材料和试剂

设备

程序

用dH 2 O 2悬浮冻干的寡DNA，并如下混合（最终浓度为每种50μM）。
探针：标记的和互补的非标记寡DNA 竞争者：未标记和互补的非标记寡DNA 突变竞争剂：突变的非标记和互补的非标记寡DNA
在100℃在加热块上加热10分钟以变性
关闭加热块，将变性的DNA留在块上直到室温
用dH 2 O稀释探针至50nM
制备4％的天然聚丙烯酰胺凝胶和0.5×TBE
在4℃下在150V预电泳30分钟

在预电泳期间如下制备反应混合物：

注意：管号表示Odyssey Infrared EMSA套件中的样品瓶编号。

食谱

10x TBE
由890mM Tris，890mM硼酸和20mM EDTA 2Na（pH8.3）组成
混合：
108克Tris碱
55克硼酸 3.7g EDTA 2Na
将dH <2> O添加到1 L
高压灭菌并在室温下贮存
4％天然聚丙烯酰胺凝胶由4％丙烯酰胺，0.5x TBE，2.5％甘油，0.1％APS，0.1％TEMED组成混合：
2.67ml 30％丙烯酰胺（丙烯酰胺：双丙烯酰胺= 29:1） 1 ml 10x TBE
1ml 50％甘油 0.2ml 10％APS
20μl的TEMED
将dH <2> O添加到20ml，
Native-PAGE运行缓冲区
0.5x TBE
蛋白质储存缓冲液
由10mM Tris-HCl（pH7.5），150mM NaCl，0.1％Triton X-100,1mM PMSF，0.05％β-巯基乙醇，50％甘油组成。混合：
1ml的1M Tris-HCl（pH7.5） 3ml 5M NaCl
1ml 10％Triton X-100 1ml 100mM PMSF 50微升β-巯基乙醇 50克甘油将dH <2> O添加到100 ml

致谢

该协议改编自Nakata等人（2013）。

参考文献

Nakata，M.，Mitsuda，N.，Herde，M.，Koo，A.J.，Moreno，J.E.，Suzuki，K.，Howe，G.A。和Ohme-Takagi， bHLH型转录因子，ABA诱导BHLH型转录因子/JA相关MYC2- LIKE1，作为在拟南芥中负调节茉莉酮酸信号传导的阻遏物。植物细胞 25（5）：1641-1656。