材料和试剂

注意：以下列出的大多数试剂都提供了目录号。来自替代供应商的等效质量试剂通常可以用可比较的结果代替。哺乳动物细胞培养的标准材料和试剂是必需的，下文并没有全部明确列出

移液器提示
Nunclon细胞培养物245毫米（500厘米2）平皿（Sigma-Aldrich，目录号：D8679）
Nunclon 175cm ^{2细胞培养瓶（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM，目录号：156502）}}
15"细胞刮刀（Fisher Scientific，目录号：08-100-242）
50ml聚丙烯锥形管（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM，目录号：339652）}
20 ml Luer-lock注射器（BD，目录号：302830）
石蜡膜（Sigma-Aldrich，目录号：P7793）
注射器端盖（Bio-Rad Laboratories，目录号：7311660EDU）
2ml微量离心管（例如，Eppendorf，目录号：022363344）
0.45μm聚醚砜（PES）无菌注射器过滤器（VWR，目录号：28145-505）
5 ml超离心管（Seton Scientific，目录号：7022）
注意：如果您将使用BioComp Instruments活塞梯度分离器来回收纯化外来体的部分（见设备），我们建议您从BioComp获得这些管，因为它们是耐受性测试的兼容性。
HEK-293 Flp-In T-REx EXOSC10-3xFLAG细胞（[Domanski等人，2016];可应要求提供）
DMEM，高葡萄糖，GlutaMAX（Thermo Fisher Scientific，目录号：31966047）
胎牛血清（FBS），四环素免费
注意：许多供应商可以提供这一点。许多供应商携带没有标记为四环素的FBS产品，但是查询给定批次的产品规格表可能会显示四环素已被测试发现不存在。在我们手中，这些批次的表现与"认证的"无四环素的FBS相同。
100x青霉素 - 链霉素（P/S）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：15140122）}
胰蛋白酶-EDTA，0.05％（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：25300054）}
四环素（Sigma-Aldrich，目录号：87128）
注意：准备10毫克/毫升的乙醇溶液，储存在-20°C。工作溶液为5μg/ml，用于每1ml细胞培养基的诱导加入1μl。也可以使用强力霉素。
磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.4（Thermo Fisher Scientific，目录号：10010023）
100x L-谷氨酰胺（200mM）（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：25030081）}
TrypLE解离试剂（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^{TM，目录号：12605010）}
酚红溶液，0.5％（Sigma-Aldrich，目录号：P0290）
液氮（LN2）
自由式293培养基（Thermo Fisher Scientific，Gibco ^TM，目录号：12338026）
3M硫酸铵在0.1M磷酸钠缓冲液pH7.4中
牛血清白蛋白（BSA）（New England Biolabs，目录号：B9000S）
甘油（Sigma-Aldrich，目录号：G5516）
2- [4-（2-羟乙基）哌嗪-1-基]乙磺酸（HEPES）（Sigma-Aldrich，目录号：54457）
氯化钠（NaCl）（Sigma-Aldrich，目录号：S3014）
氢氧化钠（NaOH）（Sigma-Aldrich，目录号：71687）
盐酸（HCl）（Sigma-Aldrich，目录号：320331）
Triton X-100（Sigma-Aldrich，目录号：T8787）
蛋白酶抑制剂混合物，不含EDTA（Roche Diagnostics，目录号：11873580001）
CHAPS（Sigma-Aldrich，目录号：C5070）
抗FLAG M2抗体（Sigma-Aldrich，目录号：F3165或F1804）
Dynabeads M-270环氧树脂（Thermo Fisher Scientific，Invitrogen ^{TM，目录号：14302D）}
0.1M磷酸钠缓冲液pH 7.4
Tris碱（Sigma-Aldrich，目录号：93362）
在TBS（50mM Tris-HCl pH7.4,150mM NaCl）中以5mg/ml重构3xFLAG肽（Sigma-Aldrich，目录号：F4799）。等分试样应储存于-20°C
DTSSP（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^TM，目录号：21578）
4x LDS（十二烷基硫酸钠）样品加载缓冲液（Thermo Fisher Scientific，Novex ^{TM，目录号：NP0007）}
10倍样品还原剂（Thermo Fisher Scientific，Novex ^{TM，目录号：NP0004）;或500mM二硫苏糖醇（DTT）}
4-12％Bis-Tris 26孔midi凝胶（Thermo Fisher Scientific，Invitrogen ^{TM，目录号：WG1403BOX）}
20x MOPS（3-吗啉代丙烷-1-磺酸）凝胶运行缓冲液（Thermo Fisher Scientific，Novex TM，目录号：NP0001）
SilverQuest银染色试剂盒（Thermo Fisher Scientific，Novex ^TM，目录号：LC6070）
Sypro红宝石蛋白凝胶染色剂（Sigma-Aldrich，目录号：S4942）
抗EXOSC10抗体（Abcam，目录号：ab95028）
抗SKIV2L2抗体（Abcam，目录号：ab70552）
抗-EXOSC3抗体（Proteintech，目录号：15062-1-AP）
ExoI提取溶液（参见食谱）
ExoII提取溶液（参见食谱）
渐变解决方案 - "轻"（见配方）
渐变解决方案 - "沉重"（见配方）

