材料和试剂

水稻幼苗：三周龄幼苗
塑料支撑网
三丁基氯硅烷（Fluka，目录号：90796）
NH 4 3
KH ₂ PO ₄
K ₂ SO ₄
CaCl 2 ^。 2H O
MgSO 4。。 O
Na SiO 3
NaFeEDTA
H ₃ BO ₃
MnCl 2 ^。 4H O
CuSO 4 ^。 5H sub 2 O
ZnSO 4 。 7H O
Na <2> MoO <4> ^。 2H O
国际水稻研究所（IRRI）营养液（见配方）
校准溶液（参见配方）
测量溶液（参见配方）

设备

小塑料盘（直径6厘米）
测量室
离子选择性电极（Clark Electromedical，型号：GC150-10）
具有ASET 2.0的BIO-IM（NMT-YG-100，Younger USA LLC，Amherst，型号：MA01002）

软件

ASET 2.0（Sciencewares，Falmouth，目录号：MA 02540）
iFluxes 1.0（YoungerUSA，LLC，Amherst，目录号：MA 01002）软件

程序

将水稻种子用10％（v/v）过氧化氢表面灭菌30分钟，然后用去离子水彻底冲洗。
将灭菌的种子在安装在塑料容器中的塑料支撑网（1mm筛目）上在具有16小时光照（30℃）/8小时的生长室中发芽1周（22℃）光周期，相对湿度控制在约70％。选择均一的幼苗，然后转移到IRRI营养液中。
水稻幼苗在IRRI营养液中生长2周，然后剥夺N（没有NH 4 NO 3的IRRI营养液）3天。所有植物在具有16小时光照（30℃）/8小时暗（22℃）光周期的生长室中生长，并且相对湿度控制在约70％。
在室温（24℃-26℃）下测量之前，将幼苗的根在测量溶液1（无NO 3+缓冲液）中平衡20至30分钟。
然后将平衡的幼苗转移到测量室中，并用10ml新鲜测量溶液2填充小塑料皿（直径6cm），所述新鲜测量溶液2含有0.25mM NO 3 - >。
离子选择性电极由1.5mm（外径）硼硅酸盐空白制成。将坯料拉1μm直径的尖端，然后用三丁基氯硅烷硅烷化。将电极坯料的尖端破碎成2-3μm的直径，然后用适当的溶液回填。 NO 3+的反填充溶液是0.5M KNO 3和0.1M KCl。用校准溶液1（0.05mM NO 3+）校准电极并校准溶液2（0.5mM NO 3 -/sup>），然后进行通量测量
当根部固定在培养皿的底部时，微电极在测量溶液中沿着垂直于根分生组织区的轴在距离主根表面5和35μm之间的两个位置之间振动。通过在不含根的测量溶液中振动电极记录背景。测量持续15分钟。
分析所获得的数据，并将其转换为NO 3 - 流出（阴性）（pmol cm -2 --s sup -1 - 1/sup >）使用MageFlux程序（http://www.xuyue.net/mageflux）。每种类型的转化细胞周围的离子流测定独立地重复五次

食谱

IRRI营养液
1.25mM NH 4 NO 3 sub/
0.3mM KH 2 PO 4 4/v/v 0.35mM K 2 SO 4 4/v/v 1mM CaCl 2 ^。 2H O
1mM MgSO 4。 7H 2 0.5mM Na 2 SiO 3子等 20μMNaFeEDTA
20μMH sub 3 BO ₃
9μMMnCl 2 。 4H 2 O
0.32μMCuSO 4 ^。 5H 2 0.77μMZnSO 4 sub 7H 2 O 0.39μMNa 2 MoO 4+ ^{2H 2 O O pH 5.5}
校准溶液
1. 校准溶液1
  （pH6.5）
  0.05mM NO 3 ^-
  0.025mM Ca（NO 3）2 sub。 0.1mM CaCl 2/v/v 0.1mM NaCl 0.1mM MgSO 4 0.3 mM MES
  pH 6.5
2. 校准溶液2
  h （pH 5.5） 0.5mM NO 3 ^-
  0.25mM Ca（NO 3）2 sub。 0.1mM CaCl 2/v/v 0.1mM NaCl 0.1mM MgSO 4 0.3 mM MES
  pH 5.5
测量溶液
1. 测量溶液1
  0.2mM CaCl 2·h/v 0.1mM NaCl 0.1mM MgSO 4 0.3 mM MES
  pH 6.0
2. 测量溶液2
  0.125mM Ca（NO 3）2 sub。 0.1mM CaCl 2/v/v 0.1mM NaCl 0.1mM MgSO 4 0.3 mM MES
  pH 6.0

致谢

该协议改编自Xu et al。（2006）; Sun （2009）; 和Tang等人（2012）。

参考文献

Sun，J.，Chen，S.，Dai，S.，Wang，R.，Li，N.，Shen，X.，Zhou，X.，Lu，C.，Zheng，X.，Hu， Zhang，Z.，Song，J.and Xu，Y。（2009）。 NaCl诱导的耐盐和耐盐的根中细胞和组织离子通道的交替，敏感的杨树种类。植物生理 149（2）：1141-1153。
Tang，Z.，Fan，X.，Li，Q.，Feng，H.，Miller，A.J.，Shen，Q.and Xu，G。（2012）。敲除大米硝酸盐转运蛋白可改变长距离易位，但不会改变根系流入。植物生理学 160（4）：2052-2063。
Xu，Y.，Sun，T.and Yin，L.P。（2006）。应用非侵入性微型传感系统同时测量 H ⁺和O 2 通量在花粉管周围。植物生物学 48（7）：823-831。