材料和试剂

蔗糖
蛋白酶抑制剂混合物，无EDTA（Merck KGaA，Calbiochem，目录号：539134）
磷酸酶抑制剂鸡尾酒II
磷酸酶抑制剂鸡尾酒III
在DMSO中为10mM的PMSF或1.74mg/ml（Thermo Fisher Scientific，目录号：36978）
磷酸酶Arrest II鸡尾酒（Geno Technology，目录号：786-451）
磷酸酶Arrest III混合物（Geno Technology，目录号：786-452）
M-PER哺乳动物蛋白提取试剂（Thermo Fisher Scientific，目录号：78501）

设备

无菌瓶过滤器
玻璃Dounce匀浆器
冷冻离心机
定量至少25,000×g离心的微量离心管

程序

制备含有蛋白酶抑制剂混合物，磷酸酶抑制剂鸡尾酒II和III和PMSF的0.25 M蔗糖溶液，如下：
每100微升蔗糖主混合物添加：
一个。 96μl0.25M蔗糖
b。 1μl蛋白酶抑制剂混合物
C。 1μl磷酸酶抑制剂鸡尾酒II
d。 1μl磷酸酶抑制剂鸡尾酒III
e。 1μl的PMSF
称量要分析的组织，并加入其体积为蔗糖主混合物体积的10倍（参见步骤1;即，100mg =1,000μl蔗糖溶液）。
在将所有溶液保持在冰上的同时，向组织中加入适量的蔗糖溶液，并且使其均匀化，直到获得完全均匀的溶液。
在4℃下以10,000×g离心匀浆10分钟
将上清液转移到新的微量离心管中（在-20℃下保存沉淀），并在固定角度的转子中以30,000×g旋转90分钟（或在25,800×g < 2小时）。
转移上清液到不同的微量离心管，在-20°C保存。剩余的颗粒对应于微粒体部分
轻轻移液以将微粒体沉淀物重悬于200μl以下混合物（每100μl）中：
一个。 96μlMPER缓冲液
b。 1μl蛋白酶抑制剂混合物
C。 1微升磷酸酶停止鸡尾酒II
d。 1微升磷酸酶停止鸡尾酒III
e。 1μlPMSF

致谢

我们感谢Gene Ness博士，Huntington Potter博士和Chad Dickey博士在实验室中支持本协议的开发和适应。我们认为这项工作的下列文章：Abisambra 等人（2013）。方案开发期间的资金支持来自阿尔茨海默氏病协会NIRGD-12-242642，PSP/CBD和相关脑病症基金会（6144107400）和来自5P30AG028383-08的NIH/NIA ADC试验授予。

参考文献

本研究结果表明，该方法能够有效地提高患者的生活质量，提高患者的生活质量， M.，Suntharalingham，A.，Li，P.，Jin，Y.，Atkins，CA和Dickey，CA（2013）。 Tau积累通过损害内质网相关的降解来激活展开的蛋白反应。 J Neurosci 33（22）：9498-9507。
Abisambra，J.F.，Fiorelli，T.，Padmanabhan，J.，Neame，P.，Wefes，I。和Potter，H。（2010）。 LDLR表达和定位在阿尔茨海默病的小鼠和人类细胞培养模型中有所改变。 PLoS One 5（1）：e8556。