材料和试剂

材料
<强> E>瓶、板和刀片> < /强>
1. T-75通风烧瓶（康宁，目录号：08-772-1F）
2. 康宁细胞培养12孔板（康宁，目录号：07-200-82）
3. 康宁12毫米透平机，3μm多孔聚碳酸酯薄膜插入件（康宁，目录号：07200—157）< BR>
  < BR>
组织学
1. 生物包装（徕卡生物系统，目录号：3801090）
2. 组织和活检盒（Fisher Scientific，目录号：15-200-403J）
< BR> 用于构造自定义戳记的工具
1. 5分钟环氧树脂（JB焊接，ClearWeld×50112，家得宝）
2. 圆形木盘（直径25 mm，厚度3 mm，爱好大厅）
3. 标准2 mm钻头
4. 标准5mm钻头
< BR>
细胞
1. 原代人乳腺上皮细胞（ScCeNELL，目录号：7610）
2. MCF10A人乳腺上皮细胞（Barbara Ann Kalman癌症研究所）
3. HMT-3522-S1人乳腺上皮细胞（Mina比塞尔实验室，劳伦斯伯克利国家实验室，伯克利，CA）
4. 原代人乳腺成纤维细胞（ScCiNeLe，目录号：7630）
  < BR>
媒体
原发性乳腺上皮细胞<> /e> < /强>
1. 乳腺上皮细胞培养基（MEPICM，SCECENELL，目录号：7611），辅以1%种乳腺上皮细胞生长补充剂（MEPICGS，目录号：7652）和1%青霉素/链霉素（THEMOFISHER，目录号：MT3000 02CI）
< BR> 用于MCF10A人乳腺上皮细胞>
1. DMEM/F12（Thermo Fisher，目录号：11320033），添加了MCF10A添加剂（配方1）（Debnath等人，2003年）
< BR> hmt-3522-s1人乳腺上皮细胞的研究
1. ；DMEM/F12（Thermo Fisher，产品目录号：11320033），添加了HMT-3522-S1添加剂（配方2）（参见2013年《欧洲药典》等）。
< BR> 原代人乳腺成纤维细胞
1. 成纤维细胞培养基（FM，Sciencell，目录号：2301），添加1%成纤维细胞生长增补剂（FGS，目录号：2352）和1%青霉素/链霉素
  < BR>
试剂
培养试剂
1. 0.05%胰蛋白酶/EDTA溶液（Fisher Scientific，目录号：25-300-062）
2. 0.25%胰蛋白酶/EDTA溶液（Fisher Scientific，目录号：15-050-057）
3. 大豆胰蛋白酶抑制剂（10mg/ml，赛默飞世尔，目录号：17075-029）
4. Dispase I（2mg[20U]Sigma-Aldrich，目录号：D4818）
5. 0.5 M EDTA，pH值8.0（赛默飞世尔，目录号：AM9260G）
6. PBS（赛默飞世尔，产品目录号：SH3037803）
7. egf（sigma-aldrich，目录号：E-9644）
8. 氢化可的松（Sigma-Aldrich，目录号：H-0888）
9. 霍乱毒素（Sigma-Aldrich，目录号：C-8052）
10. 马血清（热鱼，目录号：16050122）
11. 催乳素（Sigma-Aldrich，目录号：L6520）
12. β-雌二醇（Sigma-Aldrich，目录号：C-8052）
13. 亚硒酸钠（Sigma-Aldrich，目录号：214485-5G）
14. 转铁蛋白（Sigma-Aldrich，目录号：t2252）
15. HMT-3522-S1添加剂（见配方）
16. MCF10A添加剂（见配方）
17. 磷酸盐缓冲盐（PBS）（见配方）
18. 脱细胞层基质（见配方）
19. 细胞层矩阵（见配方）
20. 多聚甲醛（见配方）
< BR> 电解加工用试剂
1. 基质凝胶（约10 mg/ml，降低生长因子，康宁，目录号：354230）
2. 康宁Ⅰ型胶原，鼠尾（3-4mg/ml，康宁，目录号：CB-40236）
3. DMEM/F12（10X），由粉末制成（Thermo Fisher，目录号：12500062）
4. 碳酸氢钠7.5%溶液（50X，赛默飞世尔，目录号：25080094）
5. FBS（JR科学，目录号：43603-500[研究等级]）
6. L-谷氨酰胺（200mm[50x]，赛默飞世尔产品目录号：25030081）
< BR> 组织学试剂
1. 多聚甲醛（Sigma-Aldrich，目录号：P6148-500G）

