材料和试剂

外科
1. 无菌手术刀刀片＃10（Fine Scientific Tools，目录号：10100-00）
2. 10微升汉密尔顿注射器（汉密尔顿，目录号：80366）
3. 玻璃微管 - 外径1.0mm的玻璃丝（Sutter Instrument，目录号：BF150-86-10）
4. 16号针头（STEMCELL Technologies，目录号：28110）
5. 1毫升注射器×5（BD，目录号：309659）
6. 丝线5-0，P-3反向切割（Ethicon，PERMAHAND ®，目录号：640G）
7. Sprague Dawley Rat，男性，约500克，15-20周龄（查尔斯河）
8. 异氟醚USP 99％（Fresenius Kabi，目录号：CP0406V2）
9. 压缩氧气高纯度99.995％（普莱克斯）
10. 压缩的一氧化二氮气体纯度达99％（普莱克斯）
11. 无菌盐水，0.9％NaCl（Baxter，目录号：2B1324X）
12. 0.25％布比卡因（Sigma-Aldrich，目录号：B5274）
13. 丁丙诺啡（Schering-Plough，0.2毫克注射剂）
曳光弹
1. 葡聚糖，Alexa Fluor TM 488,10,000MW，阴离子，可固定（Thermo Fisher Scientific，目录号：D22910）
2. 葡聚糖胺，德克萨斯红10,000MW（Vector Laboratories，目录号：SP-1140）
灌注
1. Euthasol （VIRBAC，目录号：710101）
2. 咖啡因等渗盐溶液（Fisher Scientific，目录号：351142-10）
  制造商：SCP SCIENTIFIC，产品目录号：CS20310D。
3. 肝素（Sigma-Aldrich，目录号：H3393）
4. 福尔马林1:10稀释，缓冲（Fisher Scientific，目录号：SF100-20）
5. 4％福尔马林溶液（见食谱）
6. 等渗盐水肝素（5,000 IU / L）溶液（见食谱）
组织冰冻切片
1. Superfrost®Gold Plus幻灯片（Fisher Scientific，目录号：22-035813）
2. 异戊烷（2-甲基丁烷）C15H12（Sigma-Aldrich，目录号：277258）
3. D-蔗糖（Fisher Scientific，目录号：10638403）
4. Tissue Tek ®最佳切割温度（OCT）化合物（Sakura，目录号：4583）
5. VECTASHIELD（Vector Laboratories，目录号：H-1000）
6. 30％蔗糖溶液（见食谱）
脊髓分析
1. 大鼠地图集（Paxinos，George和Charles Watson，立体定位坐标中的大鼠脑：硬封面版，通过Elsevier访问在线，2006，Matt Gaidica的工具）。

设备

加热垫（Stoelting，目录号：50300）
Betadine®手术擦洗 - （Fisher Scientific，产品目录号：19-027132）
无菌Crile Hemostats（精细科学工具，目录号：13004-14）
无菌钝头剪刀（Fine Science Tools，目录号：14001-18）
无菌咬骨钳（精细科学工具，目录号：16000-14）
硬质合金钻头钻头（SS WHITE，目录号：14002-5）
灌注盘（Thermo Fisher Scientific，Thermo Scientific TM，产品目录号：11469）
无菌瓢（精细科学工具，目录号：10090-13）
称重秤（Kent Scientific，目录号：SCL-1015）
动物麻醉系统（哈佛仪器，目录号：72-6467）
立体定向框架（KOPF INSTRUMENTS，型号：带标准配件的963型）
Micropipette拉拔器（Sutter仪器，目录编号：P-30）
手术钻 - TCM Endo III（Nouvag，产品目录号：31817）
Digital Peri-Star Pro-Peristaltic Pump（世界精密仪器，目录号：PERIPRO-4HS）
低温恒温器（Leica Biosystems，目录号：CM3050 S研究低温恒温器）
徕卡HCX PL APO L 10x 1.0NA水再现物镜
Leica SP5共聚焦显微镜（Leica Microsystems，型号：Leica SP5）
倒置显微镜（徕卡显微系统，目录号：Leica DMI6000B）
动物手术体视显微镜（徕卡，M系列）

