材料和试剂

C57BL/6J（JACKSON LABORATORY）：7-8周龄的小鼠被用于社会失败（6-7周小鼠被命令在一个星期适应环境中的生物）
注意：将小鼠放在标准笼子中，每笼有4至5只小鼠。
CD-1小鼠（Charles River）：退休的雄性育种小鼠4-6个月龄，单独饲养在标准小鼠笼中
注意：社会失败模式使用主体小鼠作为社会压力源的一致从属，并且在本协议中采用最广泛使用的菌株C57BL/6J：CD-1对的强制从属策略。 br />
清洁溶液（用于清洁竞技场和定制有机玻璃社交互动竞技场/分隔线之间）：0.5％过氧化氢

设备

清洁大鼠笼（带有床上用品的一次性大鼠笼）（Innovive，目录号：RS1-H-C8）
标准水瓶（小鼠水瓶）（Innovive，目录号：M-WB-300）
带有吸管的水瓶塞（氯丁橡胶塞，尺寸：＃8.5;安心，1"弯管 - 开口）（安检，目录号：OT-199 - 3"）
气瓶（定制，附加喷水器的塑料支架;图2B）
分隔线（定制，透明有孔玻璃板;图2B）
可拆卸外壳（定制，透明的有机玻璃，顶部和底部是打开的;图3B）
秒表
露天室（定制，44 [w] x 44 [d] x 30 [h] cm）
用于社交互动测试的视频跟踪系统（例如，，Noldus信息技术，型号：EthoVision系统，CCD相机和计算机）

软件

跟踪软件：EthoVision XT（Noldus信息技术）

程序

注意：慢性社会失败压力实验必须符合关于使用实验动物的政府和机构准则。

筛选CD-1侵袭小鼠

在4-6个月龄订购雄性CD-1退休育种小鼠（订购至少比所需的2-3倍，因为少于一半的CD-1小鼠将具有足够的攻击性）。 CD-1小鼠应单独饲养在标准小鼠笼中，随意获取食物和水。在启动筛选过程之前，让CD-1小鼠适应新环境一周。
C57BL/6J'筛选者'雄性小鼠仅用于筛选CD-1小鼠。筛选小鼠可以在年龄（8-20周）范围内，并可用于随后的筛选过程。去除任何侵略性的"筛选"老鼠（罕见）。
在宿主CD-1小鼠的笼中进行CD-1小鼠的筛选。 C57BL/6J'筛选器的小鼠应直接放入入侵者CD-1小鼠的家笼中5分钟。应注意每个CD-1的潜伏期。进行三次筛选，连续3天（每天一次），不同的筛选者。
应根据两个标准选择CD-1侵略性小鼠：在三个5分钟的筛选阶段，初始侵袭的延迟必须在连续两个会话期间小于60秒。并且CD-1必须连续攻击C57BL/6J筛选鼠标至少10秒，而不会中断所有三个5分钟的会话。
选择用于自由获取食物和水的实验室CD-1侵略鼠（自由使用）（即可使用）。侵略者小鼠可以在初次筛选后使用最多3个月（CD-1侵略性小鼠可以习惯于社会失败，因此需要在下一次社会失败实验之前进行重新筛选）。

慢性社会失败压力（图1）

图1.社会失败和社会互动测试示意图。慢性社会失败计划在分开的笼子中使用CD-1攻击性小鼠连续10天的社会失败，随后进行社会互动测试和随后的分析。

组装社会失败的笼子（图2A），采取标准的鼠笼，并用木片床垫填充笼子底部。将穿孔的有机玻璃隔板放在笼子的中心。分手在失败之后将身体分离小鼠，并允许在非失败住房期间进行感官交互。在标准水瓶侧的相对侧放置圆筒（额外的水瓶架）。插入带有圆柱形支架的组装水瓶。确保水易于接近。将食物放在每边的底部（水和食物应该可以自由获取）。将标准鼠笼的盖子牢固地放在笼子上。 10天的社会失败协议需要至少10个具有CD-1侵略者的社会失败的笼子。
注意：分隔线应牢固定位，以防止转义。

图2.慢性社会失败压力下的标准笼设置。 A.用于慢性社会失败压力的标准大鼠笼。常规侵略者CD-1鼠标永久地放置在穿孔分隔器的一侧，而C57BL/6J小鼠在失败后每天旋转，以避免对侵略鼠的习惯。 B.标准鼠笼附加部件尺寸（定制）。气瓶在标准水瓶侧相对的一侧容纳一个额外的水瓶。穿孔的有机玻璃分隔器在非社会失败期间物理分离小鼠（穿孔允许感官交互）。
在新的笼子中习惯的社会失败会议开始之前，将居民CD-1侵略鼠标放在分隔的家庭笼子的一边。注意：气缸侧是较小的空间中有效的失败的首选。
在社会失败会议的第一天，将入侵者C57BL/6J小鼠直接放入CD-1侵略鼠的笼子侧。经过5-10分钟的社交失败（视频1），将入侵者鼠标转移到穿孔分隔线的对面，并在24小时内的剩余时间内放置在车厢内。
注意：将入侵者鼠标靠近攻击者在会话开始时有助于启动攻击性行为。一次可以与多达10名受试者的小鼠进行社交失败压力，以便密切观察。