设备

注意：以下列出的大多数设备都提供了目录号码。来自替代制造商的仪器可能被替代提供等效的功能

移液器
平衡
用于哺乳动物细胞培养的CO 2培养箱
冷冻微量离心机（能够达到20,000 x g ）
新不伦瑞克Innova 2000平台摇床（Eppendorf，New Brunswick ^TM，型号：Innova ^® 2000，目录号：M1190-0002）
注意：安装在哺乳动物细胞培养箱中的振荡器必须能够耐受连续高湿度（〜90％相对湿度）。
250毫升塑料烧杯
血细胞计数器
1L方形PYREX瓶（Corning，PYREX ^®，目录号：1396-1L）
铣削球，不锈钢，20毫米（Retsch，目录号：05.368.0062）
50ml不锈钢研磨罐（Retsch，目录号：01.462.0149）
金属铲子
行星式球磨机PM 100（Retsch，型号：PM100，目录号：20.540.0001）
Thermomixer（Eppendorf，型号：Thermomixer ^{R，目录号：5355000.011;或等效物）}
装有头部用于多个1.5/2.0ml管的涡旋混合器（Thermo Fisher Scientific，Fisher Scientific，型号：Fisher Scientific ^{TM，Vortex Mixer，目录号：02-215-386）}
钕磁铁微型管架（Thermo Fisher Scientific，目录号：12321D）
超级离心机与以下列出的转子（Beckman Coulter），例如Optima L或Optima MAX系列（Beckman Coulter，型号：Optima L或Optima MAX系列）兼容。
SW 55 Ti或MLS-50转子（Beckman Coulter，型号：SW 55 Ti或MLS-50）
装备有低强度1/16"微尖头探针（Qsonica，目录号：4417）的Microtip超声波仪器（例如，Qsonica，型号：Q700）
梯度分馏器及配件，适用于SW 55 Ti（BioComp Instruments，目录号：152-001）
SW 55 Ti（BioComp Instruments，目录号：107-201M）的梯度主和附件