软件

徕卡LAS AF软件
ImageJ
通过Graph Pad vs9的棱镜

程序

麻醉和手术准备
1. 称动物并记录体重。
2. 将一只老鼠放入麻醉诱导室。
3. 调整氧气流速至1.5 L / min，并将异氟醚蒸发器调整至3％，在2分钟内将异氟醚逐渐增加至5％。
4. 一旦动物失去正确的反射，停止气体流入室。
5. 快速将大鼠从诱导室中取出并放入麻醉面罩或鼻锥中。
6. 立即将流量重定向至麻醉剂鼻锥，将氧气流速降至0.3-0.4 L / min，然后将氮气流量计设置为0.6-0.08 L / min，并将异氟醚降低至1.5-2.0％。
  注：我们使用1.5-2.0％异氟醚（70％氧化亚氮和30％氧气），流量为1 L / min，以保持500 g大鼠的麻醉平面。
  吸氧和血管收缩可以改变诱发中风的大小，因此麻醉和吸入气体的选择在诱发中风时很重要。
7. 根据IACUC协议，确保动物处于麻醉的手术平面，如反射消失，肌肉松弛和深度有节奏的呼吸。
8. 使用直肠温度探头和加热垫确保体温保持在37°C。
9. 在两只眼睛上涂抹眼药膏以防止损伤角膜，并且每15分钟或根据需要重新涂抹。
10. 用一对无菌外科剪刀在皮肤旁边的根部切割头发，从头部到头部的大鼠头皮上的手术区域中删除头发。
11. 用Betadine ®手术磨砂准备皮肤。
创建示踪剂注射的毛刺孔
1. 。将鼠标置于立体框架中，确保头骨水平并且耳朵紧
2. 使用0.25％布比卡因诱导切口线块（不超过8 mg / kg）。
3. 将动物手术体视显微镜下的手术区域集中在5x。
4. 在头皮中线做一个1厘米的切口（图2A），优于耳朵，低于眼睛。
5. 通过将切口的每一侧从中线缩回以露出前囟而暴露头骨（图2B和2C）。
  注意：如果您在寻找前囟时有困难，对其中一块颅板施加轻微压力，缝线在轻度压力下移动时会变得明显。
6. 用标记（图2D和2E）标记前肢运动皮层的立体定位坐标，其中毛刺洞将在头骨上（1.5,0）和（1.5,2）形成。
  注意：应将顺行示踪剂注射到运动皮层以确保CST的标记。
7. 如果该协议正在与皮层损伤模型一起使用，如2017年Wiersma等人描述的躯体感觉皮层的光致血栓性中风，将毛刺孔放置在现有薄窗口的角落中线（1，-1）和（1，-3）来评估皮层中的残留纤维，因为这些坐标可以获得中风周围的残留纤维（图2F和2G）。
  
