材料和试剂

色谱纸（Whatman 1号）
尿刊酸（MP Biomedicals）
脱氨基组氨酸（Chem-Impex International）
异丁醇
丙酮
甲酸
对氨基苯磺酸
NaNO ₂
HCl
Na ₂ 3
Pauly重氮试剂（见配方）

设备

色谱室
毛细管（Kimble Chase Kimble，目录号：7190010）
喷嘴

程序

色谱室的预处理
1. 通过混合160：160：1：39比例（体积比）的异丁醇，丙酮，甲酸和水来制备色谱溶剂。
2. 将溶剂倒入色谱室，液面应距离底部约5 mm。密封含溶剂的室至少1小时，使溶剂蒸汽饱和室
色谱纸的制备
1. 剪下一条适当尺寸的色谱纸。带的宽度取决于待分析的样品数量（样品点之间和点与纸张边缘之间的距离应为至少20mm）。高度取决于分离的化合物的Rf值的差异，通常为100-400mm。
2. 通过石墨铅笔（起始线）从带的底部20mm绘制线。在此行上标记点以便将来的样品点。
3. 使用毛细管在起始线上加载测试样品和标准物的斑点。微升量用于制备斑点。斑点的直径应该只有几毫米。为了获得集中的斑点，斑点可以重复几次。如果有必要，等待现场干燥，然后重复点滴。在尿刊酸和脱氨基组氨酸的情况下，每个斑点应含有约10nmol的这些化合物之一。
色谱法
1. 要开发色谱图，将准备的条放入饱和色谱室中并密封室。
2. 当溶剂前沿从纸张顶部移动到约20 mm时，从样品室中取出样品条。标记条上溶剂前沿的位置。
检测
1. 空气干燥钢带。使用喷嘴，首先用Pauly重氮试剂喷雾干燥的条，直到纸变湿，然后用10％Na 2 CO 3溶液喷雾湿条，直到咪唑基衍生物的斑点变成有色的（尿刊酸 - 橙色，脱氨基组氨酸 - 红色）。颜色在几个星期内是稳定的。典型色谱图的示意图如图1所示。
2. 计算Rf值[（组分行进的距离）/（溶剂行进的距离）]。
  
  图1.通过纸色谱法分离尿刊酸和去氨基组氨酸的示意图

食谱

Pauly重氮试剂
试剂A：将0.9g对氨基苯磺酸溶解在H 2 O中并加入9ml浓HCl（37％），然后补充H 2 O中的总体积为100ml > O
试剂B：将5g NaNO 2溶解在100ml H 2 O中。
Pauly重氮试剂：将6ml冰冷的试剂A与6ml冰冷的试剂B混合，并在冰上孵育5分钟。再向混合物中加入24ml试剂B和64ml冰冷的水。 Pauly重氮试剂可在冰上储存数小时。

致谢

该协议改编自Sen等人（1962）。这项工作是由俄罗斯基础研究基金会（项目号10-04-00352）支持。

参考文献

Bogachev，A.V.，Bertsova，Y.V.，Bloch，D.A。和Verkhovsky，M.I。（2012）。尿酸还原酶：在希瓦氏菌中鉴定新的无氧呼吸途径 MR -1。 Mol Microbiol 86（6）：1452-1463。
Consden，R.，Gordon，A.H.and Martin，A.J。（1944）。蛋白质的定性分析：使用纸张的分区色谱法。 Biochem J 38（3）：224-232。
Sen，N.P.，Mc，G.P.and Paul，R.M。（1962）。咪唑丙酸作为L-组氨酸的尿代谢物。 Biochem Biophys Res Commun 9：257-261。