设备

手钻（德沃尔特，型号：DCD7916 20V 1/2“卡盘，家得宝）
不锈钢棒（uxcell，30 mm x 2.5 mm，amazon.com）
4“铸铁钻床虎钳（欧文，型号：226340，家得宝）
37°C水浴
37°C加湿培养箱，含5%CO2
细胞培养台离心机
血细胞仪
微量移液管（p20、p200和p1000）
移液管
带彩色ccd摄像机的显微镜

程序

细胞培养与维护
原代人乳腺上皮细胞从人乳腺中分离原代乳腺上皮细胞（sciencell），并在第一次传代时冷冻保存。
1. 制备聚赖氨酸（2μg/cm2）涂层T-75烧瓶。为获得2μg/cm2聚赖氨酸涂层培养容器，向T-75烧瓶中添加10 ml无菌水，然后添加15μl聚赖氨酸储备溶液（10 mg/ml）。将烧瓶放在37°C的培养箱中过夜。冲洗烧瓶。
2. 在37°C水浴中解冻冰冻的小瓶细胞（>；5 x 105细胞），并将小瓶中的内容物分配到聚L-赖氨酸涂层烧瓶中。< BR> 注意：不建议解冻后对细胞进行稀释和离心处理。>
3. 轻轻摇动烧瓶，使细胞均匀分布。将培养容器放回培养箱，并在开始培养后至少16小时内保持培养物不受干扰。
4. 第二天更换培养基，去除残留的DMSO和未连接的细胞。
5. 此后，每三天更换一次培养基，直到培养物约70%汇合。一旦培养基达到70%汇合，每隔一天更换一次培养基，直到培养基大约90%汇合。< BR>
6. 当细胞达到90%汇合时进行继代培养。用PBS轻轻冲洗烧瓶，并向烧瓶中加入4毫升0.25%胰蛋白酶/EDTA溶液。轻轻摇动烧瓶，以确保胰蛋白酶/EDTA溶液完全覆盖细胞，将烧瓶放回37°C培养箱中培养2-3分钟或直到细胞分离。
7. 细胞从烧瓶中完全分离后，向烧瓶中添加180μl大豆胰蛋白酶抑制剂，并将分离的细胞转移到15 ml离心管中。
8. 在400x g下离心管5分钟，并丢弃上清液。在培养基中重新培养细胞颗粒，并在新的聚赖氨酸包衣烧瓶中以5000个细胞/cm~2的接种密度将其平板化。
9. 细胞可以经历10次群体加倍（推荐早期传代）。
< BR> mcf10a人乳腺上皮细胞从人乳腺纤维囊性组织中采集mcf10a细胞，进行自发永生化。mcf10a细胞保持了正常细胞的许多特征，包括（a）在裸鼠体内无法形成肿瘤；（b）生长和存活依赖于生长因子和激素；以及（c）缺乏锚定独立生长（soule等，1990）。mcf10a细胞的培养遵循debnath等所述的程序。（2003）稍加修改。
1. 在37°C水浴中解冻一小瓶冰冻细胞（1 x 106细胞），并将小瓶中的内容物分配到含有10毫升培养基的T-75烧瓶中。
2. 轻轻摇动烧瓶，使电池均匀分布。将培养容器放回培养箱，并在开始培养后至少16小时内保持培养物不受干扰。
3. 第二天更换培养基，去除残留的DMSO和未连接的细胞。
4. 每三天更换一次培养基，直到培养液约70%汇合。一旦细胞达到70%汇合，每隔一天更换一次培养基，直到培养物大约90%汇合。
5. 当细胞达到90%汇合时进行继代培养。用PBS轻轻冲洗烧瓶，并向烧瓶中加入4毫升0.25%胰蛋白酶/EDTA溶液。轻轻摇动烧瓶，以确保胰蛋白酶/EDTA溶液完全覆盖细胞，将烧瓶放回37°C培养箱中培养2-3分钟，否则细胞已完全分离。
6. 向烧瓶中加入180μl大豆胰蛋白酶抑制剂，并将分离的细胞转移到15 ml离心管中。
7. 在400x g下离心管5分钟，并丢弃上清液。在培养基中重新培养细胞颗粒，并以1:3的比例将其置于新的烧瓶中。
8. 细胞可经历35代（建议早期传代）。
< BR> 人乳腺上皮细胞 hmt-3522 s1来源于良性乳腺纤维囊性病变，在培养基中自发永生化（briand等，1987；moyret等，1994；rizki等，2008；vidi等，2013）。s1细胞保留非恶性特征，需要egf在培养中生长，并且不能在裸鼠体内形成肿瘤（briand等，1987；rizki等，2008；vidi等，2013）。< BR> 注：由于较高代的基因型漂移（Rizki>等，2008；Vidi>等，2013），S1细胞的使用限制在60代以下。培养hmt-3522 s1细胞遵循vidi等所述的程序。（2013）稍加修改。>
< BR>
1. 在37°C水浴中解冻一小瓶冰冻细胞（1 x 106细胞），并将小瓶中的内容物放入装有5毫升生长培养基的离心管中。
2. 在400x g下离心管5分钟。
3. 取出上清液，将细胞颗粒重新放入3ml新鲜生长培养基中。
4. 将7毫升新鲜生长培养基加入T-75烧瓶中，并转移整个细胞悬浮液。
5. 将培养容器放回培养箱，并在开始培养后两天内保持培养物不受干扰。
6. 每隔一天换一次培养基，直到菌落开始形成圆形岛屿（菌落边缘变得光滑）。< BR> 注：这种现象通常发生在培养液达到约60%汇合时（电镀后6~10天）。>
7. 当细胞达到60%汇合时进行继代培养。用1毫升0.25%胰蛋白酶/EDTA溶液冲洗细胞，并向烧瓶中加入1毫升0.25%胰蛋白酶/EDTA溶液。轻轻摇动烧瓶，确保胰蛋白酶/EDTA溶液完全覆盖细胞，将烧瓶放回培养箱，在37°C下培养2-3分钟。
8. 向烧瓶中加入180μl大豆胰蛋白酶抑制剂，并将分离的细胞转移到15 ml离心管中。
9. 在400x g下离心管5分钟，然后丢弃上清液。
10. 在3ml培养基中重新培养细胞并计数细胞密度。
11. 将10毫升生长培养基放入T-75烧瓶中。
12. 在T-75烧瓶中播种1.5 x 106细胞（2 x 104细胞/cm2）。
13. 细胞可使用到60代（建议早期传代）。
  
