材料和试剂

定制T型迷宫，由亚克力玻璃GS黑色制成（Bilek +Schüll，维也纳，奥地利）
雄性Sprague-Dawley大鼠（12-13周龄）
注：它们是在维也纳医科大学实验动物科学与遗传学系生物医学研究核心部门培育和维护的。
药理学代理人
注意：它们被应用于实验室，因为将动物带到不同的位置会引起新奇的压力，这可能会加剧我们进行的腹腔注射的短暂压力。
标准维护食品（ssniff，R / M-H，Soest，德国）
食物奖励：例如，提供食物颗粒（Dustless Precision Pellets ®，Rodent净化饮食，45毫克; Bio-Serv，目录号：F0021）
Incidin ® Extra N（Ecolab，目录号：30 125 30，PZN 002 357 95）
1％incidin（见食谱）

设备

用于间接照明的三盏灯（LED芯片，20 W）（安装在位于天花板上方1.3-1.5米的支架上）;手臂内照明：40-50 lux
录像机（摄像机，ABUS AUGUSTBREMICKERSÖHNEKG，型号：EyseoEcoLine，目录号：TV7003）
T迷宫
对于该设备，参见图1.将奖励食物颗粒放置在散布在桌子上的T形迷宫外面，以在训练期间掩盖嗅觉提示。视觉提示（设备，墙壁和门，图1B）在迷宫周围是可识别的。另外一些提示，例如黑白图像的纸质打印件被放置在距离地面两米的房间墙壁上（Sánchez-Santed et al。，1997）。在训练每只动物后用1％的Incidin清洁迷宫以去除嗅觉提示。间接照明（从地板到天花板）在每个臂中提供相等的光强度（40-50勒克斯）。试验用相机监控（安装在迷宫上方的天花板上 - 以及存储在PC上的视频。使用免费的视频捕捉程序（Debut Video Capture）将视频存储在计算机上。图形的纸张打印输出（210） mm x 279 mm）放置在室内墙壁和设备上作为视觉提示。

图1.放置在桌子上的T型迷宫（A）和放置在实验室墙壁上的外部提示打印件（B）。两个目标臂（50厘米长，10厘米宽，带墙壁高度为25厘米）和起始臂（70厘米）可以通过闸门（A）分开。将迷宫放在高度为80厘米的桌子上。起动臂配备有一个起重箱（长20厘米），通过闸门与迷宫隔开。在每个目标臂的末端，奖励食物颗粒放在一个小塑料杯（直径30毫米，高12毫米）中，以掩盖食物颗粒。

程序

注：所有实验均按照奥地利联邦教育，科学和文化部批准的维也纳医科大学伦理委员会的指导方针进行。代码：BMWFW-66.009 / 0206-WF / V / 3b / 2015。