  图2.由立体定位坐标引导的钻孔创建A.立体定位的大鼠外科手术设置，中线切口位置用红色虚线标记。 B.暴露大鼠颅骨和颅骨的立体定位坐标，前囟以蓝色标记，放大倍率为5倍。 D，E。注射在运动皮层上的毛刺孔（绿色圆圈）的位置，绿色标记为E.立体定位坐标。 F，G放大5倍的位置。 F.在5倍放大倍数下用薄窗口（黑盒）修改皮层损伤模型（例如光致血栓形成中风来标记备用纤维，G.立体定位坐标用绿色标记）的毛刺孔位置（绿色圆圈）。
8. 使用配有圆形硬质合金钻头的手术钻头，设计用于切割宽度为1 mm的钻头，在每个标记位置创建一个钻孔。
9. 穿过头骨的第一个0.25毫米。
10. 允许颅骨休息1分钟 - 钻孔产生热量，这会导致皮质表面损伤，因此，重要的是慢慢地钻孔，留下冷却时间。在这个步骤中可以加一滴盐水以帮助冷却，防止皮质表面过热并清除视野。
11. 重复步骤B9和B10，直到皮质表面通过变薄的颅骨变得可见，使得毛刺孔的底部将呈现粉红色而不是白色，并且在添加盐水滴时可以看到下面皮质的血管系统，在此处点头骨大约0.25毫米厚。
  注：预期成年雄性大鼠的总颅骨厚度约为2毫米。
12. 一旦颅骨变薄到0.25毫米，重要的是一次钻不超过2秒，以避免加热皮质表面。
13. 一旦皮质表面立即暴露，请停止钻孔以避免破坏硬脑膜。
注射示踪剂
1. 注射示踪剂时，应使用装有玻璃微管尖端的10μl汉密尔顿注射器，拉至1μm直径，以确保对皮层的最小损伤（图3）。
  注意：要创建一个注射拉尖，使用一个10厘米长的薄壁玻璃丝微管，外径1.0毫米，内径0.75。在移液管拉拔器中放置微管，加热斜坡为+10，拉力为60-90，速度为80，延迟为90，压力为200.这些设置产生具有1μm直径的恒定尖端。
2. 使用1μl葡聚糖Alexa Fluor 488 10,000 MW（1 mg /μl）将注射器连接到玻璃吸头上。
  注意：请参阅注释部分中关于跟踪器选择的信息。
3. 将示踪剂填充注射器安装在立体定位臂上。
4. 将玻璃尖端与创建的毛刺孔对齐。
5. 将玻璃尖端降低到皮质表面。
6. 示踪剂的期望注射深度在皮质表面以下1.4mm处，因此汉密尔顿注射器通过立体臂下降至1.5mm的深度。
  注意：这应该以一个平滑的动作完成;
7. 缩回/反转注射器0.1毫米。
  注意：在相反方向旋转立体定位臂上的刻度盘，旋转1/10。这将为皮层注射示踪剂创造空间。
8. 示踪剂现在已准备好被注射。
9. 按下注射器上的柱塞杆注入0.2μl。
10. 等待1分钟观察示踪剂回流到玻璃尖端。如果没有回流，重复0.2μl注射。在回流的情况下：使用立体定位臂将注射器缩回/倒转0.1毫米并等待另外1分钟，回流应该从玻璃尖端清除回皮质。
11. 重复步骤C9-C10，直到注射完整1μl体积的示踪剂。
12. 注射器现在可以以0.2毫米的小步从脑中移出。
13. 通过0.2毫米立体定位臂反转注射器。
14. 等待30秒。
15. 重复步骤C13和C14，直到注射器脱离皮质。
16. 在第二个钻孔中重复步骤C1-C15。
17. 根据IACUC方案（0.5mg / kg皮下丁丙诺啡）缝合大鼠头皮并给予镇痛护理。
18. 皮下注射3毫升生理盐水以防止脱水。
19. 手术后立即观察动物前肢瘫痪和虚弱的迹象，因为这表明钻孔或注射已经引起皮层的不希望的损伤。
示踪剂用于皮质扩散至脊髓
1. 示踪剂注射后让动物恢复14天。这将确保示踪剂有足够的时间从皮层传播到脊髓。
  注：我们在皮质注射后14天发现了脊髓中CST的最佳标记。
大鼠心脏灌注
1. 准备灌注液（4％福尔马林和含肝素的盐水），并留出时间以达到正确的使用温度（配方1）。
2. 根据美国兽医协会安乐死指南腹腔注射Euthasol®150 mg / kg。
3. 等待手术飞机到达，然后将动物背部固定在85°的灌注托盘上。
4. 定位剑突下面的剑突过程，在肋骨下面穿过覆盖物和腹壁进行横向切口。
5. 使用钝头剪刀在膈肌上切开一个切口，沿着整个胸腔继续切口，露出胸膜腔。
6. 通过肋骨两侧做矢状切口，确保不会损伤心脏或肺部。
7. 钉住肋骨以显露冠状胸腔并释放胸腔附着物的心脏。
8. 使用止血钳夹住心脏的顶点，并将钝头的16号针穿过左心尖插入左心室。
9. 在右心房做一个小切口，释放液体压力，并以70-100 ml / min的速度启动启动的蠕动灌注泵。冲洗250毫升37℃等渗盐水肝素（5,000 IU / L）溶液（方案2）。
  注意：动物应该变得苍白，肝脏应该是白色的，并且在成功灌注时只有清澈的液体应该从右心房排出。
10. 将灌注液转换为4°C 4％福尔马林溶液，再次以70-100毫升/分钟的速率灌注250毫升溶液。
  注意：在注入4％福尔马林溶液的几秒钟内，固定震颤应开始通过大鼠发生，灌注结束时大鼠应该非常僵硬。
大鼠脊髓的集合
1. 创建一个从尾巴到头顶之间的中线切口。
2. 去除覆盖头骨和脊髓的皮肤和肌肉。
3. 从下腰部脊髓开始，用咬骨钳切开椎骨的上椎骨切口，从椎板上释放椎体，横突和棘突。脊髓将粘附在现在打开的椎管的椎体上。