  < BR>
原代人乳腺成纤维细胞从人乳腺中分离原代人乳腺成纤维细胞（sciencell），并在第一次传代时冷冻保存。
1. 制备上述聚赖氨酸（2μg/cm2）涂层T-75烧瓶。
2. 在37°C水浴中解冻冰冻的小瓶细胞（>；5 x 105细胞），并将小瓶中的内容物分配到聚L-赖氨酸涂层烧瓶中。轻轻摇动烧瓶，使细胞均匀分布。将培养容器放回培养箱，并在开始培养后至少16小时内保持培养物不受干扰。
3. 第二天更换培养基，去除残留的DMSO和未连接的细胞。
4. 此后每三天更换一次培养基，直到培养物约70%汇合。一旦细胞达到70%汇合，每隔一天更换一次培养基，直到培养物大约90%汇合。
5. 当细胞达到90%汇合时进行继代培养。用PBS冲洗细胞，并在烧瓶中加入10毫升0.05%胰蛋白酶/EDTA溶液。轻轻摇动烧瓶，确保用胰蛋白酶/EDTA溶液完全覆盖细胞，将烧瓶放回培养箱，在37°C下培养2-3分钟。向烧瓶中添加180μL大豆胰蛋白酶抑制剂，并将分离的细胞转移到15 ml离心管中。
6. 在400x g下离心管5分钟，并丢弃上清液。在培养基中重新培养细胞，并以5000个细胞/cm2的接种密度将其置于新的聚赖氨酸包被烧瓶中。
7. 细胞可以经历15次群体倍增。
  
