材料和试剂

1.酒精棉签（BD Biosciences）

2. Nair脱毛膏

3.棉签

4.无菌纱布垫

5.结核菌素注射器（BD Biosciences）

6. 344SQ绿色荧光蛋白/萤火虫荧光素酶（GFP / fLuc）细胞（来源：J。Kurie，医学博士安德森癌症中心）

7.汉克斯的平衡盐溶液（Gibco）

8.基质胶（康宁）

9. D-萤光素（PerkinElmer）

10. 1 × DPBS（Gibco）

11.异氟烷（VetOne）

12.氯胺酮（Vedco）

13. Xylazine （橡子动物健康）

14. Acepromazine（Vedco）

15.麻醉鸡尾酒（请参阅食谱）

注意：请参见Vinod等。（2020A ）只对聚（2-恶唑啉），用于制备基于（协议试剂小号ections C和d 。

设备

手术器械
Autocli p伤口闭合系统–钉书钉+ Applier（Braintree Scientific，Inc）
虹膜手术剪刀，4½我NCH，弯曲的（Fisher Scientific公司）
5英寸锯齿细腻的特殊解剖夹钳（Fisher Scientific）
IVIS-Lumina II光学成像系统（珀金埃尔默公司，马萨诸塞州霍普金顿）
小动物感应室

软件

Living Image®软件

程序

NSCLC动物肿瘤模型的制备
1.制备悬浮液344SQ绿色荧光蛋白（GFP）/ FLUC细胞在50％的Hanks '平衡盐溶液和50％基质胶（V / V）。

2.通过腹膜内注射麻醉混合物麻醉小鼠，并将其置于右侧卧位。

3.用棉签在胸部涂抹脱毛膏，并静置1分钟（确保不要超过1分钟，以免对小鼠造成化学灼伤）。用干燥的无菌纱布擦拭干净。使用潮湿的无菌纱布垫去除残留的乳霜。

4.清洁皮肤表面用的酒精棉签，使肋10和11之间的切口由平行叶片放置于肋笼（见Figu重新1个甲）。

5.将细胞悬液转移至1 ml结核菌素注射器中，并注射50 μ升2.5 × 10 3 -5 × 10 3细胞向足背外侧腋中线左侧肺实质（见图1乙）。

6.使用伤口闭合夹闭合切口，将动物置于左侧卧位直到恢复。

注意：第1天定义为肿瘤接种的当天。

图1.示意图显示切口部位（A ）和原位注射部位（B ）

生物发光成像
腹膜内注射150 mg / kg的15 mg / ml（在1 × DPBS中）D-荧光素溶液，并在15分钟后开始成像。
通过将小鼠放入包含2-3％异氟烷的氧气的吸入诱导室中（约5分钟）来麻醉小鼠。
将麻醉的动物置于IVIS lumina光学成像系统成像室的样品台中，仰卧。
使用Living Image®软件中的以下采集设置采集发光图像：
像素宽度：1
像素高度：1
图像单位：计数
发光时间（秒）：60
视场角：24
排放过滤器：打开
主题大小：1.5
注：生物发光成像（B 。李）一次之前的处理开始进行，以获得基线生物发光，以确认存在的肿瘤。开始治疗后（第8天），每周进行一次B.LI监测肿瘤生长。

化学疗法与化学增敏剂联用
将小鼠随机分为四组，每组10只
施用总共4个剂量（天8，12，15 ，的静脉内制剂和19）（unles小号另有说明）：
生理盐水（体积：100-200 μ升）。
C 6 CP / AZD7762 PM（POx胶束；以10/20的重量比与C 6 CP和AZD7762共载，最终剂量为10 mg / kg的C 6 CP和20 mg / kg的AZD7762）。
C 6 CP / VE-822 PM（POx胶束；以10/10的重量比与C 6 CP和VE-822共同负载，最终剂量为10 mg / kg的C 6 CP和10 mg / kg的VE -822）。
甲NTI - PD-1抗体（每只小鼠250微克;腹膜内给药）。

单独进行免疫治疗，并结合免疫检查点封锁
将小鼠随机分为4组，每组13只。
施用总共4个剂量（天8，12，15 ，的任一制剂的静脉内和19）（除非另有说明）：
生理盐水（体积：100-200 μ升）。
瑞西莫德PM（5 mg / kg）。
甲NTI - PD-1抗体（每只小鼠250微克;腹膜内给药和17天后持续了4次以上- 22天，26，29 ，和33）。
注意：由于此组中的小鼠在第33天之前达到了研究终点，因此它们没有接受第四剂。

雷西莫特PM（5毫克/千克）+抗- PD-1（每只小鼠250微克;腹膜内给药和17天后持续了4次以上- 22天，26，29，和33）。

数据分析

通过指定概述肿瘤的目标区域来分析BLI数据，并使用Living Image Software测量荧光素酶活性（代表肿瘤负担）来量化总辐射度。请参阅Vinod等。（2020b ）获取代表性的BLI图像。

菜谱

麻醉鸡尾酒
为了制备麻醉剂鸡尾酒，在1氯胺酮，甲苯噻嗪和乙酰丙嗪的稀原液× DPBS和辖100 μ每10鸡尾酒的升克的小鼠体重。每种麻醉剂应使用以下剂量：

氯胺酮：80毫克/公斤（股票（浓）100毫克/米升）

甲苯噻嗪：8毫克/公斤（股票（浓）100毫克/米升）

Acepromazine：1 mg / kg （原浓10 mg / ml ）

致谢

原始工作（Vinod等，2020b）由美国国家癌症研究所（NCI）癌症纳米技术联盟（U54CA198999，卡罗来纳州癌症纳米技术卓越中心）资助。

利益争夺

AVK是共同发明专利上切合当前贡献和AVK的主题和MSP已经联合创始人“具有基于意图POx的药物剂型的商业化发展的DelAqua制药公司的兴趣。其他作者没有竞争利益要报告。

伦理

该方案（IACUC＃18-174）已获得北卡罗来纳大学教堂山分校动物护理和使用委员会的批准。IACUC＃18-174的有效期为3年。

参考

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