程序

注意：下面描述的许多步骤用于收获细胞，研磨细胞并进行亲和力捕获，可以在我们的在线视频协议（LaCava等，2016）中查看。

细胞培养和收获
可以通过联系作者或按照制造商的说明书获得四环素诱导型EXOSC10-3xFLAG HEK-293细胞系。除非另有说明，适用标准的哺乳动物细胞培养程序（Freshney 2011; Uphoff和Drexler，2013）。
1. 粘附细胞生长
  1. 在补充有10％v/v FBS和1×P/S（DMEM-FBS）的90ml DMEM中的每个16×500cm 2平方盘上的种子〜10 ^{-P/S）注意：16 x 500 cm ² 方形盘应产生至少10 g细胞沉淀，湿细胞重量（WCW）。}
  2. 当细胞达到〜90％融合时，通过添加补充有5ng/ml四环素（Tet）的新鲜DMEM-FBS-P/S，去除培养基并诱导EXOSC10-3xFLAG的表达。
  3. 通过在冰冷的PBS中刮擦，在诱导后24小时收获细胞 - 我们使用30ml /平板。
    注意：或者，可以通过胰蛋白酶消化来收获细胞。对于每个板，用20ml PBS洗涤细胞，加入10ml的0.05％胰蛋白酶-EDTA，倾斜培养皿以暴露细胞单层，除去多余的液体，并将它们放回到CO 2 孵化器〜5分钟。将细胞重悬于10ml DMEM-FBS-P/S中并转移到50ml管中。
  4. 将收获的细胞以1,000×g离心5分钟（4℃）
  5. 丢弃上清液，重新悬浮，并将沉淀物置于冰冷的PBS（约100ml总体积）中，在两个50ml管内。
  6. 以1,000×g离心5分钟（4℃）。
  7. 丢弃上清液，将沉淀物重新悬浮在冰冷的PBS（每体积小瓶中约1体积的PBS）中，并将溶液转移到20ml的封盖注射器中。用Parafilm密封注射器的上部开口（以避免任何意外溢出），并将其置于50ml管内。
  8. 以1,000 x g离心5分钟（4°C）
  9. 取出任何剩余的液体，更换柱塞，并小心地将内容物注入LN2。
    注意：首先，用LN2将250ml塑料烧杯（放置在聚苯乙烯泡罩内），然后将细胞直接注入LN2。
  10. 储存于-80°C，然后冷冻。
2. 悬浮细胞生长
  对于该协议，您将需要一个具有适当公差的平台振动器，安装在37°C，加湿8％CO 2培养箱内。悬浮细胞生长为生成大量细胞并保持连续培养提供了便利且具有成本效益的方法。本文给出的方案是根据我们以前调整的方法（Muller等人，2005）改编的，并应用于HEK-293T LD细胞（Dai等人，/em>，2012; Taylor等人，2013; Taylor等人，2016）。使用HEK-293 Flp-In T-REx细胞，悬浮液生长可能产生约3-5万个细胞/ml，生长减缓至约300万/ml。获得准确的细胞计数可能是具有挑战性的，因为这些悬浮液倾向于以块状生长，并且需要通过移液进行研磨以在血细胞计数器中计数。 WCW的产量应在接近内源水平时每400ml表达3xFLAG标记的EXOSC10的细胞培养物≥4g。
冷冻程序
之前已经描述了哺乳动物细胞沉淀的低温破坏（Domanski等人，2012; Taylor等人，2016; LaCava等人/em >。，2016）。简而言之，通过浸入LN 2中预先冷却研磨罐，2×20mm研磨球，金属刮刀和50ml管。从罐室中取出任何LN ₂，并将细胞颗粒放入其中。设置计数器平衡并将罐子夹紧在Retsch PM 100中。运行机器3轮铣削循环，每次3分钟（反向旋转，1分钟间隔，无断裂时间），转速为400 RPM。在循环之间用LN 2 2冷却研磨罐。使用刮刀回收所得细胞粉末并转移到50ml管中。储存于-80°C。
抗FLAG M2抗体与Dynabeads M-270环氧树脂偶联
之前已经详细描述了抗FLAG磁性介质的生产（Cristea和Chait，2011; Domanski等人，2012; Taylor等人，2016）和也可以根据制造商的说明（Thermo Fisher Scientific）进行，具有可比的结果。简言之，在磷酸钠（pH 7.4）缓冲1M硫酸铵溶液中制备20μl0.5μg/μl抗体，每mg磁珠以抗体缀合（即，10μg的抗体，在20μl溶液中，将被使用/mg珠）。结合抗体溶液和磁珠，并在30-37℃下旋转孵育过夜（16-24小时）。所施加的混合物应足以确保珠子在孵育期间保持悬浮状态。对于小批量，可以在37℃的温热混合器（≥1200RPM）中进行共轭。偶联后，除去过量的抗体溶液，洗涤珠子以除去残余的未偶联的抗体，最后将抗体缀合的磁性介质重悬于含有0.5mg/ml BSA和50％v/v甘油（储存溶液）的1×PBS（最终）：每1 mg培养基添加6.7μl储存溶液（产生约15％w/v的浆液）并储存于-20°C。浆料可以以这种方式储存至少1年，而没有明显的性能损失。
亲和纯化
亲和纯化
以前已经描述了描述和证明使用哺乳动物细胞粉末和磁性介质的亲和纯化的最佳实践的一般程序（LaCava等人，2016）。以下实施已经被优化用于获得人类RNA外来体。这里，DIS3-外来体被称为ExoI，DIS3 +外来体是ExoII。
