材料和试剂

电池升降机（Corning，目录号：3008）
Corning无菌60毫米细胞培养皿（康宁，目录号：3261）
Corning无菌100毫米细胞培养皿（康宁，目录号：3262）
15ml锥形管（Denville Scientific，目录号：C1018-P）
微型载玻片（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：4951PLUS4）}
微盖玻璃（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：25X54I24901）}
1.7ml管（Denville Scientific，SlipTech ^{TM，目录号：C19033）}
50ml锥形管（Denville Scientific，目录号：1005513）
硝酸纤维素或PVDF膜（GE Healthcare，目录号：RPN82D或10600021）
高压灭菌微量吸头（Denville Scientific，Woodpecker Reloads ^{TM ，目录号：P2102-NB，P2101-N，P2109）}
X射线胶片（Denville Scientific，Hyblot ES ^{®，目录号：E3218）}
台盼蓝（Sigma-Aldrich，目录号：302643）
BCA试剂盒（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：23235）}
牛血清白蛋白（BSA）（Sigma-Aldrich，目录号：A2153）
抗Cdk5抗体（Santa Cruz C-8）（Santa Cruz Biotechnology，目录号：sc-173）
抗Cdk5抗体（Cell Signaling Technology，目录号：2506）
兔IgG抗体（Vector Laboratories，目录号：I-1000）
山羊抗兔 - 辣根过氧化物酶（HRP）（Jackson ImmunoResearch，目录号：111-035-003）
10mM ATP（Thermo Fisher Scientific，目录号：PV3227）
Cdk5 / p25，活性复合物（EMD Millipore，目录号：14-516）
[γ-^{32 P] ATP（PerkinElmer，目录号：BLU002Z250UC）}
组蛋白H1（EMD Millipore，目录号：14-155）
12％聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Rad Laboratories，目录号：4561043）
增强的化学发光试剂盒（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM，目录号：32106）}
Tris / Glycine / SDS缓冲液（Bio-Rad Laboratories，目录号：1610732）
甲醇（Sigma-Aldrich，目录号：34860）
磷酸氢二钠（Na 2 HPO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：S7907）
磷酸二氢钾（KH 2 PO 4）（Sigma-Aldrich，目录号：P5655）
氯化钾（KCl）（Sigma-Aldrich，目录号：P9333）
氯化钠（NaCl）（Sigma-Aldrich，目录号：S7653）
Tris碱（Sigma-Aldrich，目录号：RDD008）
浓HCl（Sigma-Aldrich，目录号：295426）
乙二胺四乙酸（EDTA）（Sigma-Aldrich，目录号：EDS）
氢氧化钠（NaOH）片剂（Sigma-Aldrich，目录号：S8045）
乙二醇 - 双（β-氨基乙基醚）-N，N，N'，N'-四乙酸（EGTA）（Sigma-Aldrich，目录号：E3889）
3-（N-吗啉代）丙磺酸（MOPS）（Sigma-Aldrich，目录号：RDD003）
氯化镁（MgCl 2）（Sigma-Aldrich，目录号：M8266）
氟化钠（NaF）（Sigma-Aldrich，目录号：S7920）
NP-40 / IGEPAL ^{® CA-630（Sigma-Aldrich，目录号：I3021）}
聚甲基磺酰氟（PMSF）（Sigma-Aldrich，目录号：P7626）
100％乙醇（Sigma-Aldrich，目录号：E7023）
Pepstatin（Sigma-Aldrich，目录号：P4265）
亮肽素（Sigma-Aldrich，目录号：L2884）
抑肽酶（Sigma-Aldrich，目录号：A1153）
蛋白A Sepharose CL-4B（GE Healthcare，目录号：17-0780-01）
预活化的原钒酸钠（100mM Na 3 VO 4）（New England Biolabs，目录号：P0758L）
10％Brij ^{TM -35（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM，目录号：28316）}}
甘油（Sigma-Aldrich，目录号：G5516）
2-巯基乙醇（Sigma-Aldrich，目录号：M6250）
乙酸镁（MgOAc）（Sigma-Aldrich，目录号：M5661）
吐温-20（Sigma-Aldrich，目录号：P1379）
溴苯酚蓝（Sigma-Aldrich，目录号：B0126）
1x传输缓冲区（见配方）
10倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）（见食谱）
1x磷酸缓冲盐水（PBS）（见食谱）
2 M Tris-HCl（pH 7.5）（参见食谱）
50mM Tris-HCl（pH7.5）（参见食谱）
5 M NaCl（见食谱）
0.5 M EDTA（pH 8.0）（参见食谱）
0.5 M EGTA（pH 8.0）（参见食谱）
1 M MOPS（pH 7.0）（见配方）
1 M MgCl 2（见配方）
1 M NaF（见配方）
20％NP-40（见配方）
100 mM PMSF（见配方）
1 mg / ml胃蛋白酶抑素A（见食谱）
1 mg / ml亮抑酶肽（见配方）
1 mg / ml抑肽酶（见食谱）
蛋白A Sepharose CL-4B的50％浆液（参见食谱）
Cdk5裂解缓冲液（库存）（见配方）
Cdk5裂解缓冲液（工作）（见配方）
Cdk5激酶缓冲液（库存）（见配方）
Cdk5激酶缓冲液（洗涤）（参见食谱）
Cdk5激酶缓冲液（测定）（见配方）
MOPS稀释缓冲液（见配方）
5x反应缓冲液（见配方）
50mM醋酸镁缓冲液（MgOAc）（参见食谱）
1x磷酸缓冲盐水/ 0.1％Tween-20（PBS-T）（参见食谱）
5x Laemmli缓冲液（参见食谱）
0.2％溴酚蓝（见食谱）

