图1.气管试验中的帕金森病小鼠模型。对侧爪位于6-OHDA单侧注射的另一侧。例如，当在右脑半球注射6-OHDA时，左爪被认为是对侧的。具有6-OHDA的纹状体的单侧病变导致优先使用前肢同侧爪（在病变的同侧的爪）。

材料和试剂

黑色的窗帘
老鼠
乙醇70％（Ciclo Pharma，由PrimeCirúrgica提供，目录号：67）
肥皂（Ciclo Pharma，由PrimeCirúrgica提供，目录号：61）

设备

玻璃圆筒直径20厘米，高度约40厘米
在我们的实验室中，我们使用由硼硅酸盐玻璃制成的2升刻度烧杯（Global Glass，目录号：GTBFB-2000）。
三个数码相机，能够以每秒15-25帧的速度录制视频，分辨率为1,280 x 720像素，并配有内置红外（IR）照明和板载存储（TP-link，目录号：NC250）
定时器（Fisher Scientific，Traceable Nano，目录号：14-649-83）
任何能够运行录制视频文件的计算机或电视

软件

任何具有视频支持且能够改变播放速度的媒体播放器。在我们的实验室中，我们使用VLC Media Player v3.0.6（VideoLAN， http://www.videolan.org/ VLC / ）
GraphPad Prism（GraphPad软件， http://www.graphpad.com ）

程序

实验准备
1. 最好在小鼠的活动阶段（黑暗周期）进行气瓶测试。
  注意：将所有测试的小鼠维持在逆光/暗循环是方便的。
2. 在实验的前一天用防水标记笔标记小鼠的尾巴。这样可以快速识别笼中的老鼠，并在测试前立即避免高水平的压力。
3. 在一天的同一时间运行所有行为评估。
4. 将圆筒放在桌子或实验台的中心。使用黑色窗帘覆盖圆筒的所有侧面，以尽量减少对老鼠的视觉干扰。
  注意：在气缸所在的表面上画一条线，以确保气缸可以返回到同一位置。
5. 将顶视摄像头放在圆筒上方。视图应足够接近以获得圆柱体的整个直径（图2）。另外两台摄像机必须覆盖汽缸侧面（侧视摄像机）（图3B）。
  
  图2.从顶部相机查看
6. 在低光照条件下进行测试。黑暗的环境会刺激老鼠的探索本能。在我们的动物设施中，我们使用天花板白光作为主要照明光源。该光源由调光开关控制，可在气缸上方提供40 lux。
  注意：确保照明条件足以清楚地看到视频录制中圆柱周围的前肢使用情况。
7. 准备测试卡以在视频录制期间识别每只动物。但是，不要指示实验组确保盲目分数。
8. 进行行为测定的人体实验者不应对测定的小鼠可见。
  注意：在鼠标执行实验时离开房间。＆nbsp;
9. 在测试之前使小鼠适应进入测试室至少30分钟。提供与测试相同的光照条件。让老鼠不受干扰地休息。
行为测定
1. 开始视频录制。
2. 标记带有动物识别的测试卡并记录3秒钟。＆nbsp;
3. 将鼠标放入玻璃圆筒的中间并启动计时器（图3）。
  
  图3.气瓶测试。 A.将小鼠放在圆筒的中心。 B.从侧视摄像机观察，显示同时前肢壁接触。
4. 记录小鼠10分钟。在测试结束时，将鼠标立即返回其原始状态。表1显示了一只小鼠的代表性数据。
  
  表1. 10分钟测试中鼠标的爪子触摸代表数
5. 用肥皂和水清洁滚筒。＆nbsp;
6. 用70％乙醇喷洒圆筒以去除任何气味痕迹。＆nbsp;
7. 在下次测试前让玻璃圆筒晾干。＆nbsp;
8. 对所有测试的小鼠重复步骤B2-B7。
9. 将所有老鼠送回住房。

数据分析

注意：视频录制的会话应该由不知道鼠标处理的实验者进行评分。

以慢动作模式打开视频1。

视频1.来自侧视摄像头的视频
每次鼠标抬起时的分数（鼠标仅在其后肢上站立的垂直运动）并将爪子放在圆柱体的壁上。对于右，左或两个爪子（同时双触点）计算壁面触摸。使用从侧视摄像头录制的视频来评分鼠标转离顶视摄像头时的行为。
从分析中排除同时爪子触摸。表达数据占受累前肢相对于总接触的百分比[（对侧接触）/（同侧接触+对侧接触）×100]（图4）。
使用参数分析（例如未配对的学生 t - 测试）进行双样本比较。我们使用GraphPad Prism版本6（GraphPad软件）执行统计分析并生成图表。

图4.单侧多巴胺耗竭小鼠在圆柱试验中检测到前肢使用不对称（** P <0.05，学生 t - 测试， n = 3 /组）

笔记

玻璃圆筒的尺寸可根据小鼠品系的大小而变化。更大或更活跃的应变可以通过跳到气缸的边缘来试图逃脱。在这种情况下，应使用更高的气缸。我们在该方案中使用的圆柱体适用于C57BL / 6小鼠。
一些研究人员使用放置在圆柱体旁边的镜子来确保视频记录中前肢的视野。＆nbsp;
在测试之前不要让老鼠习惯于气瓶。这可能导致小鼠显示很少或没有探索的倾向。
试验持续时间因协议而异。 5到10分钟的试验足以获得足够数量的运动以进行可靠的测量。在此期间，大多数小鼠活跃度较低。
最好在隔音房间进行此测试，因为大声的噪音会分散鼠标的注意力。如果无法做到这一点，请在门和附近区域添加一个显示“正在进行实验”的标志，以消除任何对话。
大多数研究通常每组使用8到10只小鼠。
以前发表的论文（Magno et al。，2019）描述了6-OHDA诱导的黑质纹状体通路损伤的程序。