1. 在LN 2中预冷金属刮刀和4 x 2 ml安全锁管。
2. 重量4×250毫克HEK-293 EXOSC10-3xFLAG细胞粉末。
  注意：保持细胞粉末冻结非常重要。将管留在LN2中直到下一步启动。
3. 将样品放在机架上，打开盖子，让它们在室温下放置1分钟。
4. 向每个添加1,250μlExoI或ExoII解决方案（请参阅配方）。
  注意：ExoI溶液产生DIS3-外来体，而ExoII产生DIS3 +外来体。
5. 以最大速度涡旋以完全重悬细胞粉（不应超过30秒），并立即将样品置于冰上。
  注意：一旦重新悬浮细胞粉末，除非另有说明，样品应在整个操作过程中的所有操作之间保持在冰上。
6. 简单地超声处理以完全分散和均化细胞粉末。使用4个脉冲，每次2秒（每250mg样品约30 J总量）（LaCava等人，2016）。
  注意：如果结块可见，应重复超声处理步骤，直到通过目视检查才能显示出明显的结块。
7. 通过以20,000×g离心10分钟（4℃）澄清提取物。
8. 当样品在离心机中时，将4x 25μl抗FLAG珠粒浆液分配到2 ml微量离心管中，并用1 ml提取溶液洗涤两次，彻底清除存储溶液。
  注意：我们每100毫升细胞粉末使用10微升的珠浆。为了洗涤珠子，将1ml提取溶液与25μl抗FLAG磁性介质（浆液）混合在2ml微量离心管中，短暂旋转以完全重悬珠。在微型离心机中短暂地旋转管子以收集底部的所有溶液，然后将管放置在磁性管架中，直到在管的侧面收集珠粒。使用移液管或吸液器除去上清液，并重复洗涤步骤一次。在室温下进行两个洗涤步骤。洗涤后，珠可以保持在冰上并准备使用。或者，也可以洗涤总共100μl抗FLAG培养基，并在洗涤后分布在4管中。
9. 将澄清的提取物与预洗珠组合。孵育1 h，旋转4°C（冷室）。
10. 将磁珠收集在磁体上，取出上清液，并用上述方法用1ml冰冷的提取溶液洗涤。
11. 用提取液再洗两次。在第二次洗涤期间将每个样品移动到新鲜管中注意：将每个样品（珠子重新悬浮在提取溶液中）移至新鲜管中，可最大限度地减少洗脱液的污染。非特异性吸附到用于亲和力捕获的管的内表面的细胞提取物蛋白可以在随后的操作期间释放到样品中。
12. 在3小时以上洗涤后，在小型离心机中旋转样品。
13. 再次放在磁铁上，小心地取出剩余的液体。
14. 向每个管中加入30μl洗脱溶液（1μg/ml 3xFLAG肽，从提取溶液中的浆液中稀释）。
15. 在室温下温和搅拌15分钟。〜60％功率的涡流装备有多个1.5/2.0 ml管的头。
  注意：确保珠子不会过度混合，也不会沉入管子的底部。
16. 放在磁铁上并收集上清液。
17. 加入30μl提取液洗涤珠粒。收集如上所述，将分数汇集在一起。
18. 将样品放在冰上，然后加载到梯度上。
DTSSP交联获得ExoII
在ExoII提取溶液中，DIS3可以与外来体共同纯化。然而，它在沉淀过程中以甘油梯度分解。为了保持这种相互作用，我们使用了化学交联。 DTSSP将增强DIS3/exosome相互作用的保存，但DIS3酶活性将受到这种治疗的影响。
1. 加入2μl新鲜制备的1.2mM DTSSP /10μlExoII，通过如上所述用3xFLAG洗脱而制备。
2. 在室温下进行交联反应50分钟。
3. 通过加入2μl1M Tris-HCl pH8淬灭
4. 在加载梯度之前保持在冰上。
率区域离心力
Beckman Optima L系列超速离心机中的SW 55 Ti转子的以下设置和参数进行了优化。有关MLS-50的详细信息，请参阅（Domanski等人，2016年）。
1. 使用BioComp Gradient Master仪器（短帽，10-40％甘油v/v）或其他合适的方法制备10-40％甘油梯度。始终准备一个额外的渐变以用作平衡。
2. 预冷形成梯度至4℃（在冷室中典型地≥1小时）。
3. 通过轻轻移液将样品加载到梯度的顶部。
  注意：为了避免破坏梯度的顶层，将移液管尖端靠在管壁上，恰好在甘油溶液的半月板上方，并缓慢地喷出样品。
4. 使用以下设置运行渐变：最小加速度;无刹车4℃; 50k RPM; 6小时36分。
5. 运行完成后，使用BioComp活塞梯度分馏器（参见制造商的说明书）或其他适当的方法收集馏分。我们使用手动分数收集的以下设置：distance-2 mm，speed-0.3 mm/sec。该收集方案将产生半月板分数，〜20个分数为〜225μl，底部馏分。根据实施的具体设置，将观察到一些变化，然而，使用所描述的程序和设置，我们检索了分数11和12中的分数11和ExoII中沉积的ExoI的峰值。
梯度分数的SDS-PAGE分析
1. 用5μl4x LDS和1μl10x还原剂（或500 mM DTT）混合14μl梯度馏分;对于ExoI（DIS3-）级分，在70℃下加热10分钟，或对于DTSSP处理的ExoII（DIS3 +）馏分在75℃下加热20分钟。
2. 按照制造商的说明书将样品装入26孔，4-12％NuPAGE Bis-Tris凝胶上
3. 以200 V运行，直到跟踪染料到达凝胶盒底部。
4. 从塑料盒中取出凝胶，并放入干净的容器中
5. 按照制造商的说明，用银或Sypro Ruby染色。

