材料和试剂

斑马鱼
乙醇（100％无水乙醇，商用醇）

设备

用于预曝光的四个1.5升储罐（Aquaneering，目录号：ZT140，图1）

图1.预曝光罐
两个大型水箱灯用于上述预曝光水箱（Aqueon荧光灯条，36英寸，15瓦）
鱼网（水下宝藏，目录编号：4473）
注意：对于对照和乙醇罐，必须有两套不同的网，以避免乙醇交叉污染。
四个小的透明塑料容器（每个测试罐一个，图2）（沃尔玛，UPC 7169149736，或类似尺寸的东西）

图2.拿着容器
用于行为记录的四个摄像头（JVC Everio GZ-MG750RU）
四个40升玻璃罐（50厘米×30厘米×25.5厘米）
四个水族灯具（Aqueon荧光灯条，18英寸，15瓦）
白色和黑色波纹塑料板（Home Depot，SKU 100017720）
统治者
铅笔/钢笔
剪刀/ exactoknife
水族安全硅胶（Aqueon，目录号：12888）

程序

坦克建筑
坦克2：全黑，半亮;坦克3：全白，半亮;坦克3：全白，半亮;坦克3如图3和图4所示（即，坦克1：全白，半亮;坦克3：半白坦克4：半白半黑，高照度通过）。
1. 确保所有水箱清洁干燥。
2. 测量并切割所有瓦楞塑料件以适应罐的内部尺寸。
  1. 对于坦克1和2，每个坦克一个切割片（49厘米×24.5厘米），一个背片（49厘米×29厘米）和两个侧片（24.5厘米×29厘米）（总共8片，4个黑色和4白）。＆nbsp;
  2. 对于坦克3和4，每个坦克切两个底部（24.5厘米x 24.5厘米），两个背部（24.5厘米x 29厘米）和两个侧面（24.5厘米x 29厘米）碎片（总共12件，6个黑色和6个白色）。
3. 硅胶底部件首先放置，所以侧面件和后面件可以放在它们上面。
  注意：对于坦克3和4，安排一个坦克左边是黑色，右边是白色，另一个右边是黑色，左边是白色，如图3所示。
4. 对于坦克1和2，每个坦克切一个。对于坦克3和4，每个坦克切2个（一个黑色和一个白色）。
5. 4厘米x 4厘米均匀间隔（约5厘米）。一旦准备好所有分隔器，将坦克3和4的硅胶分隔器组合在一起，形成白色和黑色的一面每个。
6. 在此之后，用水填充罐至少2天，以使硅氧烷完全脱气。
7. 要在水箱1和2中创建暗室，用4张标准打印纸（切成24厘米x 11厘米）盖住一半顶灯，打开灯和为了在坦克3中创建一个完整的坦克低照度条件，用4张标准打印纸（切成48厘米×11厘米）覆盖整个灯光。如在坦克4中那样创造一个完整的坦克高照度状态，让灯光完全露出来。
  
