材料和试剂

EDTA血液（提取的血液保存在用于抗凝血剂目的的EDTA管中）
PBS
Ficoll-Hypaque溶液（密度1.077g/L，Ficoll-Paque PLUS）（General Electric Company，目录号：17-1440-03）
FBS
完成RPMI-10（RPMI，10％FBS）

设备

15或50ml圆锥形离心管
带有GH-3.7水平转子（或同等温度控制的离心机）的Beckman GPR离心机

程序

将新鲜的EDTA血液置于15或50ml锥形离心管中。使用无菌移液管，加入等体积的室温PBS。混合良好。
在离心管的底部设置一层Ficoll-Hypaque溶液。每10ml血液/PBS混合物使用3ml Ficoll-Hypaque
在室温下将血液/PBS缓慢地层积在Ficoll上。吸移非常缓慢的混合物对管壁，使其不与Ficoll层混合。
在室温下在GH-3.7转子中以900×g离心30分钟，用NO制动。
用移液管移除含有血浆和大多数血小板的上层。将单核细胞的聚集体转移到另一个离心管（中间层含有呈现白色的细胞聚集体，并漂浮在Ficoll上）。
用PBS洗涤单核细胞三次。加入三倍体积的PBS的单核细胞层。在室温下以400×g离心10分钟。
重悬细胞在完全RPMI-10（RPMI，10％FBS）（10毫升电镀或1毫升10％的DMSO冻结）。冻结或平板细胞。

致谢

该研究由来自西班牙经济和竞争部（MINECO）的授权SAF2010-17555，RD06/0014/0038（RECAVA）和RD06/0010/1013（TERCEL）和来自J.L.d.l.P.的EU FP7-ITN215761（NotchIT） G.L.有来自MINECO的博士研究生奖学金（FPI计划，BES-2008-002904）。

参考文献

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