  < BR>
微图案化图章的构造（图1）
< BR>
图1。微图案化图章的构造 < BR> 用于在12孔板插入件中微图案化ecm的定制图章构造如下：
1. 要找到圆木圆盘的中心，用铅笔画两个等长的平行弦。画一个“X”，以对角方式连接和弦的末端。将“x”的交点标记为圆的中心。
2. 用铅笔在距中心5毫米、相距2毫米的圆盘上标记四个2毫米的点。
3. 将磁盘水平固定在钻床虎钳中。
4. 使用手钻和2 mm钻头，在盘上标记的位置钻四个孔。
5. 使用手钻和5 mm钻头，在盘的另一端钻两个检修孔。
6. 从钻床虎钳上取下圆盘。
7. 将2.5 mm不锈钢杆插入阀盘上的2 mm孔中。这为杆提供了一个压接装置，以将其固定到位，直到用环氧树脂固定为止。
8. 调整杆，使杆的9mm端部保持在圆盘顶面以上，杆的13mm端部从圆盘底面伸出。
9. 将少量环氧树脂混合并涂抹在阀盘顶部的杆周围，使其与阀盘接触，以将其固定到位。按照环氧树脂包装上的建议，将印章风干。
10. 使用前，用70%酒精轻轻清洁邮票的金属棒，并在组织培养罩中用紫外线照射邮票10-20分钟进行消毒。
  
  < BR>
三维有机共培养的制备（图2）
< BR>
图2。乳腺上皮细胞与成纤维细胞三维器官型共培养流程图 < BR>

第一天

脱细胞层的制备
1. 准备一个12孔的盘子。
2. 在每口井中插入一个跨井接头。
3. 用无菌的1 M NaOH调节PBS中I型胶原的浓度为2 mg/ml，pH值为7.4。
4. 要制作脱细胞层，按此顺序将10x DMEM/F12、FBS、L-谷氨酰胺、N-碳酸氢盐和I型胶原（2 mg/ml）添加到冰上离心管中（配方4）。
5. 轻轻混合，用无菌的1 M NaOH重新调整pH至7.4。
6. 将200μL凝胶放入每个插入物中。
7. 在胶原聚合过程中，在室温下将培养板在组织培养罩中保持原状30分钟。
成纤维细胞悬液的制备
1. 在三个T-175烧瓶中培养原代乳腺成纤维细胞。
2. 用胰蛋白酶将所有分离的细胞结合在一个50毫升的离心管中。
3. 离心，洗涤并在1毫升成纤维细胞生长培养基中重新培养颗粒。
4. 计数细胞密度，用成纤维细胞培养基调整到1 x 108/ml。
细胞层的制备
1. 用无菌的1 M NaOH调节PBS中I型胶原的浓度为2 mg/ml，pH值为7.4。
2. 按此顺序将10倍DMEM/F12、FBS、L-谷氨酰胺、N-碳酸氢盐和I型胶原（2 mg/ml）添加到冰上离心管中（配方4）。
3. 轻轻混合，用无菌的1 M NaOH调节pH至7.4。
4. 加入基质凝胶和成纤维细胞。
5. 将1毫升凝胶放入每个插入物（1x10 7 成纤维细胞/样品）。
6. 将自定义邮票放入凝胶中（图3，左上角）。 < BR>
  图3。原发性乳腺成纤维细胞（mfs）和乳腺上皮细胞（mecs）的器官型3d-ecm共培养方案。（左）器官型3d-ecm共培养的实验设计示意图，mecs和mfs在不连续ecm的不同区域生长。在I型胶原基质上的微图案化印记。（右上）定制邮票的图像。（右下）共培养的苏木精和伊红染色石蜡包埋切片的代表性图像，在40倍和200倍放大下显示mfs和mecs的组织形态学。比例尺：50微米。
  < BR>
7. 在基质聚合过程中，在组织培养箱（37°C，5%Co2）中保持平板不受干扰30-45分钟。
8. 将成纤维细胞生长培养基通过图章的检修孔加入，约4毫升注入井底，约1毫升注入插入物。
9. 将培养板放在组织培养箱（37°C，5%Co2）中一天，直到基质从插入物的内壁手动取出。
  
  < BR>
三维乳腺腺泡的制备基质凝胶涂层和基质凝胶悬浮液
1. 将基质凝胶在4℃下解冻过夜，并保持在冰上。
2. 在12孔培养板上涂抹约500μl基质凝胶。在37°C组织培养箱中培养15-30分钟，使基质凝胶聚合。
3. 在15ml离心管中，在乳腺上皮细胞生长培养基中制备4%的基质凝胶悬浮液。
< BR> 乳腺腺泡的制备注：正常或非恶性乳腺上皮细胞形成乳腺腺泡样结构）>
1. 在1毫升乳腺上皮细胞生长培养基中胰蛋白酶化、洗涤并重新培养乳腺上皮细胞（原代乳腺上皮细胞、MCF10A细胞或HMT-3522 S1细胞）。
2. 计数细胞密度，并将细胞悬液的体积转移至12孔板的每个孔中有1 x 105个细胞/样品（0.26 x 105细胞/cm2）。
3. 离心收集细胞颗粒，并在每个样品的1毫升4%基质凝胶悬浮液中重新悬浮细胞。
4. 将细胞悬液置于基质凝胶涂层上。
5. 将培养板放在组织培养箱（37°C，5%Co2）中6天，直到形成球状结构。