4. 继续打开每个椎骨的椎管从腰部到颈部脊髓。
5. 现在可以通过沿着中线在颅骨下面滑动一个小钝头剪去除大鼠颅骨。剪刀可以用来剥离颅骨的每一侧暴露大脑。
6. 一旦大脑和脊髓暴露出来，开始从开放的脊柱腔内移除脊髓。
7. 从腰椎开始，将脊髓从开放的椎管中取出，确保切开背根，因为它们可能会阻止脊髓被移除。
8. 继续释放脊髓，随身携带。
  注意：此时脊髓非常纤细，请勿挤压任何部位或用力过大，否则可能会破裂。不要让脊髓与任何周围的组织接触，因为它很粘，可以很容易地粘附在任何接触的表面上。
9. 当脊髓完全释放时，取出附着的大脑。
  注意：大脑不需要用脊髓去除，然而，当它附着时，在固定后防止扭曲的过程中重量会降低脊髓。
10. 将一个咬骨钳插入颈椎脱落后沿枕骨头滑动的空隙中。
11. 切开枕骨颅骨，将骨头从后脑拉开，在另一侧重复。
12. 沿中线在颅骨下方插入钝头剪刀，在中线剪下颅骨。
13. 剥离颅骨的每一半远离大脑。
14. 当大脑现在准备好从开放的颅骨腔体中移出时，可以夹住任何尖锐的边缘。
15. 在额叶和嗅球之间插入一个小勺，释放大脑中的大脑。
16. 运行大脑下的勺子，直到清除所有连接的组织和血管，并且大脑容易从开放的颅骨滑出。
组织固定，冷冻和冷冻切片
1. 取出后，立即将大脑和脊髓置于50毫升4％福尔马林中，4℃过夜。
2. 过夜固定后，用50ml 4℃30％蔗糖溶液（配方3）代替4％福尔马林，并在4℃下离开组织3-4天，直到大脑不再浮于溶液中。
3. 从溶液中取出组织（组织将是坚硬和白色的）。
4. 大脑和脊髓现在可以分开。
5. 切一块比脊髓长2厘米，宽4厘米的滤纸滤纸片。
6. 将脊髓平放在OCT覆盖的滤纸上;华侨城应该帮助确保脊髓在冻结时不扭曲。
7. 如果脊髓不平铺在OCT层上，OCT可以被冷冻以降低粘度并提供更“粘性”的层，这将迫使脊髓平放在滤纸上。
8. 将2-甲基丁烷溶液冷却至-50℃，将平躺在滤纸上的脊髓浸没。
9. 将电缆浸入水中1分钟以确保其全部冷冻。
  注意：如果脊柱长时间存放（超过2周），组织应涂上一层OCT冷冻介质。
10. 组织现在可以在-20°C长时间储存或立即冷冻切片。
  注意：如果计划对组织进行切片，我们不建议在-80°C下储存，因为组织切片时必须加热至-20°C。当我们的组织在-80°C储存后，我们将组织温暖至最佳切片温度时，我们经历了组织的破裂和冻融线的出现）。
11. 低温恒温器应设置在-19至-22°C之间的温度，脊髓横切片的切割厚度为35μm。
12. 将脊髓切成10毫米的部分，然后可以用OCT进行切片。开始切割颈部脊髓上方10mm的部分，其中脑干已经从脊髓中移除并继续穿过腰部脊髓的下端。
  注意：长于10毫米的脊髓节段倾向于在切片时振动，导致组织破裂。
13. 现在脊髓可以切成30微米的切片并安装到玻璃载玻片上。
  注意：我们推荐使用Superfrost®Gold Plus载玻片，因为脊髓具有很小的表面积以粘附在载玻片上，这可能导致组织切片在处理过程中抬起并浮动。
14. 一旦切片安装后，应升温至4°C
15. 用2滴VECTASHIELD固定介质盖上载玻片以保存示踪剂的荧光。
16. 在4°C下将幻灯片存储在直射光下，因为紫外线照射可能会漂白荧光示踪剂。
  注意：随着时间的推移，荧光示踪剂会逐渐消失，组织应在切片和安装后的28天内进行分析以避免示踪剂降解。＆nbsp;
荧光显微镜
1. 在Leica SP5共聚焦显微镜上使用Leica HCX PL APO L 20 x 1.0NA水再现物镜和Leica LAS AF Software分析组织。
2. 使用AlexaFluor 488或FITC发射光谱的光谱设置在共焦显微镜上显示AlexaFluor 488-标记的葡聚糖示踪剂。
3. 在736 x 736μm的组织切片上收集30 Hz的z层叠体，该层叠体由600 Hz的10 x 0.3μm台阶组成。
4. 设置736 x 736瓦片扫描跨越腹侧和背侧角的灰质以及CST到要分析的脊髓切片
5. 从每个脊髓节段的20个脊髓节段采集图像。
  注意：分析显示C4和C5节，因为这是前肢运动神经支配在脊髓中的分支（图3,4），脊髓的其他区域可以被分析并且示踪剂可以在整个脊髓包括腰段。大鼠图谱可以用来帮助识别哪个脊髓节段正在被评估。
神经解剖示踪量化
1. 在ImageJ中打开收集的图像（图3A）。
2. 有一个盲人观察员的数量，并记录在每个部分的CST标记纤维的数量。
  注意：如果使用AlexaFluor 488或共聚焦显微镜上的FITC发射光谱的光谱设置，绿色可见光纤被认为是正面标记。请参阅图3B和3C以了解CST的位置以及带有正面标记的纤维的示例。
3. 有一个盲人观察员的数量，并记录标记投影到脊髓示踪侧灰质的数量（图3D和3E）。
4. 让观察者测量步骤I3中计数的每个轴突长度大于1μm的长度。
5. 有一个盲人观察员的数量，并记录到脊髓未受伤侧灰质内的投影数量（图3F和3G）。
6. 让观察者测量步骤I5中计数的每个轴突长度大于1μm的长度。
7. 每个细分受到20个脊髓节段的重复分析。
  
