材料和试剂
盐水虾测定
乳胶手套（KCWW，金佰利，目录编号：57330）
24孔板，无菌且经组织处理（Corning，目录号：3526）
移液器技巧
卤虾卵（卤虫盐）（从海洋营养部购买）和纯卤虫卵囊来自大盐湖，因此地理差异不会影响测定
氯化钠（NaCl ）（Sigma-Aldrich，目录号：S7653）
海盐（热带马林）

设备

2 L带24/29接头的分液漏斗
立体声micrope pe Stemi 2000（蔡司）
气泵（鼠标M-106，两个输出4w）
软光源，例如如荧光灯7瓦特
孵化器
注意：任何培养箱如果保持25°C到37°C，50-60％的湿度以及12 h白天照明/ 12 h黑暗持续24 h都是好的。

软件

Microsoft Office Excel

程序

1个孢囊的卤虫藻皆s在500毫升新鲜天然橡木水一小时以2大号分液漏斗中。漏斗不应覆盖在顶部。
将17克海盐溶解在上述500毫升天然淡水中。
便于使用良好的通气漏斗的在室温下，并在连续光照48小时（图1）的空气泵。

˚F igure 1.无节幼体培养装置

孵化48小时后，n auplii从卵壳中释放出来。
收集在漏斗（靠近光源）的亮侧利用无节幼体一个微量。
将上面分离的幼虫转移到一个装有0.9％NaCl的小烧杯中。
从约10至20幼体的小烧杯中向24孔板的每个孔中引入等分试样（0.5 ml）。24孔板的孔的总体积为1ml NaCl 0.9％。
以三种浓度测试金属药物，所述浓度范围为例如0.05、0.5和5μM ，每个浓度三个重复。金属药物对癌细胞系的IC 50值应在此测试浓度范围内。测试抗菌或杀真菌化合物时，测试浓度应为MIC和2× MIC，4× MIC值。对于水凝胶材料，将直径为9 mm的圆盘添加到每个孔中。
每个孔的最终体积为1 ml，含0.9％的NaCl和金属药物的存在。
保持板在25°C在培养箱中。
24小时后，使用立体镜检查盐水虾。
如果幼虫在观察的10秒内表现出内部或外部运动，则认为它们是活的。
重复每个实验三遍。

注意：在AR的解封装temia囊肿，continu OU中曝气，使用空气泵，应做了一个正确的孵化的胚胎，在25 ℃下同时与连续照明。为了测试的可接受性，在对照组中接受了高达10％的死亡率。

数据分析

代表性数据

图2显示了经过处理的孵化蛋，生和死无节幼体盐水虾的选定图标。

图2.用金属药物处理过的孵化卵（A），活体（B）和死亡（C）无节幼体盐水虾的选定图标

观察到的幼虫和死亡的幼虫被认为在观察的10 s内没有任何内部或外部运动。
计数死亡幼虫的数量s 。
的（％）死亡率的卤虫藻幼虫，按Abbott 1987计算：

M（相对于对照的％）＝ [（L C -L T ）/ L C ]×100

其中M是死亡率；L C ，24小时后在对照组中生活无节幼体；L T ，在24小时后与被测药剂成活幼体。

致谢

用于协议卤虫藻测定改编和从先前的研究中修改（Syahmi等人，2010 ;哒Silveira的卡瓦略。等人，2017 ;拉赫曼等。人，2018 ; Trompeta 。等人，2019 ）。在Banti等人中有描述。（2020），Ketikidis等。（2020）和Rossos等。（2020）。这项研究是由欧盟通过希腊国内基金共同出资的业务方案的竞争力，创业与创新，呼叫研究，创建创新方面（项目编号：下T1EDK-02990）和它得到了国家提供了财政支持奖学金基金会（IKϒ）（项目编号2019-050-0503-17816）通过“人力资源开发，教育和终身学习”运营项目，与“加强博士后研究人员-第二周期”项目（MIS- 5033021），由希腊和欧盟（欧洲社会基金会-ESF）共同资助。CNB和SKH感谢COST Action CA17104“针对多药耐药性肿瘤的新型诊断和治疗工具”的讨论。SKH感谢诺华制药公司SACI的肿瘤学部门的财政支持（项目号82819）。

利益争夺

作者声明没有利益冲突或利益冲突。

参考文献

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