材料和试剂

1. 1.5 -毫升离心管小号（爱思进，目录号：AXYMCT150C）
2. 2.0 -毫升离心管小号（爱思进，目录号：AXYMCT200C）
3.水稻（Oryza sativa cv Nipponbare ）
4.液氮
5.甲氧胺盐酸盐（98%，Sigma-Aldrich，目录号：226904-1G ）
6.吡啶（Macklin，目录号：P816290）
7. N-甲基-N-（三甲基甲硅烷基）三氟乙酰胺（Santa Cruz Biotechnology ，目录号：24589-78-4 ）
8.果糖（上海原野生物科技有限公司，目录编号：B21896 ）
9.葡萄糖（Sigma-Aldrich ，目录号：G7528）
10.蔗糖（DR EHRENSTRORFER，目录号： CDCT-C16901100）
11. Ribitol （99%，Sigma-Aldrich，目录号： A5502-5G ）
12.氦气（v/v ≥ 99.999%, Gassoon ）
13.甲氧胺盐酸盐溶液（见配方）
14.内标溶液（见配方）

设备

G作为色谱仪（SHIMADZU，型号：GAS CHROMATOGRAPH GC-2010 Plus）
Glas- Col e蒸发器（广州鹏欣科技，型号：F D5-系列）。
SH-Rxi-5Sil MS Cap（SHIMADZU，目录号：R221-75954-30）
带盖的自动进样器小瓶（Agilgent ，目录号：5182-0715）
玻璃嵌入小号（BioReags ，目录号：571200）
离心机（Eppendorf，型号：Centrifuge 5 424 R ）
涡流（海门麒麟-贝尔，型号：QL-901）
真空冷冻干燥机（Gold Sim，型号：FD5系列冷冻干燥机）
1 - ml 移液管（Axygen ，目录号：T-1000-B）
200 - μl移液管（Crystalgen ，目录号：23-2346）

软件

GC- MSsolution软件（岛津 GC-MS QP-2010）
NIST17 质谱搜索程序（版本 2d，2017 年版）（美国国家标准与技术研究所，盖瑟斯堡，马里兰州）
微软Excel

程序

样品处理
样品F从15天龄的水稻幼苗（每个样品约15毫克鲜重），并转移到一个2 RESH稻根组织-毫升管。生长吨，12小时/ 12小时光照/黑暗下他稻苗周期与75％相对湿度，一个的光强度110 μ摩尔·米-2 ·秒-1 ，一个点ND的温度28°C 。
我mmediately FR EEZEř OOT样品在液氮中和GR在d彻底使用杵和研钵。
向每个管中加入1.5 ml 75% 甲醇并短暂涡旋。
请将S amples在培养箱中在70 ℃下15分钟，然后离心机ë以10,000rpm × g室温下 10 分钟。
对于每个样品，转移1.2毫升上清至1.5 -毫升管。
添加100微升核糖醇（50微克/毫升，作为一个内标）到每个管中，涡流简要地，然后离心机È以10,000 ×克在室温下进行30秒。
d - [R Y样本在真空冷冻干燥机。
注意：样品在进行以下衍生之前需要彻底干燥。
添加50.0微升甲氧基胺盐酸盐，以每管以溶解所述样品，pipett È上下数次，和离心机È以10,000 ×克在室温下2分钟。
牛逼转让（BOT）牛逼，他的解决方案，从管到自动采样瓶中有一个玻璃内衬。
地方吨他样品在培养箱中在65 ℃下2小时。
添加50.0微升的N-甲基-N-（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺，以各自动取样管形瓶和地点在培养箱在65 ℃下另外2小时。
注意：在65°C（执行衍生小号TEP小号A10和A11代替较低的温度）; 这是必要的孔定量TAT ING糖CON吨在水稻组织的微量通过GC-MS ENT和显著增加sensitiv两者均和ACCURA CY此方法。
分析的样品的GC-MS 。

仪器参数
设置 GC 参数如下：C 载气、氦气（61.3 kPa）；气体流速，30毫升/分钟；GC 界面温度，230°C。
GC 柱温梯度程序：B 开始于 70°C ；在 70°C 下保持 2 分钟；以 5°C/min 的速度升温至 200°C ；在 200°C 下保持 3 分钟；以 10°C/min 的速度升温至 300°C ；在 300°C 下保持 3 分钟。总运行时间：44 分钟。
MS参数：小号乌尔斯河温度，250℃ ; 质荷比 (m/z) 范围，60 - 600 ；扫描速度，0.4 次扫描/秒；电离能，70 eV。
注意：上面的I nstrumental参数基于岛津GC-MS QP-2010，其中m AY是不同的，并且需要modifi阳离子当使用一个不同的GC-MS仪器。

数据分析

四个标准化合物，果糖，葡萄糖，蔗糖，和核糖醇，通过GC-MS，其中所述的GC-MS溶液软件和NIST17质谱搜索程序既用于分析以确认峰分配，将获得的保留时间（见图1）。当从大米组织中提取的目标糖的最终浓度范围为 2.5 μg /ml 至 500.0 μg /ml时，结果报告为“阳性” 。
注意：对于峰定量，目标糖的色谱积分 (CI) 归一化为同一样品的核糖醇的CI （CI目标糖/ CI核糖醇）；目标糖的归一化CI用于不同样品间目标糖含量的比较；开发应该比0.97高的校准曲线，大约15毫克的米鲜重的相关系数组织SH乌尔德得到可靠的数据。最终糖浓度在2.5 - 500.0 μg /ml范围内是可靠的。

图形用户界面，图表，箱线图描述已自动生成
图1 。测试样品中核糖醇和三种可溶性糖的色谱图。
（A）的色谱核糖醇和蔗糖，指示由所述分别绿色和蓝色星号。（B）的色谱图核糖醇和葡萄糖，由所指示的绿色和voilet星号，分别。（C）的色谱核糖醇和果糖，指示由所述分别绿色和红色星号。的（d）色谱核糖醇和三个糖（蔗糖，葡萄糖，果糖）来自稻根中提取，标有颜色编如上所述星号。

食谱

甲氧胺盐酸盐溶液
将 15 mg甲氧胺盐酸盐溶解在 1.0 ml 吡啶中。它必须新鲜制备并在室温下使用。
内标溶液
内标的制备（50 μg /ml核糖醇）：将 1.0 mg核糖醇溶解在 20 ml 去离子水中并短暂涡旋。小号TOR Ë在-80℃下直到使用。

致谢

我们承认金融支持从在中国国家自然科学基金会（31501613）和中国（2018YFD0201201-4＆2018YFD0200500）的国家重点研究发展计划。这项工作是从徐等人那里改编和修改的。, 2021.

利益争夺

作者宣称没有利益冲突。

参考

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