材料和试剂

无菌盐水（0.9％NaCl）（B.Braun）
乙酰基-β-甲基胆碱氯化物，粉末（Sigma-Aldrich，目录号：A-2251）
Drierite（Sigma-Aldrich，目录号：238988）
戊巴比妥钠（5.47％）（CEVA）
赛拉嗪（2％）（Rompun ，Bayer）
棉线n50（DMC，目录号：334A/50）

设备

由以下模块组成的FlexiVent TM系统（SCIREQ Technologies）：FV-M1（1.8ml），FV-PP-M1，FV-XC，FV-EC，FV-BU和Aeroneb 与 Pro（AG-AL-1000）相关的实验室雾化器系统
"1ml"无菌注射器（Terumo，目录号：SS + 01T1）
"25号0.5mm"无菌针（Terumo，目录号：NN-2516R）
18号金属针（SCIREQ Technologies，目录号：73-0019）

程序

测量对乙酰甲胆碱的气道反应性的方案的概述：

小鼠称重并麻醉i.p。与木糖醇和戊巴比妥。
将小鼠气管切开并将18号金属针插入气管中并连接到计算机控制的小动物通气机。
测量基线值。
盐水和乙酰甲胆碱在呼吸机回路中雾化。
气道测量使用FlexiVent 协议进行。
小鼠在末端断开，以确保他们在没有呼吸机的帮助下再次正常呼吸。

麻醉
1. 使木糖醇和戊巴比妥溶液至室温（18-25℃），并将乙酰甲胆碱和盐溶液置于冰上。
2. 称重鼠标。
3. 将鼠标握在手中的背部皮肤，使其头部向上，其后腿向下。用手指保持其尾巴。
4. 使用"1ml"注射器和"25号"针头注射溶液，并腹膜内（i.p.）给予6ml/kg的二甲苯磺胺溶液。
5. 在另一个笼子中隔离鼠标。等待10分钟。
6. 将鼠标握在手中的背部皮肤，使其头部向上，其后腿向下。用手指保持尾巴。
7. 使用另一个"1ml"注射器和"25号"针注射6ml/kg戊巴比妥腹膜内。
8. 更换鼠标在笼子里。等待10分钟。
气管切开术
1. 检查鼠标是否严重麻醉。
2. 解剖和暴露气管，在气管下方放置一根棉线，将18号金属针插入气管，用棉线在气管周围打结，以便将针固定到位。
3. 将针（连接鼠标）连接到计算机控制的小动物呼吸机（FlexiVent ^®）。
4. 遵循FlexiVent ^®提供的"Mouse_AN_v5.2.ext"标准协议。该协议由12个周期的2次扰动（快照和Prime-8）在10秒的雾化后组成，并允许测量电阻，弹性和顺应性数据。
测量过程和乙酰甲胆碱雾化
1. 在鼠标连接时开始通气。
2. 启动协议。
3. 在雾化器中添加盐水进行第一次喷雾步骤（10秒），然后进行12个扰动周期。
4. 用去离子水冲洗雾化器3次（用注射器清除溶液，用水替换，重复3次）。
5. 在雾化器中加入乙酰甲胆碱进行第二次喷雾步骤（10秒），然后进行12个扰动周期。
6. 停止实验并停止通气。
7. 立即断开18号金属针与设备的连接。鼠标应该再次正常呼吸，表明在措施期间它是活的。然后，安乐死的鼠标。如果鼠标死了，应该删除数据。
8. 用去离子水冲洗雾化器3次。
9. 使用以下鼠标开始新的分析会话。
数据分析
1. 将Scireq FlexiVent ^® V5.2程序中的数据导出到Excel文件
2. 对于每个盐水或乙酰甲胆碱雾化，峰值响应计算为三个最大值的平均值（在下文的图上为红色），并用于计算气道阻力和顺应性。气道阻力表示为cm H 2 Osml ^{-1，气道依从性为ml.cm H 2 O ^{sup>。
  
  图1。}}

食谱

制备乙酰甲胆碱含有50mg/ml乙酰甲胆碱（0.26M）稀释在无菌盐水中的溶液。乙酰甲胆碱必须临时制备。
新鲜制备包含稀释于无菌盐水中的0.25％木聚糖的木聚糖溶液和含有0.9％戊巴比妥的戊巴比妥溶液。

致谢

该协议改编自以前发表的论文：Reber等人（2012）。 FD由"fond de dotation recherche ensantérespiratoire"支持，呼吁招标2010年。

参考文献

Reber，LL，F.Daubeuf，M.Plaininga，L.Deauau，S.Gerlo，W.Waelput，S.Van Calenbergh，J.Tavernier，G.Haegeman，BNLambrecht，N.Frossard和K.De Bosscher 2012）。解离的糖皮质激素受体调节剂降低小鼠哮喘模型中的气道高反应性和炎症。 188（7）：3478-3487