开发：巨大的挑战。 Nat Rev Drug Discov 9（4）：253-254。

Laajala，TD，Corander，J.，Saarinen，NM，Makela，K.，Savolainen，S.，Suominen，MI，Alhoniemi，E.，Makela，S.，Poutanen，M。和Aittokallio，T。（2012）。改进临床前动物肿瘤生长和治疗效果的统计建模

18（16）：4385-4396。

Prochazka，M.，Gaskins，HR，Shultz，LD和Leiter，EH（1992）。非肥胖糖尿病scid小鼠：与免疫缺陷相关的自发胸腺成纤维细胞的模型。美国Proc Natl Acad Sci USA 89（8）：3290-3294。 >

Sausville，EA and Burger，AM（2006）。贡献的人类肿瘤异种移植物抗癌药物开发。 66（7）：3351-3354，讨论3354.

Shinkai，Y.，Rathbun，G.，Lam，K.P.，Oltz，E.M.，Stewart，V.，Mendelsohn，M.，Charron，J.，Datta，M.，Young，F.，Stall，A.M。（1992）。 RAG-2缺陷小鼠缺乏成熟淋巴细胞由于不能启动V（D）J重排。细胞 68（5）：855-867。

Shultz，LD，Lyons，BL，Burzenski，LM，Gott，B.，Chen，X.，Chaleff，S.，Kotb，M.，Gillies，SD，King，M.，Mangada，J.，Greiner，DL和Handgretinger，R。（2005）。人类淋巴和骨髓在动员的人造血干细胞移植的小鼠的NOD/LtSz- scid IL 中的细胞发育 /a> J Immunol 174（10）：6477-6489。

Talmadge，JE，Singh，RK，Fidler，IJ和Raz，A.（2007）。小鼠模型评估癌症的新型和常规治疗策略。 Am J Pathol 170（3）：793-804。

Tomayko，MM和Reynolds，CP（1989）。确定在无胸腺（裸鼠）小鼠中皮下肿瘤大小。 Cancer Chemother Pharmacol 24（3）：148-154。

Voskoglou-Nomikos，T.，Pater，JL和Seymour，L。（2003）。体外细胞系，人异种移植物和小鼠同种异体移植前临床癌症模型的临床预测价值。 Clin Cancer Res 11）：4227-4239。