材料和试剂

移液器吸头（0.1-10μl，1-200μl，100-1,000μl）
Eppendorf Safe-Lock Tubes，1.5毫升（Eppendorf，产品目录号：022363204）
8M氯化锂（LiCl）（SIGMA氯化锂溶液，8M溶液，Sigma-Aldrich，目录号：L7026-100ML，090M8728）
RT-PCR等级水（Thermo Fisher Scientific，Ambion TM，目录号：AM9935）
纯100％乙醇（Decon Labs，目录号：2716）
3M醋酸钠，pH 5.2（见食谱）
70％乙醇（见食谱）

设备

移液器0.5-10μl，10-100μl和100-1,000μl（Eppendorf，型号：Research plus plus，可变可调容量移液器）
冷冻离心机（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific TM，型号：Sorvall TM Legend TM Micro 21R，或同等产品）
多模式酶标仪（BioTek Instruments，型号：BioTek TM Synergy TM 2）
-20°C冷冻机

程序

先前用任何方法分离（Trizol，基于旋转柱的核酸纯化）后，RNA在无RNA酶的水中溶解。
将0.1体积的8M LiCl溶液加入到1体积的RNA溶液中（即，5μl的8M LiCl用于50μlRNA溶液）。
上下搅拌，并在冰上孵育2小时
温育后，在4℃下以14,000×gg离心30分钟。
丢弃上清液并在200μl无RNase的水中溶解沉淀（根据RNA的初始数量可能几乎看不见）。
重复步骤从1到5.简言之，用0.1体积的LiCl（20μl）进行第二次沉淀，通过移液混合并将溶液在冰上孵育2h，离心并将沉淀溶解在200μl水中。
加入预冷的100％-20℃预冷的3体积乙酸钠（pH = 5.2）和2.0体积（em，400μl）的0.1体积（即20μl）乙醇至1体积的RNA溶液。在-20°C孵育30分钟。
在14,000 xg g离心30分钟，4℃。
弃去上清液，用100μl-20℃预冷的70％乙醇洗涤沉淀。
14,000×g g离心10分钟
使用移液器小心移除上清液，而不会干扰在此步骤中可能看不到的沉淀。＆nbsp;
注意：应仔细清除上清液。必须考虑颗粒的预期位置（由离心机中管的位置决定），以吸取上清液。
在室温下让颗粒风干5-10分钟。
在小于或等于步骤1中RNA溶液初始体积的体积中将沉淀溶解于无RNase的水中。
用多模式酶标仪测量260 nm处的吸光度峰值，确定RNA产量。还测定260/280nm处的吸光度比率以评估RNA纯度，其中可接受比例为2至2.2。
根据标准方案，来自DSS处理的组织的RNA现在可以用于cDNA合成和qPCR。

数据分析

琼脂糖凝胶电泳表明，在LiCl沉淀之前，如由清除条带所示，从非DSS处理的小鼠获得管家基因36B4 cDNA扩增产物，而如涂片所示，DSS处理的小鼠中的扩增受到抑制（图1）。 LiCl沉淀后，从非DSS和DSS处理的样品获得的cDNA都被成功扩增，如通过不同的条带所证明的（图1）。

图1.LiCl纯化允许从DSS处理的组织中扩增cDNA。从饮用水或水对照中稀释为3％的DSS处理的小鼠获得的结肠组织中提取总RNA。 cDNA合成后，进行持家基因36B4的qPCR，并通过电泳显现扩增产物。涂片的存在表明在LiCl纯化前DSS处理的小鼠中36B4 cDNA的扩增受到抑制。用LiCl纯化DSS和非DSS RNA样品后，清晰的条带表明36B4 cDNA成功地从DSS和非DSS样品扩增。

笔记

该协议可能与RNA产量的降低有关。步骤13中的再悬浮体积可根据初始体积进行调整，并且应该相同或更小（如果RNA应该处于与LiCl纯化前相似或更高的浓度）。
由于在连续沉淀过程中可能发生RNA的部分丢失，应该对初始浓度不低于200-300 ng /μl的RNA样品进行操作。从500 ng /μl初始RNA浓度及以上的样品中获得最佳结果。
在同一实验中，所有样品组，不管它们是从给予DSS的小鼠还是从水对照组获得的，都应同样进行LiCl纯化过程。

食谱

3M醋酸钠，pH 5.2（100毫升）

24.61克醋酸钠 100毫升Milli-Q®超纯水
用HCl将pH值调节至5.2
70％乙醇
70％的100％乙醇
Milli-Q®超纯水的30％

致谢

E.V是克罗恩和大肠炎基金会职业发展奖的获得者。我们感谢萨曼莎斯宾塞校对手稿。该协议改编自Cathala等人（1983）和Viennois等人（2013）的已发表的工作。作者声明在这项工作中没有利益冲突。

参考

Cathala，G.，Savouret，J.F.，Mendez，B.，West，B.L.，Karin，M.，Martial，J.A。和Baxter，J.D。（1983）。分离完整，翻译活性核糖核酸的方法 DNA 。 2（4）：329-35。
Chassaing，B.，Srinivasan，G.，Delgado，M.A.，Young，A.N。，Gewirtz，A.T。和Vijay-Kumar，M.（2012）。粪便脂质运载蛋白2，一种敏感且广泛动态的肠道炎症非侵入性生物标志物。 PLoS One 7（9）：e44328。
Kerr，T. A.，Ciorba，M.A.，Matsumoto，H.，Davis，V.R.，Luo，J.，Kennedy，S.，Xie，Y。，Shaker，A.，Dieckgraefe，B.K。和Davidson，N.O。（2012）。葡聚糖硫酸钠抑制实时聚合酶链式反应扩增：一种poly-A纯化溶液。< / a> Inflamm Bowel Dis 18（2）：344-348。
Li，Y.H.，Xiao，H.T.，Hu，D.D.，Fatima，S.，Lin，C.Y.，Mu，H.X.，Lee，N.P.and Bian，Z.X.（2016）。小檗碱通过抑制Th17应答来改善C57BL / 6小鼠慢性复发性葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎。 / a> Pharmacol Res 110：227-239。
Viennois，E.，Chen，F.，Laroui，H.，Baker，M.T。和Merlin，D。（2013）。葡聚糖硫酸钠抑制聚合酶和逆转录酶的活性：氯化锂纯化，快速高效技术来纯化RNA。 BMC Res Notes 6：360.