设备

血细胞计数仪（Hausser Scientific，目录号：3100）
PIPETMAN Classic ^{TM 移液器（Gilson，型号：P10，目录号：F144802）}
PIPETMAN Classic ^{TM 移液器（Gilson，型号：P20，目录号：F123600）}
PIPETMAN Classic ^{TM 移液器（Gilson，型号：P200，目录号：F123601）}
PIPETMAN Classic ^{TM 移液器（Gilson，型号：P1000，目录号：F123602）}
冷冻台式离心机，用于15 ml锥形管（Jouan，型号：CT422）
在4℃的冷室中的1.5ml管的桌面离心机（Eppendorf，型号：5415D）
倒置光学显微镜（Olympus，型号：CK30）
认证盖革计数器（W.B.Johnson Instruments，型号：GSM-110）
有机玻璃屏蔽（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific ^{TM ，目录号：6700-1812）}
磷光成像盒（Thomas Scientific，目录号：C993J84）
制造：bioWORLD，目录号：43121008-1。
放射自显影盒（Denville Scientific，目录号：E3122）
500毫升玻璃瓶（康宁，PYREX ^{®，目录号：1397-500）}

软件

GraphPad Prism（GraphPad软件）
ImageJ（ https://imagej.nih.gov/ij ）

程序

注意：

步骤A1-A4应尽可能快地进行，以避免在洗涤期间细胞蛋白质的损失。
该方案旨在保护Cdk5 /激活剂复合物，同时仍然保持足够的严格性以合理地裂解细胞并从免疫沉淀的复合物中除去非特异性蛋白质。
一旦在步骤D3b中添加了[γ-^{32 P] ATP，则在本协议的其余部分，必须根据您所在机构的辐射安全协议来处理所有丢弃的解决方案。 >}

产生细胞裂解物
1. 细胞培养物应与适当的治疗组和对照组一起繁殖。
2. 从平板吸出培养基，并用PBS轻轻冲洗细胞培养物（参见食谱）两次。从最后一次洗涤中取出PBS。
3. 使用细胞提升器从培养板中分离细胞。通过用适当体积的PBS冲洗该平板来收集分离的细胞（1毫升为60毫米的平板，3毫升为100毫米的板，）。
4. 将细胞悬浮液转移到15 ml锥形管中
5. 在4℃下以3,500×g离心细胞悬浮液5分钟。
6. 如果需要，重复步骤A3-A5。
7. 将细胞沉淀物以15％w / v重悬于裂解缓冲液（参见食谱）。
8. 在冰上孵育裂解物10分钟，同时定期搅动
9. 通过将10μl裂解物1：1样品与台盼蓝混合来确认裂解。将10μl该混合物移至显微镜载玻片上，并将盖玻片置于10μl液滴上。良好的裂解将出现与细胞内不再包含的完整核一样多的细胞核。未分配的单元格将显示为具有蓝色轮廓的球体。如果细胞核裂解，将会存在许多棕色纤维，这可能会对您的免疫沉淀的纯度产生负面影响。未分解细胞的示例图像和良好的裂解在图1中给出。
10. 将10％的裂解物保留为“输入”，加入5x Laemmli缓冲液（参见食谱）至输入至最终浓度为1x，并将样品储存在冰上直到步骤D9。
  