住房
将大鼠单独圈养在标准的模克隆笼（4型，59cm×38cm和20cm高）中，其中的地面用商业垫料（高压灭菌的木屑）覆盖。标准食物（ssniff，R / M-H，Soest，德国）和自来水随意给予，直到处理开始。使动物适应于测试室位置，具有与菌落室相同的条件（22±2℃;湿度：55±5％; 12小时人造光/ 12小时黑暗循环：在上午7点开灯）。在开始实验之前，将大鼠适应实验室至少24小时，并在整个实验期间保持在实验室中。
动物处理
1. 所有实验程序都在光照阶段的上午9点开始（图2中的概述）。
2. 从身体（而不是尾巴）挑选老鼠，让它们放在实验者的手臂上。如果老鼠变得激动，那么它应该被释放并返回其家笼。处理对于减少实验期间的压力影响至关重要，这会严重影响测试的行为结果。
3. 在适应之前连续三天处理每只大鼠每天15分钟。记录整个实验过程中第一天的动物体重。在此期间，动物被温和地食物剥夺（每只大鼠每天6g标准食物）以将体重减少至初始自由进食的85％并在整个实验中保持这一点，同时随意给予自来水。在训练前的处理日期间，在家笼中给予15个奖励食物颗粒，以使大鼠熟悉颗粒。
4. 实验者留在墙壁后面的房间里观察与摄像机连接的计算机屏幕上的老鼠。
习惯
在第4天和第5天使大鼠习惯于T-迷宫。在适应期间，允许大鼠自由探索迷宫15分钟。在适应期间可获得食物奖励颗粒。在第4天，在迷宫上彼此短距离散布20颗颗粒，以便让动物知道迷宫中有食物并且促使大鼠向前移动。在第5天，颗粒仅位于两个目标臂末端的杯子中。
训练
1. 第6天是培训的第一天。将动物放入起始臂的盒子中，10秒后释放（图3A）。
2. 在强制试验期间，在一个随机选择的开放臂的末端放置一个奖励颗粒，用断头台门阻挡对面的手臂（图3B）。
3. 在接下来的试验中，打开双臂，但只有诱饵在强制试验期间诱饵的另一只手臂诱饵（图3C）。
4. 在每次试验完成后（图3D-3E）拿起大鼠并将它们转移到它们的笼子中，直到下一次试验开始（间隔5分钟）。
5. 将食物奖励颗粒放入以前没有奖励的手臂的食物杯中。
6. 当整个动物（包括尾尖）移动到一只手臂时记录手臂进入。
7. 在选择未拔出的手臂后，通过保持诱饵臂被诱饵直到它被访问来应用自我修正程序，允许老鼠改变他们的选择。食物奖励保留在其位置，直到被发现和吃掉。
8. 进行了10项试验（包括强制试验）。
9. 在第7天和第8天，重复步骤D1到D7（图2）。
  
  图2.实验方案的方案
  
  图3.从强制试验开始的训练序列示例（A-C），然后是训练试验（D-F）。 A.大鼠在起始室中等待10秒; B.强迫踪迹; C.老鼠正在吃颗粒; d-F。第二次试验中的老鼠应该总是选择其先前访问的相反手臂，否则会记录内存错误。

注意：

在试验之间用1％Incidin清洁T型迷宫以去除任何嗅觉提示。
测量动物离开起始盒直到进入手臂所需的时间（潜伏期）以控制治疗可能的感觉或运动副作用是非常有用的。
如果老鼠进入未拔出的手臂，记录工作记忆错误并将老鼠放回起始位置而没有食物奖励。记录正确的条目数量到诱饵武器，重新进入未武装武器的数量（视频1）。
间接照明在三个臂（40-50勒克斯）中提供类似的光强度。由于安全原因，大鼠更喜欢黑暗区域，因此手臂之间较高的光照差异会导致大鼠对较暗手臂的反应偏差。

视频1

数据分析

WME（工作记忆错误）=访问未操作的手臂（每次重复访问都被视为工作记忆错误）
正确选择=拜访手臂
WMI（工作记忆指数）=正确选择的数量/总试验次数（表1，图4）
延迟=进入一个目标臂的时间

图4.三种动物的工作记忆指数（A）和工作记忆错误数（WME，B）

表1.数据分析示例

笔记

如果动物不移动或移动得非常慢：

检查家笼是否有未经处理的颗粒。如果不吃颗粒，大鼠可能不会将颗粒识别为熟悉的食物，因此他们不会被激励去追逐它。
体重减轻不足可能导致在迷宫中寻找食物的动力不足。
习惯不足。
通过在一个地方保持冷冻或通过排便和排尿所表明的个体大鼠可以表现出过度的恐惧。被捡起时老鼠也会尖叫。

食谱

1％incidin
Incidin用蒸馏水稀释（1％）
注意：它用于清除试验之间的迷宫。

致谢

该协议改编自Bezu 等人（2016年和2017年）。作者没有利益冲突或竞争利益申报。

参考

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