材料和试剂

（也称为P4C5）细胞（Verrier等人，1997），其中所述癌细胞包括人类癌细胞和人类癌细胞（HeLa CD4 +
Dulbecco Eagle's Modified Medium（DMEM）（Life Technologies，Gibco ）
通过转染HEK-293T细胞产生的HIV-1ΔEvenv病毒颗粒
Nonidet P40（NP40）（Sigma-Aldrich）
不再可商购，但用Igepal CA-630（Sigma-Aldrich，目录号：I8896）代替
磷酸盐缓冲盐水（PBS）（Life Technologies，Gibco ）
氯酚红-β-D-吡喃半乳糖苷（CPRG）（F.Hoffmann-La Roche，目录号：10884308001）
胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher Scientific）
青霉素/链霉素（PS）（Life Technologies，Gibco ）

设备

程序

P4C5细胞是稳定表达CD4和CCR5的HeLa细胞。此外，它们表达在HIV-1长末端重复（LTR）启动子控制下的lacZ基因。它们在正常HeLa细胞中，在DMEM，10％热灭活的FBS，10％PS中生长，并保持在5％CO 2和37℃。
将8×10 4个P4C5细胞接种在平底96孔板中，最终体积为100μl的完全培养基24小时。
使用1或5ng的Gag p24 /孔，用HIV-1Δenv感染细胞一式三份。具体地，将100μl的含病毒培养基加入到已经在孔中的100μl完全培养基中。病毒滴度必须使用Gag p24 ELISA测定（自制或商业化）预先测定。需要使用两种不同的病毒输入，以确保未达到饱和度水平。
在感染后36小时，将细胞在80μl裂解缓冲液中裂解，然后在室温下用80μl含有终浓度为3.65mg/ml的CPRG的裂解缓冲液温育1分钟。 CPRG，β-半乳糖苷酶的底物，允许监测感染的水平。每15分钟测量OD（570nm），并相对于OD的背景水平（690nm）进行标准化。
通过流式细胞术或通过ELISA对培养物上清液中Gag p24的定量来监测感染水平（通过Gag 细胞百分比监测）与标准化OD（570nm）成比例。该测定为0.1至3个OD单位（570nm）的线性。代表性的结果如Roesch等人2012年的图3B所示。

食谱

致谢

该协议改编自Roesch等人（2012）。

参考文献

Roesch，F.，Meziane，O.，Kula，A.，Nisole，S.，Porrot，F.，Anderson，I.，Mammano，F.，Fassati，A.，Marcello，A.，Benkirane， Schwartz，O。（2012）。热疗刺激HIV-1复制。 PLoS Pathog 8（7）：e1002792。
Verrier，F.C.，Charneau，P.，Altmeyer，R.，Laurent，S.，Borman，A.M.and Girard，M。（1997）。针对gp120/gp41的几种构象依赖性表位的抗体抑制CCR-5依赖性细胞 - 由原代巨噬细胞向性HIV-1分离物的天然包膜糖蛋白介导的细胞间融合。。 17）：9326-9331。