  图1.裂解确认。左侧，用台盼蓝染色的未分解细胞的示例图像。注意每个单元格周围的蓝色轮廓和轻微晕圈。对，来自裂解细胞的完整核的示例图像
准备样品进行免疫沉淀
1. 在4℃下以10,000×g离心裂解物10分钟
2. 将上清液转移至新鲜管中
3. 加入50μl蛋白A珠的50％浆液（或用于免疫沉淀的任何种类的珠子）至裂解液。
4. 在4℃下旋转或摇动珠粒和裂解物的混合物30分钟，以预先清除非特异性结合珠粒的蛋白质裂解物。
5. 在4℃下将混合物以3,000xg离心2分钟。
6. 将上清液转移至新鲜管中
7. 使用标准蛋白质定量方法（例如Bradford或BCA试剂盒）量化裂解物中蛋白质的浓度，
免疫沉淀Cdk5 /激活剂复合物
1. 准备两个新鲜的1.5 ml管，从裂解物中加入1 mg总蛋白注意：如果您的一个样品含有不足的蛋白质浓度，请将所有样品中的蛋白质总量相等，以匹配蛋白质浓度最低的样品中的蛋白质量。
2. 加入裂解缓冲液使每个管中的总体积达到500μl
3. 向每个样品准备的1.5 ml管中加入10μl（2μg）Santa Cruz抗Cdk5抗体（C-8）。
4. 向每个样品准备的其他1.5 ml管中加入2μgIgG抗体。
5. 在4℃下旋转或摇动珠粒和裂解物的混合物3小时
6. 向每个管中加入50μl蛋白A珠的50％浆液。
7. 在4℃下旋转或摇动珠粒和裂解物的混合物2小时
8. 在4℃下以3000×g离心管2分钟。
9. 取出并丢弃上清液。
10. 加入500μl含有0.1％NP-40的裂解缓冲液
11. 在4℃下旋转或摇动珠粒和裂解物的混合物10分钟
12. 重复步骤C8-C11两次。
13. 在4℃下以3000×g离心管2分钟。
14. 取出并丢弃上清液。
15. 加入500μl无ATP或组蛋白H1的激酶缓冲液（见配方）。
16. 在4℃下旋转或摇动珠粒和裂解物的混合物10分钟
17. 再次重复步骤C13-C16（图2中免疫沉淀的一般方案）。
  
  图2.活性Cdk5复合物的免疫沉淀方案
Cdk5激酶测定
1. 将珠重悬于25μl激酶缓冲液（含100 ng /μlH1和25μMATP）
2. 准备与重组Cdk5 / p25阳性对照（Cdk5激酶测定的一般方案和图3中的对照）的反应。
  1. 加入14.6μlMOPS稀释缓冲液（见食谱）至1μlCdk5 / p25活化复合物（Upstate / Millipore）。
  2. 加入5μl5x反应缓冲液（参见食谱）至新鲜的1.5 ml管
  3. 加入2.5μl组蛋白H1（最终100 ng /μl）
  4. 将2.5μl稀释的Cdk5从步骤D2a添加到1.5 ml管中。
  5. 加入5μl无菌水
    
    图3. Cdk5激酶测定，SDS-PAGE和检测方案
3. 准备[γ-^{32 P] ATP的工作解决方案准备47μl25 mM醋酸镁（见食谱）。
  
  加入[γ-^{32 P] ATP（终浓度0.1μCi/μl）}
  加入10 mM ATP，使总体积达到50μl}
4. 加入10μl步骤D3中的^{32 P混合物至步骤D2中制备的阳性对照反应。}
5. 从步骤D3向步骤D1的每个IP反应添加2μl的^{32 P混合物}
6. 将25μl激酶缓冲液与来自步骤D3的2μl^{32 P混合物作为阴性对照。}
7. 将所有反应在30°C下孵育30分钟
8. 在每个反应中加入5μl5x Laemmli缓冲液。
9. 可选：在-20°C存储反应。
10. 立即用12.5％SDS-PAGE解决。
11. 不要让染料前面离开凝胶底部。这将减少运行缓冲器或设备的放射性污染。
12. 解决反应后，在底部切断染料（含有自由基）和堆积凝胶。
13. 将分解的蛋白转移到硝酸纤维素或PVDF膜上
14. 在-80℃下将膜暴露于膜或荧光屏上（参见图4中的实施例）。
  