数据分析

在沉淀期间，游离蛋白质（或部分组装的复合物）可以靠近梯度顶部发现，而完整的RNA外来体进一步迁移并且可以在梯度中间附近发现。含有完整外来体的级分表现出（来自凝胶顶部）SKIV2L2，EXOSC10-3xFLAG，EXOSC9和核心/低质量蛋白质的标志性染色强度，大约分布在预期分子质量（EXOSC9比其预测质量更接近60kDa）〜49 kDa）。图1A描述了经超速离心后获得的梯度级分（图1B中所示的真实数据）的SDS-聚丙烯酰胺凝胶染色。在这个例子中，分数11（11）表明组成和染色强度与峰值分数一致。存在于梯度级分中的蛋白质的浓度应足以通过例如银或Sypro Ruby染色直接检测。蛋白质鉴定可以通过使用特异性抗体的Western印迹（参见注释部分）和/或质谱来确认。

图1.代表性的结果：从表达EXOSC10-3xFLAG的HEK-293细胞纯化的RNA外来体。A.染色的SDS-聚丙烯酰胺凝胶的示意图，证明与分离EXOSC10-3xFLAG纯化的RNA一致的蛋白条带在10-40％v/v甘油梯度内沉降后获得的外来体。 B.由Domanski等人于2016年出版的原始凝胶。分离的蛋白质通过银染色显现。箭头表示峰值分数。

笔记

列出了一些商业上可获得的抗体，我们成功地通过Western印迹鉴定外来体成分。

抗EXOSC10抗体（Abcam，目录号：ab95028）
抗SKIV2L2抗体（Abcam，目录号：ab70552）
抗-EXOSC3抗体（Proteintech，目录号：15062-1-AP）

食谱

ExoI提取溶液
20mM HEPES-NaOH，pH 7.4
300 mM NaCl
1％Triton X-100（v/v）
1x蛋白酶抑制剂鸡尾酒
ExoII提取溶液
20mM HEPES-NaOH，pH 7.4
100 mM NaCl
5 mM CHAPS
1x蛋白酶抑制剂鸡尾酒
1M Tris-HCl，pH 8.0（用于淬灭DTSSP交联反应）
渐变解决方案 - "轻"
10％v/v甘油
20mM HEPES-NaOH，pH 7.4
100 mM NaCl
带0.45μm注射器过滤器的无菌过滤器
渐变解决方案 - "沉重"
40％甘油
20mM HEPES-NaOH，pH 7.4
100 mM NaCl
带0.45μm注射器过滤器的无菌过滤器

注意：NuPAGE ^®系统中使用的许多解决方案可以在实验室进行，不需要购买。请咨询制造商提供的食谱（Life Technologies Corporation）。代替这一点，传统的不连续的Tris-甘氨酸SDS-PAGE可以使用标准方法（Rosenberg，2005）进行，具有可比较的结果。

