材料和试剂

Microspatula（Thermo Fisher Scientific，目录号：21-401-10）
短小芽（Thermo Fisher Scientific，目录号：21-401-15）
滤纸（11cm）（Thermo Fisher Scientific，目录号：09-795D）
WypAll或KimWipes
冰桶
布尿布
干冰
生物危险废物袋
成人实验室小鼠
10x切割解决方案（参见配方）
1 M KCl（见配方）
1 M MgCl <2> （参见配方）
1 M CaCl <2> （参见配方）
1x切割解决方案（从10x股票制造）（见配方）

设备

外科剪刀（Fine Science Tools，目录号：14130-17）
Fine Scissors（Fine Science Tools，目录号：14094-11）
镊子（Fine Science Tools，目录号：11506-12）
手术刀柄（Fine Science Tools，目录号：10003-12）
手术刀片＃15（Fine Science Tools，目录号：10015-00）
单刃剃刀刀片
培养皿（100mm×15mm）（Sigma-Aldrich，目录号：CLS3160101）
转移移液管（Thermo Fisher Scientific，目录号：13-711-7M）
20ml Thermo烧杯（Thermo Fisher Scientific，目录号：02-539-1）
600ml烧杯（Sigma-Aldrich，目录号：CLS1000600）
1L瓶（Sigma-Aldrich，目录号：CLS13951L）
无核酸酶的微管（1.5-1.7ml）
塑料勺
显微镜
用管子
加压的氧气罐（95％O 2/5％CO 2）

程序

地点容器的1x切割溶液在填充的冰桶，并转移〜15ml溶液放入20ml烧杯中，也在湿冰上
在开始之前，将瓶子和烧杯中的溶液氧化至少20分钟（见下文）
用布尿布环绕工作台，并在工作台附近安装生物危害废物袋
地点所有解剖工具除了剃刀刀片和解剖刀进入600毫升烧杯含无菌水和WypAll或KimWipe布浸没在水里。将工具面朝下放在布上最小化与玻璃烧杯的直接接触
地点标记的微管在含有干冰（上面的蓝色桶）的桶中。同样，将一块培养皿放在干冰上，让其冷却
在显微镜下放置装有冰的小冰桶（上面的紫色桶）
填一个冰桶与冰和固定培养皿的另一片冰使得边缘面向下。放一块过滤器纸上的菜。
在开始之前，将足够的切割溶液从20ml烧杯中转移到滤纸上并均匀铺展
地点在每次解剖之前在板凳上的新的布尿布。放置鼠标在尿布上，保持在右边的尾巴上的抓地力手（对于右撇子）
快速安全鼠标用左手，使得耙齿在啮齿动物的后面头部牢固地保持在左拇指和近端食指之间。的小鼠应该坚定地在实验者的控制在这一点。将尾巴的底部从右手移动到左手它被固定在远端环和小指之间
地点光滑的大剪刀的末端在头骨后面坚定地坚持用右手。用左手快速拉尾，直到啮齿动物的头骨从脊髓脱位
后子宫颈脱位，用同样的剪刀断头，一定要切在头骨后面。如果切口太后，过多组织将阻塞孔的大小。
轻轻地将头皮拉到侧面，从两者之间切割头皮啮齿动物的眼睛沿着中线使用剃刀刀片
地点一把精细的剪刀插入孔中，并横向切开进入头骨。对另一侧重复。轻轻地从同一个空洞朝着鼻子的中线，试图保持结束剪刀尽可能表面，以免干扰大脑
从侧面靠近眼睛的中线切口做小切口。
使用钳子施加温和切向，侧向压力到任一新形成的颅骨襟翼。对剩余的一侧重复。如果力是适当应用，头骨应该完全清除和大脑裸露。如果一块头骨在相应的半球之前断裂暴露，丢弃它，并再次使用镊子强制剩余翻边。在这种情况下，请确保最小化之间的接触钳子尖和脑组织
使用更长的小芽轻轻地将大脑转移到20毫升烧杯的氧合切割溶液。这涉及到撕裂颅神经纤维靠近大脑底部。
使用勺子将大脑转移到润湿的滤纸上，和使用干净的剃刀刀片半截脑。转移任一半球回到20毫升烧杯
使用两个短去除海马：将一个刮刀尖固定在正上方小脑在与皮层的连接点附近。放置另一个刮刀尖附近相同的连接处并剥离皮层半球侧向以轻微的方式。定期使用移液器将新鲜切割溶液应用于组织
一旦皮质半球侧面完全剥离，海马应该暴露。当用一个铲刀尖锚定大脑时，放置另一个恰好在海马的尾端。小心申请压力到内侧白质束与锚固刮刀同时稍微向前和侧向移动第二铲刀尖端。用该刮铲尖端横向地"舀"或"滚动"海马。如果正确地做，海马应该着陆在滤纸上 "有光泽"结束。对第二个半球重复此步骤。
一旦两者取出海马并置于滤纸上，转移它随着培养皿片到下面的冰桶显微镜。对齐每个海马，使前端（略比后端更薄 - 这通过观察更容易看到海马从侧面而不是顶部）朝上。
使用解剖刀在前面做小的垂直切口和海马的后端。这将创建平，钝提示。
做一个类似切口约1/3 ^rd或1/4 ^th 方式从前到后，同时通过观察显微镜。小心"站立"上面的组织的小段刀片在前面创建的面上（右图--CA1在顶部）。一定要使用新鲜的切割溶液，但只有少量 - 过量的溶液将模糊海马的区别子区域
使用手术刀，解剖区域CA1，CA3或齿状回（DG）一个弯曲向下穿过组织（见下图近似解剖指南为右海马横截面）。立即将切开的组织转移解剖刀到干冰上的培养皿片。组织应该冻结非常快。
重复步骤23与剩余的组织片段，记住CA1 从前端到后端大约2/3 ^rds。根据切割的厚度，总共2-4段已创建。快速工作，尽量减少大脑的整体中断组织
一旦所有的组织片都在干冰上冷冻，使用手术刀刀片从培养皿和地方分离组织在标记的微管中。通常方便的是"堆叠"组织培养皿，因为它是收集。这样，一个更大的块将创建，并且它可以比多个小块更容易被移除的冷冻组织
将微管存放在-80℃下，直到组织准备好处理