  图4.免疫沉淀中Cdk5激酶活性和蛋白水平的检测从空载体（Ctrlsi + pc），空载体p39 siRNA转染的细胞（Ctrlsi + pc）转染的细胞进行的Cdk5免疫沉淀和激酶测定的结果p39si + pc），具有p39-FLAG（p39si + p39F）的p39 siRNA。仅包含激酶缓冲液作为阴性对照。在该图中，外源表达的p39-FLAG逆转了siRNA介导的内源性p39敲低引起的对Cdk5活性的影响。这项研究最初发表在“生物化学杂志”上。 Bankston AN，Li W，Zhang H，Ku L，Liu G，Papa F，Zhao L，Bibb JA，Cambi F，Tiwari-Woodruff SK，Feng Y.P39，a primary activator for cyclin-dependent kinase 5（Cdk5）in少突胶质细胞是少突胶质细胞分化和髓鞘修复所必需的。 J Biol Chem。 2013; 288（25）：18047-57。＆复制;美国生物化学与分子生物学学会。
进行蛋白质印迹以评估免疫沉淀
1. 用PBS-T中10％的无脂牛奶将膜孵育1小时（参见食谱）
2. 丢弃10％牛奶溶液。
3. 在含有1：1,000稀释的抗Cdk5抗体（Cell Signaling Technology）的PBS-T中的2％无脂奶上孵育4℃过夜。
4. 弃去含有抗Cdk5抗体的2％乳液。
5. 通过在PBS-T中孵育10分钟来洗涤膜。
6. 弃去PBS-T洗液。
7. 再次重复步骤E5-E6。
8. 在含有1:5000稀释的HRP缀合的抗兔IgG抗体（Jackson ImmunoResearch）的PBS-T中的2％非脂肪乳中孵育该膜1小时。
9. 通过在PBS-T中孵育10分钟来洗涤膜。
10. 弃去PBS-T洗液。
11. 根据制造商的方案，用增强型化学发光溶液孵育膜。
12. 将膜暴露在薄膜上（见图4中的例子）

数据分析

对于实验设计，对于给定的实验，免疫沉淀和激酶测定至少进行三次。
使用ImageJ进行光密度分析。对于每个样品，步骤D13中测量的组蛋白H1磷酸化的强度被归一化为在步骤E12中测量的Cdk5蛋白的强度（参见图5）。
对于统计分析，我们使用GraphPad Prism软件。为了比较两个样本，使用了一个双尾Student's 测试。为了比较三个或更多个样本，使用单因素方差分析与事后Tukey校正。

图5. ImageJ中Cdk5激酶活性和蛋白质水平的测量和归一化。 A.在Cdk5激酶活性的第一泳道周围绘制一个盒子（黄色固体盒）。单击分析凝胶菜单下的选择第一车道。将盒子移动到Cdk5激酶活性的第二道上（黄色虚线框）。单击分析凝胶菜单下的选择第二通道。将盒子移动到Cdk5激酶活性的每个剩余通道上，单击每个泳道下的“分析凝胶”菜单下的“选择第二通道”。单击“分析凝胶”菜单下的“绘图”。 B.将为每个车道生成图。使用线条工具（用粗体红色箭头表示）在图形的底部绘制一条线（由细长的红色箭头表示的光标绘制线）。确保关闭任何间隙（红色圆圈）。对所生成的所有图形执行此操作。 C.使用魔术棒工具（用粗体红色箭头表示）通过点击封闭绘图区域内的光线（由细长的红色箭头指示的光标）来测量强度图中的区域。对所生成的所有图形执行此操作。将生成与每个行对应的每行的“结果”表。 D.重复图A-C中Cdk5免疫印迹的步骤。 E.将Cdk5激酶活性的每个泳道的区域结果除以Cdk5免疫印迹的同一泳道的面积结果。根据需要进行图形化和分析