第2天
< /强>

去除胶原1（Acellular和细胞）基质（图4）
1. 小心地抬起并从共同文化中去掉邮票。
2. 去除生长介质。
3. 使用无菌玻璃Pasteur pipette，将基体的圆周勾勒出2-3倍，将基体从刀片的内壁中取出。< BR> 注意：不要刺穿Transwell膜。>
4. 将邮票放回槽中。
5. 在插入物中加入1毫升成纤维细胞生长培养基。
6. 将培养板放在组织培养箱（37°C，5%Co2）中5天。矩阵将在未来几天内收缩。油井底部的培养基每天更换（插入物的培养基无变化）。 < BR>
  图4。去除I型胶原（CY1，脱细胞和细胞）基质<强> BR/> < BR>
第7天
1. 结合乳腺腺泡基底膜< BR> <强>＞Mammary Acini与MatMatel/ <强>的解离
  1. 将dispase i（2 mg，20 u）溶解于200μl PBS中，制成储备溶液（10 mg/ml，100 u/ml）。进一步稀释Dispase I溶液，制成工作溶液（0.2 mg/ml，2 u/ml）。
  2. 从三维基质中的乳腺上皮细胞培养中移除基质凝胶悬浮液。用PBS清洗。
  3. 加入1毫升Dispase I工作液（2 U/ml）。在37°C组织培养箱中培养30分钟，用于酶消化基质凝胶。
  4. 加入20μl 0.5m edta（ph 8.0，终浓度1m m）灭活dispaseⅠ。
  5. 在15毫升离心管中收集消化液。在pbs中离心洗涤细胞颗粒2～3次。
  6. 将小球（~2 x 104acini）重新放入500μl基质凝胶中，并保持在冰上
  < BR> 在基质凝胶中向胶原基质中添加乳腺腺泡（图5）>
  1. 小心地取下邮票。
  2. 从插入件中取出生长介质。
  3. 取下印记后形成四个凹槽，转移~100μl/凹槽基质凝胶/乳腺腺泡混合物。将剩余混合物（~100μl）放置在细胞层表面。在37°C的组织培养箱中培养30分钟，以聚合基质凝胶（图5）。
  4. 制备成纤维细胞生长培养基/乳腺上皮细胞生长培养基（50:50）混合物，并向孔底加入~4毫升，向插入物中加入~1毫升。
  5. 为了分析药物治疗，可以在生长培养基中添加不同的药物。
  6. 将培养板放在组织培养箱（37°C，5%Co2）中培养7天。每天更换介质。< BR> < BR>
    图5。向胶原基质中添加乳腺腺泡/基质凝胶混合物 < BR>
第14天
1. 采集共培养物进行石蜡包埋
  1. 用4%多聚甲醛在4°C下固定共培养物2~3h。用PBS在室温下洗涤培养物10min。
    注意：不要修理太久。过度固定会破坏某些抗原。>
  2. 翻转插入件并切下薄膜。轻轻地将共培养物从插入物中推出到孔板中。添加PBS以覆盖区域性。
  3. 在纸巾盒里放一个生物膜。将共培养物面朝下放置在生物膜上。折叠生物膜以包裹共培养物并合上盒式磁带。
  4. 将盒式磁带放入70%乙醇中，保持4°C，直到进行石蜡包埋处理。在10μm处切片石蜡块，并通过免疫组化分析切片（图3，右下角）。

食谱

MCF10A添加剂
<正文> <表>
hmt-3522-s1添加剂

试剂	最终浓度
马血清	5%＜BR/>
青霉素/链霉素	1%＜BR/>
胰岛素	10μg/ml
表皮生长因子< BR>	20纳克/毫升
氢化可的松	0.5μg/ml
霍乱毒素	100 ng/ml

磷酸盐缓冲盐（PBS）

试剂	最终浓度
催乳素	5μg/ml
胰岛素	250纳克/毫升
表皮生长因子< BR>	5纳克/毫升
氢化可的松	1.4μm
β-雌二醇	0.1纳米
亚硒酸钠	2.6纳克/毫升
转铁蛋白	10μg/ml