致谢

感谢Michael P. Rout教授和Torben Heick Jensen教授对我们研究的宝贵支持。我们也感谢华江女士和雷拉·萨巴女士的拷贝。这项工作得到了美国国家卫生研究院授予的P41GM109824和P50GM107632，Lundbeck基金会和丹麦国家研究基金会的支持。

参考文献

Ahuja，D.，Saenz-Robles，MT和Pipas，JM（2005）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16299533"目标="_空白"> SV40大T抗原靶向多个细胞途径以引发细胞转化。癌基因 24（52）：7729-7745。
Cristea，IM和Chait，BT（2011）。共轭的磁珠用于蛋白质复合物的免疫纯化。冷泉Harb Protoc 2011（5）：pdb prot5610。
Dai，L.，Taylor，MS，O'Donnell，KA和Boeke，JD（2012）。< a class ="ke-insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/聚（A）结合蛋白C1对于有效的L1逆转录是必需的，并影响L1 RNP形成。分子细胞生物学32（21）：4323- 4336。
Domanski，M.，Molloy，K.，Jiang，H.，Chait，BT，Rout，MP，Jensen，TH and LaCava，J.（2012）。改进在近内源水平表达的人类蛋白质复合物的亲和力分离的方法。生物技术 0（0）：1-6。
Domanski，M.，Upla，P.，Rice，WJ，Molloy，KR，Ketaren，NE，Stokes，DL，Jensen，TH，Rout，MP and LaCava，J.（2016）。< a class = -insertfile"href ="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27402899"target ="_ blank">内源性人RNA外显子复合物的纯化和分析。 em> 22（9）：1467-1475。
Freshney，RI（2011）。动物文化细胞。第6版。 John Wiley&儿子。
Hakhverdyan，Z.，Domanski，M.，Hough，LE，Oroskar，AA，Oroskar，AR，Keegan，S.，Dilworth，DJ，Molloy，KR，Sherman，V.，Aitchison，JD，Fenyo，D.，Chait ，BT，Jensen，TH，Rout，MP and LaCava，J。（2015）。快速，优化的交互式筛选。 Nat方法 12（6）：553-560。
Kilchert，C.，Wittmann，S。和Vasiljeva，L。（2016）。核RNA外显子复合物的调节和功能。 Nat Rev Mol Cell Biol 17（4）：227-239。
LaCava，J.，Jiang，H.and Rout，MP（2016）。来自低温哺乳动物细胞的蛋白质复合物亲和力捕获 J Vis Exp （118）。
LaCava，J.，Molloy，KR，Taylor，MS，Domanski，M.，Chait，BT and Rout，MP（2015）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi亲和蛋白质组学研究内源性蛋白质复合物：指针，陷阱，偏好和观点。<生物技术 58（3）： 103-119
Life Technologies Corporation。 NuPAGE ^®技术指南 3188（Ed。）。生命科技公司。
Muller，N.，Girard，P.，Hacker，DL，Jordan，M.and Wurm，FM（2005）。< a class ="ke-insertfile"href ="http：//www.ncbi.nlm。 nih.gov/pubmed/15619325"target ="_ blank">用于培养悬浮细胞中的哺乳动物细胞的轨道振荡器技术。 Biotechnol Bioeng 89（4）：400-406。 />
Rosenberg，I.M。（2005）。蛋白质分析和纯化。第二版。伯利恒波士顿。
Taylor，MS，LaCava，J.，Dai，L.，Mita，P.，Burns，KH，Rout，MP and Boeke，JD（2016）。 L1-核糖核蛋白颗粒的表征。方法Mol Bi > 1400：311-338。
Taylor，MS，LaCava，J.，Mita，P.，Molloy，KR，Huang，CR，Li，D.，Adney，EM，Jiang，H.，Burns，KH，Chait，BT，Rout，MP，Boeke， JD and Dai，L.（2013）。亲和蛋白质组学揭示了涉及LINE-1反向转移的离散阶段的人类宿主因素。细胞 155（5）：1034-1048。
Uphoff，CC和Drexler，HG（2013）。基本细胞培养协议第4版。在：Helgason，C.D。和Miller，C.L。（Eds。）。人文出版社。