笔记

在开始本协议之前，请咨询贵机构的辐射安全办公室。他们可以帮助您建立一个处理放射性物质的隔离站，并教授适当的技术。他们也可能需要订购和处置放射性物质的协议。
溶解缓冲液中的洗涤剂类型或浓度可能需要修改才能有效地溶解您感兴趣的细胞。裂解时间也可能是一个重要因素。所有随后的缓冲液应含有0.1％的NP-40以保护Cdk5 /活化剂复合物
我们在本协议中包括两项专项控制：1）活性Cdk5 / p25复合物作为阳性对照; 2）激酶缓冲液仅作为阴性对照组，以确保试剂纯度。应考虑与实验相关的其他控制。
该测定应与Western印迹结合使用，以确定细胞裂解液中已知Cdk5靶标的磷酸化和总水平，以确认Cdk5活性中观察到的任何变化。
当拯救siRNA介导的敲低靶标（例如本方案中的p39）的表达时，使用在siRNA（p39si）靶向的序列中含有沉默点突变的表达载体（p39F）是最佳的。这将使救援表达载体对siRNA有抗性。

食谱

1x转移缓冲液（1,000ml）
1. 称量3.03克Tris-HCl
2. 加入14.4 g甘氨酸
3. 加入700 ml无菌水
4. 加入甲醇200毫升
5. 加入无菌水至最终体积为1000 ml
10倍磷酸缓冲盐水（PBS）（1000毫升）
1. 称取14.4g的Na 2 HPO 4，2.4g KH 2 PO 4，2.0g KCl和80.0 g NaCl
2. 加入800 ml无菌水
3. 搅拌直至溶解
4. 使用无菌水使最终体积达到1000毫升
1x磷酸缓冲盐水（PBS）（500ml）
1. 加入50毫升10倍的PBS
2. 使用无菌水将终体积至500毫升
2M Tris-HCl（pH7.5）（500ml）
1. 称取121.14克Tris-base粉末在500毫升玻璃瓶中
2. 加入无菌水450毫升
3. 搅拌直至溶解
4. 使用浓HCl将pH调节至7.5
5. 使用无菌水使最终体积达到500 ml
50mM Tris-HCl（pH7.5）（50ml）
1. 加入1.25ml 2M Tris-HCl（pH7.5）
2. 使用无菌水使最终体积达到50ml
5M NaCl（500ml）
1. 称量146.1克NaCl在500毫升玻璃瓶
2. 加入无菌水450毫升
3. 搅拌直至溶解
4. 使用无菌水使最终体积达到500 ml
0.5M EDTA（pH8.0）（50ml）
1. 称取7.31g EDTA粉末在50ml锥形管中
2. 加入无菌水450毫升
3. 搅拌和加热直至溶解
4. 使用NaOH片调节pH至8.0以帮助溶解
5. 使用无菌水使最终体积达到50ml
0.5M EGTA（pH8.0）（50ml）
1. 称取9.51克EGTA粉末在50ml锥形管中
2. 加入无菌水450毫升
3. 搅拌和加热直至溶解
4. 使用NaOH片调节pH至8.0以帮助溶解
5. 使用无菌水使最终体积达到50ml
1M MOPS（pH7.0）（500ml）
1. 称量104.63克MOPS在一个500毫升玻璃瓶
2. 加入无菌水450毫升
3. 搅拌直至溶解
4. 使用NaOH片将pH调至7.0
5. 使用无菌水使最终体积达到500 ml
1M MgCl 2（10ml）
1. 在15毫升锥形管中称量0.95克MgCl 2 2
2. 加入9.5 ml无菌水
3. 摇动直到溶解
4. 使用无菌水使最终体积达到10ml
1M NaF（10ml）
1. 称取0.42 g NaF在15 ml锥形管中
2. 加入9.5 ml无菌水
3. 摇动直到溶解
4. 使用无菌水使最终体积达到10ml
20％NP-40
1. 混合2毫升NP-40与8毫升无菌水
2. 涡旋并在30°C下加热，直至混合好
100mM PMSF（1ml）
1. 称量0.017 g PMSF在1.5 ml管中
2. 加入1 ml 100％乙醇
3. 混合直到溶解
1mg / ml胃蛋白酶抑素A（1ml）
1. 称量1毫克胃蛋白酶抑制剂A在1.5毫升管中
2. 加入1 ml甲醇
3. 混合直到溶解
1毫克/毫升亮抑素（1毫升）
1. 称量1毫克亮抑素在1.5毫升的管中
2. 加入1 ml无菌水
3. 混合直到溶解