  图3.脊髓中标记的CST纤维的分析A.扫描示踪剂标记的CST和颈髓中周围灰质的扫描图像（C4）。 B.横向脊髓切片的CST区域用红色标出，黑色虚线区域用C标出，显示许多标记的CST纤维呈绿色。 D.与标记的CST相邻的灰质以黑色虚线画出，并在E中显示，其中应标记的脊髓标记侧灰质纤维用白色箭头指出。 F.带有标记的CST对侧的灰质在黑色虚线框中示出，如图G所示。应用计数的脊髓未标记侧上的灰色纤维中的一些纤维用白色箭头指出。比例尺= 2毫米，改编自Wiersma等人，2017年。
神经解剖学示踪纤维长度分析
1. 在20个分析切片中的每一个中，将在CST中计数的标记纤维的数目加在一起。
2. 在脊髓示踪剂标记的一侧添加20个切片中测量的所有轴突侧壁的长度（步骤14）。
3. 将20个切片（步骤I2）的轴突侧枝长度的总和除以在20个切片的CST中计数的轴突总数以确定脊髓标记侧上的追踪纤维的平均长度。
  注意：这可以减少由于动物间示踪剂功效或摄取差异而导致的变异性
纤维发芽的体视学量化
1. 在灰色物质上放置一个50 x 40的网格（图4A）。
2. 背侧位于从椎板尖端到腹角灰质边缘的腹侧线。
3. 从中线侧面灰质边界定位内侧至侧线（图4A）。
4. 网格定制适合灰色物质，以确保组织收缩率，方向和变形的变化不会影响总纤维计数（图4B）。
5. 要创建热点图，请计算每个网格部分中的纤维数量，并将其归一化为标注CST网格部分中计算的平均纤维数量。
6. 根据该部分在20个部分中统计的平均纤维数量，为网格的每个部分分配颜色（图4C）。
  