致谢

该方案改编自Magno 等人（2019）。这项研究的部分资金来自法国巴黎高等金属协会（CAPES） - LAVM和HT-F的财务代码001，FundaçãodeAmparoàPesquisado Estado de Minas Gerais（FAPEMIG APQ 00476-14）到MAR-S。和Universal CNPq 457639 / 2014-8到LAVM

利益争夺

作者声明没有竞争性的经济利益。

伦理

所有动物程序均按照美国国立卫生研究院的指导方针进行，并经联邦米纳斯吉拉斯大学的机构动物伦理委员会（第59/2014号协议）批准。

参考

Boix，J.，Padel，T。和Paul，G。（2015）。小鼠帕金森病的部分病变模型 - 6-表征OHDA诱导的内侧前脑束损伤。 Behav Brain Res 284：196-206。
Carballo-Carbajal，I.，Laguna，A.，Romero-Gimenez，J.，Cuadros，T.，Bove，J.，Martinez-Vicente，M.，Parent，A.，Gonzalez-Sepulveda，M.，Penuelas， N.，Torra，A.，Rodriguez-Galvan，B.，Ballabio，A.，Hasegawa，T.，Bortolozzi，A.，Gelpi，E。和Vila，M。（2019）。脑酪氨酸酶过度表达暗示帕金森病发病机制中年龄依赖性神经黑色素的产生。 Nat Commun 10（1）：973。
Chu，H.Y.，McIver，E.L.，Kovaleski，R.F.，Atherton，J.F。和Bevan，M。D.（2017）。在中脑多巴胺神经元退化后丢失超直接途径皮质 - 丘脑底输入物。 Neuron 95（6）：1306-1318 e1305。
Fischer，DL，Manfredsson，FP，Kemp，CJ，Cole-Strauss，A.，Lipton，JW，Duffy，MF，Polinski，NK，Steece-Collier，K.，Collier，TJ，Gombash，SE，Buhlinger，DJ and Sortwell，CE（2017）。丘脑底核深部脑刺激不会改变由黑质纹状体引起的功能缺陷或轴索病变α-突触核蛋白过度表达。 Sci Rep 7（1）：16356。
Francardo，V.，Bez，F.，Wieloch，T.，Nissbrandt，H.，Ruscher，K。和Cenci，M。A.（2014）。对sigma-1受体的药理学刺激在实验性帕金森综合征中具有神经修复作用。 Brain 137（第7页）：1998-2014。
Iancu，R.，Mohapel，P.，Brundin，P。和Paul，G。（2005）。小鼠帕金森病单侧6-OHDA病变模型的行为特征。 Behav Brain Res 162（1）：1-10。
Kriks，S.，Shim，JW，Piao，J.，Ganat，YM，Wakeman，DR，Xie，Z.，Carrillo-Reid，L.，Auyeung，G.，Antonacci，C.，Buch，A.，Yang ，L.，Beal，MF，Surmeier，DJ，Kordower，JH，Tabar，V。和Studer，L。（2011）。源自人ES细胞的多巴胺神经元有效地植入帕金森病的动物模型中。 Nature 480（7378）：547-551。
Lundblad，M.，Andersson，M.，Winkler，C.，Kirik，D.，Wierup，N。和Cenci，M。A.（2002）。帕金森病大鼠模型中运动不能和运动障碍的行为测量的药理学验证。 Eur J Neurosci 15（1）：120-132。
Magno，LAV，Tenza-Ferrer，H.，Collodetti，M.，Aguiar，MFG，Rodrigues，APC，da Silva，RS，Silva，JDP，Nicolau，NF，Rosa，DVF，Birbrair，A.，Miranda，DM and罗马 - 席尔瓦，马萨诸塞州（2019年）。 M2皮层的光遗传学刺激可以恢复帕金森病小鼠模型中的运动功能障碍。 J Neurosci 39（17）：3234-3248。
Schallert，T.，Fleming，S.M.，Leasure，J.L。，Tillerson，J.L。和Bland，S.T。（2000）。中枢，皮质消融，帕金森综合征和脊髓单侧大鼠模型中CNS可塑性和前肢感觉运动结果的评估脊髓损伤。神经药理学 39（5）：777-787。
Starkey，M.L.，Barritt，A.W.，Yip，P.K.，Davies，M.，Hamers，F.P.，McMahon，S.B。和Bradbury，E.J。（2005）。评估成年小鼠皮质脊髓束切除术后的行为功能。< / a> Exp Neurol 195（2）：524-539。
Subramaniam，S.，Napolitano，F.，Mealer，RG，Kim，S.，Errico，F.，Barrow，R.，Shahani，N.，Tyagi，R.，Snyder，SH和Usiello，A。（2011）。 Rhes，一种富含纹状体的小G蛋白，介导mTOR信号传导和L- DOPA诱导的运动障碍。 Nat Neurosci 15（2）：191-193。
Venna，V。R.，Xu，Y.，Doran，S。J.，Patrizz，A。和McCullough，L。D.（2014）。社交互动在中风后神经发生和恢复中发挥关键作用。 Transl Psychiatry 4：e351。
Wang，J.，Xia，J.，Zhang，F.，Shi，Y.，Wu，Y.，Pu，H.，Liou，AK，Leak，RK，Yu，X.，Chen，L。和Chen， J.（2015）。分泌Galectin-1的神经干细胞引发对缺血性脑的长期神经保护作用伤害。 Sci Rep 5：9621。
Warren，P.M.，Steiger，S.C.，Dick，T.E.，MacFarlane，P.M.，Alilain，W.J。和Silver，J。（2018）。脊髓损伤后长时间快速恢复呼吸。 Nat Commun 9（1）：4843。