脱细胞层基质（最终浓度为1 mg/ml胶原，6个样品的总浓度为1.8 ml）

试剂	最终浓度
氯化钠< BR>	137毫米＜BR/>
KCl＜Br/>	2.7毫米＜BR/>
na2hpo4	10毫米＜BR/>
kh2po4	1.8毫米＜BR/>

细胞层基质（最终浓度约为1 mg/ml胶原+约3 mg/ml基质凝胶，6个样品共10 ml）

试剂	音量
10倍dmem/f12	180μl
FBS	18μl＜Br/>
谷氨酰胺	18μl＜Br/>
碳酸氢钠	18μl＜Br/>
I型胶原（2 mg/ml，pH7.4）	900μl
无菌水	高达1.8毫升

试剂	音量
10倍DMEM/F12	1毫升
FBS	100μl
谷氨酰胺	100μl
碳酸氢钠	100μl
I型胶原（2 mg/ml，pH7.4）	5毫升

多聚甲醛（4%，1L）
1. 在搅拌板上的玻璃烧杯中加入800毫升1x PBS，搅拌时加热至~60°C
2. 加入40克多聚甲醛粉末并搅拌
3. 滴加1 N NaOH至溶液澄清
4. 一旦多聚甲醛溶解，将溶液冷却至室温
5. 重新检查pH值，用1 N HCl或NaOH调节至~pH 6.9
6. 用1X PBS将溶液体积调整到1L
7. 将溶液在2-8°C下保存一个月

致谢

我们感谢Robert Del Chiaro制作了定制的微图型邮票；感谢Allen Schroering在组织学核心，UT和病理学系的所有工作人员，感谢他们准备和评估组织学标本。这项工作得到了来自托莱多健康科学大学的启动基金的支持，该学院是美国癌症研究所医学和生命科学系，俄亥俄癌症研究基金（项目：5017），美国医学研究学会（托莱多基金会）授予F；以及美国癌症学会研究学者奖助金（RSG-18-238-01-CSM）给S.F.
< BR> 该方案改编自Debnath等人。（2003）关于培养MCF10A细胞的方法；vidi等。（2013）用于培养hmt-3522 s1细胞的方法；并从kalabis等人的>中修改。（2012）有机型3D培养方法。

相互竞争的利益

作者声明，这项研究是在没有任何商业或金融关系的情况下进行的，这种关系可以被解释为潜在的利益冲突。

伦理学

所有动物实验均符合《实验动物护理和使用指南》（国家研究委员会，国家科学院出版社，华盛顿特区，2010年），并经托莱多大学机构动物护理和使用委员会批准。哦（协议号：108658）。

工具书类

Briand，P.，Petersen，O.W.和Van Deurs，B.（1987年）。一个在化学定义的培养基中分离和繁殖的新型二倍体非肿瘤性人乳腺上皮细胞系。体外细胞发育生物学>23（3）：181-188。
Carey，S.P.，Martin，K.E.和Reinhart King，C.A.（2017年）。三维胶原基质诱导机械敏感性侵袭性上皮表型。sci rep>7:42088。
Debnath，J.，Muthuswamy，S.K.和Brugge，J.S.（2003）。MCF-10a乳腺上皮腺泡在三维基底膜培养中的形态发生和癌变。方法>30（3）：256-268。
Gudjonson，T.，R_nnov Jessen，L.，Villadsen，R.，Rank，F.，Bissell，M.J.和Petersen，O.W.（2002年）。正常和肿瘤来源的肌上皮细胞在与管腔乳腺上皮细胞相互作用以促进极性和基底膜沉积的能力上不同。J Cell Sci>115（Pt 1）：39-50。
Hotary，K.，Allen，E.，Punturieri，A.，Yana，I.和Weiss，S.J.（2000）。通过膜型基质金属蛋白酶1、2和3调节三维I型胶原基质中的细胞侵袭和形态发生。J Cell Biol>149（6）：1309-1323。

Kalabis，J.，Wong，G.S.，Vega，M.E.，Natsuizaka，M.，Robertson，E.S.，Herlyn，M.，Nakagawa，H.和Rustgi，A.K.（2012年）。小鼠和人食管上皮细胞在三维器官型培养中的分离和鉴定。nat protoc>7（2）：235-246。

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