  图3.罐体设计（尺寸）的示意图显示（A）所有白色罐，（B）所有黑色罐，（C）低照度罐和（D）高照度罐
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  图4.实际实验坦克的照片显示（A）所有白色坦克，（B）所有黑色坦克，（C）低照度坦克和（D）高照度坦克
方法验证
首先，诸如“光与暗”之类的术语与“白与黑”交替使用，导致不一致的解释（Serra et al。，1999; Blaser和Peñalosa，2011）。此外，测试仪器存在显着差异，照明水平和类型不一致，基板类型和颜色/色调不同，并且使用隔室之间的两个分隔物（Serra） et al。，1999; Gerlai et al。，2000; Maximino et al。，2007; BlaserandPeñalosa，2011; Facciol 例如，我们发现斑马鱼更喜欢黑色而不是白色（Facciol 等。之前在我们的实验室，我们一直关注背景照明水平的影响，这些因素的影响独立地影响斑马鱼的行为。，2017），但对不同光照水平的隔室没有表现出优选的反应。之后，我们决定通过使用乙醇进一步验证我们的方法的使用。
鱼类维护，行为记录和定量方法以及统计方法的细节已在别处描述（Facciol et al。，2019）。以下部分将概述测试程序的具体方法。
测试程序
1. 准备预曝光，保持和测试坦克。
  1. 用水（约30升）将四个40升水箱加满25厘米高。
  2. 在四个1.5升水箱中加入1升水。
  3. 用500毫升水填充四个容器。
  注意：对于对照试验，请按原样保留罐。对于乙醇试验，在所有罐中制备1％（体积/体积）乙醇溶液。对于40L试验罐，取出300ml水并更换同样，在1.5升水箱中，取出10毫升水，然后换上10毫升乙醇。最后，在保温容器中，取出5毫升水，然后换上5毫升乙醇。
2. 如图2所示，净鱼一次一个地放在渔网中，如图2所示。
3. 启动相机进行行为记录（如果记录预曝光）并在每次预曝光中放入一条鱼坦克30分钟。
4. 30分钟后，关闭相机，取出鱼并放回容器中。
5. 关闭预曝光灯并打开测试罐灯。
6. 启动摄像机并将预先暴露的鱼放入测试槽（每个槽一条鱼）另外30分钟。
  注意：对于坦克1和2，确保明暗间隔在试验之间随机化（仅用于向后转动坦克灯）。对于坦克3和4，确保随机化白色和黑色边 >即，坦克在左侧低照度与黑色之间随机化，右侧为黑色低照度，左侧为黑色高照度，右侧为黑色高照度。
7. 30分钟后，关闭相机，从水箱中取出鱼并清洗，然后返回到容器罐（如果乙醇暴露）。
8. 常见的调查参数包括焦虑相关行为（，底部居住，飘忽不定的运动）和暗示侧面偏好的行为（即，进入光/暗或白/黑侧的潜伏期，在光/暗或白/黑方面花费的总时间）（Gerlai et al。，2000）。

数据分析

简而言之，斑马鱼在全白罐中没有显示出照明偏好，但全黑罐中的照明偏好是（Facciol et al。，2019）。酒精依赖于前5分钟，对照斑马鱼表现出趋光性和乙醇暴露的斑马鱼表现出scototaxis。在背景阴影偏好任务中，对照和乙醇暴露的斑马鱼都没有表现出偏好，无论其他人的照度如何已在其他地方展出（Facicol et al。，2017），可能仅仅是由于测试领域的轻微修改（即，添加了分隔线），进一步加强了对标准化测试罐，以进行实验比较。
＆nbsp;在照明偏好任务中，全白罐中缺乏偏好可能是由于平均白色背景和高照度环境的复合效应，产生高度焦虑的环境。总的来说，我们的研究强调了为了发布问题需要进一步研究两种背景色调的最佳参数。任务。

致谢

该方法改编自先前的研究（Facciol et al。，2017）。该项目由授予Robert Gerlai博士（Grant＃311637）的NSERC Discovery资助资助。

道德

所有方案均由多伦多大学动物护理委员会（ACC）批准（方案＃20011370）。

参考

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Facciol，A.，Iqbal，M.，Eada，A.，Tran，S。和Gerlai，R。（2019）。斑马鱼的明暗任务混淆了两个不同的因素：背景阴影和光照水平偏好之间的相互作用。 Pharmacol Biochem Behav 179：9-21。
Facciol，A.，Tran，S。和Gerlai，R。（2017）。重新审查影响斑马鱼明暗偏好测试选择的因素。 Behav Brain Res 327：21-28。
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Maximino，C.de Brito，TM，De Moraes，FD，de Oliveira，FVC，Taccolini，IB，Pereira，PM，Colmanetti，R.，Lozano，R.，Gazolla，RA，Tenório，R.，De Lacerda， RIT，Rodrigues，STK，Lameirão，SV，Pontes，AAA，Romão，CF，Prado，VM和Gouveia Jr.，A。（2007）。五种硬骨鱼类对黑暗环境偏好的比较分析。 Int J Comp Psychol 20（4）：351-367。
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