食谱

10x库存切割解决方案
对于1 L原液，将其混合在量筒中，用无菌Milli-Q水补足至1 L：
73.00克NaCl
1.72g磷酸钠（一碱价，一水合物）
21.00克碳酸氢钠
18.10g D-葡萄糖
无菌过滤器用真空过滤，并在4℃下保存
1 M KCl
将14.91g KCl溶解在Milli-Q水中并使体积达到200ml
无菌过滤并在4℃下保存
1 M MgCl 2
在Milli-Q水中溶解40.66g MgCl 2 6水合物并使体积达到200ml
无菌过滤并在4℃下保存
1 M CaCl 2
在Milli-Q水中溶解29.40g CaCl 2 2水合物，并使体积达到200ml
无菌过滤并在4℃下保存
1x切割解决方案
对于1 L溶液：
混合100 ml 10x储备液
120mg L-抗坏血酸钠 3 ml 1 M KCl原液，用Milli-Q水
升至900 ml 用95％O 2/5％CO 2开始氧合至少20分钟
加入7ml MgCl 2和0.5ml CaCl 2并继续充氧
确认pH在生理范围〜7.2-7.4
用Milli-Q水冲洗至最终体积为1 L，
（可选）确认渗透压为〜315-325 mOsm
无菌过滤器，保持容器在冰上，带来实验设置

致谢

该协议改编自先前发表的论文：Levenson等人（2006）。这项工作由NIH（MH095270，MH57014，AG031722，NS057098，P30 NS47466），Ellison医学基金会和McKnight脑研究基金会支持。

参考文献

Levenson，J.M.，Roth，T.L.，Lubin，F.D.，Miller，C.A.，Huang，I.C.，Desai，P.，Malone，L.M。和Sweatt，J.D。（2006）。 DNA（胞嘧啶-5）甲基转移酶调节海马突触可塑性的证据。 em> J Biol Chem 281（23）：15763-15773。
Miller，C.A。和Sweatt，J.D。（2007）。 DNA的共价修饰调节记忆形成。神经元 53 （6）：857-869。
Sultan，F.A.，Wang，J.，Tront，J.，Liebermann，D.A。和Sweatt，J.D。（2012）。基因缺失的Gadd45b ，是一种活性DNA去甲基化的调节剂，增强了长-term memory and synaptic plasticity。 J Neurosci 32（48）：17059-17066。
Sweatt，J.D。（2009）。内存机制。学术出版社