  图4.纤维发芽的体视学量化A.栅格应用于横截面灰质的实例; B.在CST上的网格在图像上的应用; C.示例热图。改编自Wiersma 等，2017年。

数据分析

要确定CST中标记纤维的数量是否在两组之间有显着差异，请使用Student's unpaired two-tailed t - test。为了分析纤维计数和纤维长度组间的统计差异，使用双因素方差分析检验，然后进行事后Holm-Sidak检验。

笔记

对于手术并发症，请参阅美国兽医协会安乐死指南（2013年版））有关评估安乐死决策和此类决定道德的全面指导原则。
示踪剂的选择非常重要，10,000 MW的葡聚糖示踪剂可以使中枢神经系统的轴突和末端得到解决，但是如果需要标记周围神经系统或细胞体，则选择3,000 MW的示踪剂。
可以将示踪剂注射到两个皮质的感觉运动皮质中以评估从皮质两侧下降的CST。我们发现在皮质和葡聚糖胺的一侧使用葡聚糖，Alexa Fluor TM 488,10,000MW，Anionic，Fixable（Thermo Fischer），德克萨斯红，
在皮层另一侧的10,000 MW（Vector Laboratories）产生良好效果。
这里介绍的顺行示踪的方法可以很容易地与光血栓形成中风模型相结合，其中用于示踪剂注射的毛刺孔在设计用于诱导体感前肢皮层的光致血栓形成的薄窗口的拐角处形成。示踪剂注射到ipsilesional到infract允许评估备用纤维在反向脊髓。
该协议还可以用于表达绿色荧光蛋白（GFP）或mCherry（红色荧光蛋白）的腺伴随病毒载体（AAVs）来标记源自ipsilesional或contralesional运动皮质的CST轴突。通过毛刺孔，将表达GFP（AAV1，CB7.CI.eGFP.WPRE.rBG，UPenn载体核心）或mCherry（1×10 8个转导单位/微升） AAV1.CB7.CI.mCherry.WPRE.rBG）被注入皮层V和VI，位于中风的正中间的两个位置（标记主运动皮质中的任何CST纤维）和损伤对侧的同型运动皮层（以标记未受伤的纤维）。这些示踪剂是基于传统的基于葡聚糖的示踪剂而选择的，因为它们提供改进的顺行纤维中的信号与噪声标记，并具有更强大的精确定义的注射位置。
ANOVA检验显示标记CST纤维的数量，突出纤维的数量或突出纤维的长度没有显着的组内（组内）变化（n = 10）。所有动物的CST标记的纤维计数在平均值的一个标准偏差内，我们发现在每个实验组中纤维的非常一致的标记。在完整的动物（n = 10）中，在C4处平均有111个示踪剂标记的CST纤维，标准偏差为38，标准平均误差为13.45。

食谱

4％（1:25）福尔马林溶液（500ml）
1. 测量300毫升等渗盐水
2. 加入200毫升1:10福尔马林溶液
3. 颠倒混合
4. 冷至4°C
等渗盐水肝素（5,000 IU / L）溶液（500 ml）
1. 测量500毫升等渗盐水
2. 温水至37°C
3. 添加2,500 IU肝素
  注意：肝素将在37°C变性超时，直到使用前才添加。
4. 反转将肝素混入生理盐水中
30％蔗糖溶液（50ml）
1. 测量45毫升等渗盐水
2. 加入15克D-蔗糖
3. 大力混合
4. 冷至4°C

致谢

这项工作得到了艾伯塔省创新健康解决方案，加拿大心脏和中风基金会，加拿大卫生研究院和加拿大自然科学和工程研究委员会的支持。来自加拿大创新基金会和艾伯塔省小型设备赠款的赠款用于获取共聚焦显微镜设备。该协议和数据来自以前的工作：Wiersma，A. M.，Fouad，K.和Winship，I. R.（2017）。增强脊柱可塑性放大了康复训练的益处并改善了中风的康复 J Neurosci 37（45）：10983-10997。作者没有利益冲突要申报。

参考

美国兽医协会安乐死指南（2013）（AVMA）。
Hill，C.E.，Beattie，M.S和Bresnahan，J.C。（2001）。大鼠挫伤性脊髓损伤后鉴定的下行脊柱上轴突的退化和发芽。 Exp Neurol 171（1）：153-169。
Starkey，M.L.，Bartus，K.，Barritt，A.W。和Bradbury，E.J。（2012）。软骨素酶ABC促进成年小鼠单侧金字塔切开术后完整皮质脊髓束的补偿性发芽和恢复前肢功能。 Eur J Neurosci 36（12）：3665-3678。
Thallmair，M.，Metz，G.A.，Z'Graggen，W.J.，Raineteau，O.，Kartje，G.L。和Schwab，M.E。（1998）。神经突生长抑制剂限制皮质脊髓束损伤后的可塑性和功能恢复。 Nat Neurosci 1（2）：124-131。
Ueno，M.，Hayano，Y.，Nakagawa，H。和Yamashita，T。（2012）。皮质脊髓束的椎管内重新连接需要靶标衍生的脑源性神经营养因子并补偿脑后失去的功能伤害。 Brain 135（Pt 4）：1253-1267。
Vavrek，R.，Girgis，J.，Tetzlaff，W.，Hiebert，G.W。和Fouad，K。（2006）。 BDNF促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓神经元连接到备用中间神经元上 Brain 129（Pt 6）：1534-1545。
Wahl，AS，Omlor，W.，Rubio，JC，Chen，JL，Zheng，H.，Schroter，A.，Gullo，M.，Weinmann，O.，Kobayashi，K.，Helmchen，F.，Ommer，B 。和Schwab，ME（2014）。神经元修复。异步治疗通过在卒中后重新连接大鼠皮质脊髓束来恢复运动控制。科学 344（6189）：1250-1255。
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