1mg / ml抑肽酶（1ml）
1. 称取1毫克的抑肽酶在1.5毫升的管中
2. 加入1 ml无菌水
3. 混合直到溶解
蛋白A Sepharose CL-4B的50％浆液
1. 来自珠子的滗析乙醇
2. 将珠重悬于50mM Tris-HCl中以产生75％的珠浆料
3. 离心珠以1,000×g离心2分钟
4. 来自珠粒的上清液
5. 重复步骤17b-17d
6. 将珠子重悬于50mM Tris-HCl中以产生50％珠粒浆料
Cdk5裂解缓冲液（原液）（50ml）
将1.25ml 2M Tris-HCl（pH7.5）加至50ml锥形管中 2.5 ml 5 M NaCl 100μl0.5M EDTA（pH8.0）
使用无菌水使最终体积达到50ml
Cdk5裂解缓冲液（工作）（5 ml）
将5ml的Cdk5裂解缓冲液（储备）加入到50ml锥形管中 250μl100mM Na 3 VO 4＆lt; 4＆gt;
25μl1 M NaF
25μl20％NP-40
50μl100 mM PMSF
5微升胃蛋白酶抑制素
5微升亮肽素
5微升抑肽酶
Cdk5激酶缓冲液（原液）（50ml）
1毫升1M MOPS（pH 7.0）至50ml锥形管 250μl的1M MgCl 2
10μl0.5M EDTA（pH8.0）
10μl0.5M EGTA（pH8.0）
使用无菌水使最终体积达到50ml
Cdk5激酶缓冲液（洗涤）（5ml）
将5ml的Cdk5激酶缓冲液（储备）加到15ml锥形管中 50μlPMSF
Cdk5激酶缓冲液（测定）（1ml）
将1ml Cdk5激酶缓冲液（储备）加到15ml锥形管中 50μlPMSF
2.5μl10 mM ATP
5μl20μg/μl组蛋白H1
MOPS稀释缓冲液（50ml）
将1μl1M MOPS缓冲液加入50ml锥形管中 100μl0.5M EDTA（pH8.0）
50μl10％Brij-35溶液
2.5毫升100％甘油
50μl2-巯基乙醇
50毫克BSA
使用无菌水使最终体积达到50ml
5x反应缓冲液（50ml）
将2μl1M MPS缓冲液加入50ml锥形管中 100μl0.5M EDTA（pH8.0）
50mM醋酸镁缓冲液（MgOAc）（15ml）称取0.11 g在15 ml锥形管中加入无菌水使最终体积达到15 ml
1x磷酸缓冲盐水/ 0.1％Tween-20（PBS-T）（500ml） 50毫升10倍PBS
1ml 100％Tween-20
使用无菌水将终体积至500毫升
5x Laemmli缓冲区
1毫升甘油
1克SDS
1.56ml 2M Tris-HCl
2.5mlβ-巯基乙醇
1 ml 0.2％溴酚蓝
0.2％溴酚蓝
0.02g溴酚蓝在15ml锥形管中 10ml无菌水

致谢

这项工作得到NIH NS053905，NMSSRG 4010-A和Emory大学研究委员会授权的支持。 AB由NIH T32GM008602支持。该协议基于以前的研究（Humbert等人，2000; Yamada等人，2007）进行了改编。

参考

Asada，A.，Yamamoto，N.，Gohda，M.，Saito，T.，Hayashi，N。和Hisanaga，S。（2008）。 p39和p35的肉豆蔻酰化是活细胞周期蛋白依赖性激酶5复合物的细胞质或核定位的决定因素。 J Neurochem 106（3）：1325-1336。

He，X.，Takahashi，S.，Suzuki，H.，Hashikawa，T.，Kulkarni，AB，Mikoshiba，K.and Ohshima，T。（2011）。＆lt; a class =“ke-insertfile”href = “http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21210220”target =“_ blank”>由Emx1-cre介导的Cdk5条件敲除小鼠中少突胶质细胞分化导致的过度表型。 Neurochem Res 36（7）：1293-1303。

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