材料和试剂

细胞系：FaDu（ATCC，目录号：HTB-43 ^TM）
胰蛋白酶（Life Technologies，Gibco ，目录号：15400-054）
10％胎牛血清（Thermo Fisher Scientific，目录号：SH30071.03）
1％青霉素 - 链霉素（10,000U/ml;10,000μg/ml）（Life Technologies，Gibco ，目录号：15140-122）
秋水仙碱（10μg/ml）（Life Technologies，Gibco ，目录号：15212-012）
低渗溶液（0.075M KCl）（J.T.Baker ，目录号：7447-40-7）
冰醋酸（J.T.Baker ，目录号：64-19-7）
固定剂（见配方）
生长培养基（参见食谱）

设备

10cm细胞培养皿（Trueline Valve Corpotation，目录号：TR4002）
离心管
显微镜（OLYMPUS，型号：DP71）
CO <2>孵化器
在室温下离心（使用"相对离心力，rcf"）
水浴

程序

第1天

在10cm细胞培养皿上接种5×10 5个细胞用于附着。
将细胞在37℃，5％CO 2下孵育48小时

第3天

添加0.1毫升秋水仙素，其可以崩溃有丝分裂纺锤体和防止有丝分裂的完成，每个菜和轻轻混合。在37℃，5％CO 2孵育2小时
转移培养基到离心管从细胞培养皿。使用PBS清洗盘子，并删除PBS。然后，在37℃，5％CO 2下，向培养皿中加入1ml 0.1％胰蛋白酶2分钟。此外，将混合物（胰蛋白酶和细胞）转移到离心管中，并与转移到离心管中的培养基混合，之后我们使用PBS洗涤培养皿。此外，在室温下以100rcf离心10分钟
弃去上清液，留下0.5ml培养基，轻轻混合沉淀
重悬在5-7毫升37°C低渗溶液中的沉淀和彻底混合。在37℃水浴中孵育10分钟
在室温下以100rcf离心10分钟。
弃去上清液并留下0.5ml溶液，轻轻混合沉淀
将沉淀重悬于5ml冷固定剂中（逐滴并在滴之间轻弹管子以防止细胞聚集）。
将离心管置于冰上至少20分钟。
在室温下以100rcf离心10分钟
弃去上清液并加入3-5ml冷固定剂
重复步骤9-10三次或直到上清液澄清，颗粒变白
最后离心后，将细胞悬浮在几滴冷固定剂中，得到稍微不透明的悬浮液
滴1-2滴湿和干净的幻灯片（之前，幻灯片必须用1-2滴冷固定剂冲洗。）
在室温下干燥载玻片。
用显微镜观察染色体（Olympus DP71，放大200倍）。
计数大约50个细胞的染色体数目（正常人细胞有23对染色体）。
注意：染色体位于示波器中心，我们定义为"一个单元格"。

代表数据

图1. FaDu细胞系中核型分析的代表性图片（参见Chou等人，2013）

食谱

固定剂
使用
前，将甲醇和冰醋酸（3：1）制成新鲜的并冷冻
生长培养基
RPMI 1640补充：
10％胎牛血清 1％青霉素链霉素（10,000U/ml;10,000μg/ml）

致谢

该协议已经改编自Chou等人。（2013）。

参考文献

Chou，C.H.，Yang，N.K.，Liu，T.Y.，Tai，S.K.，Hsu，D.S.，Chen，Y.W.，Chen，Y.J.，Chang，C.C.，Tzeng，C.H.and Yang，由BMI1-AURKA信号调节的染色体不稳定驱动头颈癌的进展 < em> Cancer Res 73（2）：953-966。