Video 1. A bout of aggression in social defeat by CD-1 aggressor. Approximately 3 to 5 bouts of consecutive aggressive behaviors can be observed during a social defeat period.
对于对照组，将C57BL/6J小鼠对放置在与穿孔的有机玻璃分隔器两侧的一只小鼠相同的社会失败笼中，持续10天的社会失败测试，没有任何物理接触。控制笼之间每天旋转小鼠（仅限入侵者侧）。
在CD-1侵略者的小故事中重复每天的社交失败10天。
在最后一次社交失败之后，单独安置所有C57BL/6J入侵者小鼠。为动物提供免费获取食物和水的动物。所有CD-1攻击性小鼠都被归还到他们单独饲养的笼子中，用于未来的社会失败实验（需要重新筛选）。

社交互动考试

社交互动测试可以在最后一次社交失败后24小时进行。在社交互动测试中，CD-1侵略者鼠标对被测试的被击败的C57BL/6J小鼠应该是完全新颖的。在执行社交互动测试之前，先屏蔽CD-1侵略鼠标，以确保鼠标达到侵略的标准。
组装社交互动领域，如图3所示。设置视频跟踪系统（例如，EthoVision XT）通过跟踪软件自动收集所有数据。

图3.社交互动测试领域的示意图。 A.社会失败的开放领域竞技场和社区互动分析区域。 B.用于"目标"CD-1侵略鼠的可移动穿孔的有机玻璃外壳。
Habituate在社会互动测试之前至少1小时（在红光条件下，从外部噪声源和动物分离），将C57BL/6J小鼠击败行为测试套件。
每个社会互动测试由红光条件下的两个2.5分钟相组成。在第一阶段（"目标"不存在），将C57BL/6J击败的小鼠放入社交互动场（位于外壳相对侧的中心），并允许自由探索，而无需"目标"CD-1鼠标。 br /> 注意：不要在第一阶段之后清洁竞技场。
第一阶段后，将被击败的C57BL/6J鼠标返回到其家庭笼，直到第二阶段。然后，将"目标"CD-1鼠标直接放入可移动外壳中。
注意：从机箱顶部轻轻放下CD-1鼠标。
在第二阶段（"目标"）中，重新引入被击败的C57BL/6J鼠标，并在"目标"CD-1鼠标存在的情况下自由移动。
注意：在相位之间以一致的方式放置被击败的小鼠。
在每个测试会话结束时，删除目标并击败鼠标并将它们放入家中的笼子中。使用清洁液消毒所有设备。
可以在数据分析部分中讨论数据进行分析。

数据分析

使用自动视频跟踪系统，可以从每个试验的视频数据计算交互区域和角落区域的累积时间。对照小鼠通常在"目标"现在的试验中在相互作用区域花费更多的时间，但在被击败的小鼠中，这种与"目标"小鼠的社会交互时间减少（图4）。因此，通过与外壳中的"目标"小鼠（CD-1侵略者）或不相关的相互作用区时间进行比较可以量化小鼠的社会避免。社会互动比率（SI比率）由两个交互区时间计算如下：

显示小于100％的SI比的小鼠被分组为抑郁敏感小鼠，另一方面，显示超过100％SI比的小鼠属于抑郁 - 弹性组。在大多数情况下，超过一半的C57BL/6J小鼠在遭受慢性社会失败压力时显示易感表型。角区时间是社会回避的另一个有用的指标，它倾向于与相互作用区时间反向相关（图4B，下图）。

图4.社会互动测试的统计分析。 A.用于控制，易感和有弹性的小鼠的社交交互数据的代表性热图。 B和C.统计分析显示社会失败压力后敏感组（n = 18）与对照组（n = 23）和弹性组（n = 13）之间的"目标"CD-1小鼠的社会互动情况减少。 * 0.05，** P < 0.01 vs.'no target'，^## P < 0.01与对照组，方差分析。数据表示为平均值±SEM。

笔记

用于社会失败应力的笼子设置可以变化，可以根据笼子的形状和尺寸修改或替换分隔件和气缸等附加设备。
社会失败持续时间（5-10分钟）可以根据CD-1侵略性小鼠的攻击性进行适当的身体压力而不造成严重伤害。仔细观察每个会话，并取代太过激进的（一直打开伤口）的CD-1小鼠，或者在社交失败时不够积极。安乐死严重受伤的失败的老鼠。
社会失败方案的变化：缩短压力时期（例如，，与病毒表达时期如HSV一致）或减少对植入插管的损害（例如）。，光遗传学），小鼠可以经受缩短的社会失败压力范例。
1. 亚极限社会失败压力（亚阈值或微失败; 1天方案）：将小鼠放入CD-1侵略者笼中5分钟，然后15分钟休息。新的CD-1侵略者（Sun等人，2015; Kim等人，2016）再次重复了这次失败的会议。可以用该方法检测药物治疗或基因调控的易感性，但该方案对野生型小鼠无明显影响。
2. 加速社会失败压力（4〜5天方案）：小鼠受到加速的社会失败压力范式（每天2次，每次4〜5天），缩短方案在诱导易感性方面同样强大，为10天慢性社会失败协议（Vialou等人，2014; Sun等人，2015; Heller等人，2016）。

致谢

这项工作得到了NIMH和NARSAD（NARSAD来自脑与行为研究基金会的青年研究者资助）的资助。该协议从以前的社会失败程序（Berton等人，2006; Krishnan等人，2007; Golden等人， 2011）。

参考文献

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