材料和试剂

C57BL/6老鼠，8周龄
Baytril（Enrofloxacin）抗菌注射液2.27％（Bayer HealthCare）
Buprenex（盐酸丁丙诺非）储备液（0.3mg/ml）（Reckitt Benckiser Healthcare）
Isothesia（Isoflurare，USP）（Butler Schein）
0.9％氯化钠（NaCl）溶液
100％氧（O 2）
手术碘
70％乙醇
0.015mg/ml Baytril在0.9％NaCl中（参见Recipes）
0.01mg/ml在0.9％NaCl中的Buprenex（参见配方）

设备

IH-0400 Impactor（Precision Systems and Instrumentation，LLC）
1.25 mm冲击器提示
注意：这是标准尺寸的鼠标提示。 2.5 mm尖端尺寸可用于大鼠程序。该公司还可以制作自定义尺寸的提示。
运行Windows 95+的具有9针串行端口的PC
无菌棉签敷料器
剃刀刀片
Graefe显微解剖组织钳（Roboz，目录号：RS-5150）
Noyes显微解剖弹簧剪刀（Roboz，目录号：RS-5676）
操作剪刀（Pakistan Scissors Industries，目录号：PS-13-120）
AUTOCLIP 9mm伤口夹（BD Biosciences）和施用器
VetEquip啮齿动物麻醉机
电热垫
Hamilton SafeAire层流罩（Fisher Hamilton）

程序

高压灭菌器冲击器尖端，脊髓稳定钳，解剖钳，AUTOCLIP伤口夹和应用手术前。
设置手术区域
1. 具有计算机的冲击器应放置在手术区附近的实验室工作台上（图1）。
  
  图1. Impactor和计算机设置。运行IH-0400软件的计算机。 A设置在冲击器设备旁边的实验室工作台上。 B.实验室工作台与手术部位（未示出）相对，以便于小鼠的移动。
2. 在Impactor机器中拧入所需尺寸的冲击器尖端。
3. 每次在Impactor舞台上重新组装支撑臂，以确保平稳的功能。
4. 拧入脊髓稳定钳（图2）。
  
  图2.冲击器设置。（A）冲击器尖端拧入冲击杆。（B）脊髓稳定钳拧入支撑臂。在椎板切除术之后和撞击之前将小鼠置于冲击器阶段。
用2.5％异氟烷在100％O 2中麻醉一只8周龄的小鼠。直到指示，以下所有步骤在麻醉下进行
使用剃刀刀片刮毛皮暴露皮肤上面的胸部和腰椎的少数段。
用手术碘消毒表面，然后用70％乙醇消毒
施用2.5mg/kg Baytril（稀释在0.9％NaCl中 - 参见Recipes）皮下（图3）。

图3.准备手术用小鼠。麻醉诱导后，取出背部皮毛，用手术碘和70％乙醇灭菌。在切口之前，皮下注射2.5mg/kg Baytril。
在上覆的皮肤，筋膜和肌肉切开，暴露脊柱。这在层流罩中进行以保持无菌
用解剖钳和剪刀，执行T10到T12的椎板切除术暴露脊髓。无菌棉签喷头可用于轻轻地清除碎屑和清洁区域。
注意：当动物躺在平躺的背面时，T12位于脊椎弯曲的顶点，T10位于两个椎骨的顶点（图4）。

图4.椎板切除术位点鉴定。去除皮肤后，暴露出肌肉覆盖的脊柱。 T12可以在椎骨曲率的背侧的顶点（箭头）识别。 T10是两个脊椎节段。需要移除覆盖的肌肉和筋膜以显现节段
将鼠标放在Impactor舞台上，前肢和后肢伸展。
应用脊髓稳定镊子到脊柱的侧向过程，立即喙和尾部到椎板切除部位。确保脊髓的背面平行于Impactor尖端的表面（图5）。

图5. Impaction设置。在椎板切除术后，将小鼠置于Impactor阶段。脊髓稳定镊子（A）置于喙和尾至椎板切除部位。脊柱必须定位，使脊髓的背面平行于撞击器尖端表面（B）。
下冲击器尖端到脊髓组织上方几毫米，以确保其在T11上方正确居中。
在软件中相应设置损伤参数。对于C57BL/6小鼠中的严重SCI，"实验模式"=力，"力"= 70，"速度"= 1和"停留时间"= 60。注意：对于其他菌株，年龄或伤害严重程度，可能需要调整力和停留时间。例如，需要较小的力来产生轻度或中度SCI。因为CD-1小鼠通常大于C57BL/6，所以较大直径的冲击器尖端可能需要在T11完全冲击脊髓。相反，较年轻的小鼠可能需要较小的冲击器尖端和较小的撞击力以产生严重的损伤。/em>
点击"开始实验"。
等待碰撞完成。 "位移v时间"和"强制v时间"图形将显示实际碰撞的数据（参见图6的示例）。

图6. aumotaed SCI后的示例读数。来自尖端传感器的数据将显示为"位移与时间"和"力与时间"图。还显示设置的参数（在这种情况下力= 70，速度= 1和停留时间= 60）以及实际值。
抬起冲击器尖端，轻轻地从脊柱中释放脊髓稳定钳
使用9毫米AUTOCLIPS缝合皮肤。
给予0.05 mg/kg Buprenex（稀释于0.9％NaCl - 见Recipes）皮下
从麻醉中取出小鼠，并放置在高度吸收的柔软的床上用电加热垫加热的小鼠笼子（图7）。

图7.后冲击护理。冲击完成后，使用AUTOCLIPS缝合皮肤。将小鼠从麻醉中取出并置于用电加热垫温热的软床上。小鼠意识到后，进行进一步的术后护理（参见步骤19）。
监测鼠标并提供术后护理。术后护理包括监测动物的疼痛和感染，提供热支持（使用加热垫），直到动物可走动，和饮食凝胶液体食品包装，以方便消费。水瓶也应放在带有长吸管的笼子中，以方便水合。向动物给予2.5mg/kg Baytril，每日一次，持续7天，并且根据需要更长。 0.05 mg/kg Buprenex用于第一个48小时手术后和之后，根据需要。膀胱必须每天手动表达两次，直到动物自我失去。尿液应外观清晰至黄色。如果有感染的迹象（多云，红肿），Baytril给予五天或直到感染被清除，以较长者为准。

食谱

0.015mg/ml Baytril在0.9％NaCl中 500μl股票Baytril
9,500μl0.9％NaCl
0.01mg/ml Buprenex在0.9％NaCl中 670μl股票Buprenex
19730μl0.9％NaCl

致谢

该项目得到国家卫生研究院拨款R01 NS 20013和R01 NS 20778的支持。

参考文献

Bhalala，O.G.，Pan，L.，Sahni，V.，McGuire，T.L.，Gruner，K.，Tourtellotte，W.G.and Kessler，J.A。（2012）。 microRNA-21 regulates astrocytic response following spinal cord injury。 J Neurosci 32（50）：17935-17947。