材料和试剂

L。 campestre 植物

设备

一个开放式容器（如 Falcon管）
干燥器或气候室，允许控制温度和相对湿度
许多钢球（在我们的例子中直径为5毫米）
混合机（MM 400/Retsch）包括两个研磨罐（图1）

图1.搅拌机（MM400/Retsch）
一对镊子

软件

Microsoft Excel

程序

成长L。 campestre 植物，直到水果变黄并完全干燥
仔细收获至少60个水果，每个植物，而不手动造成水果开放
将果实放置在开放容器（例如 Falcon管）中，并保持它们在恒定的环境条件（25℃和50％相对湿度）下至少3天以达到一致的水分含量。 >
计数20个水果，并将它们与六个5毫米钢球（图2）一起放入搅拌机的研磨罐中。

图2. L的20个成熟果实。 campestre （左）与六个5-mm钢球（右）放在搅拌磨机的研磨罐中
小心地关闭研磨罐，将其固定在搅拌磨中，并以9hz搅拌5秒
从研磨罐中取出水果，并通过计数完全完整的水果的数量确定开放水果的数量（图3）。

图3.完全完整的水果被计数，开放水果被除去
将完好的水果放回研磨罐中，以9hz再搅拌5秒钟，然后再次计数
重复这两个步骤（搅拌和计数）另外4次（或直到没有完整的水果留下），搅拌时间为10,20,40和80秒（总体导致累积时间为5,10,20,40,80 ，和160秒）。
绘制时间（秒）对开放水果的数量结束，如图4所示的图。

图4.累积搅拌时间对开放水果数量进行绘制
因为在下面的日志转换过程中，您将遇到0数据点的问题，您可以为每个时间点添加1（+1）（以累积时间6,11,21,41,81,161结束）。< br />
然后，将日志₁₀应用到每个时间点，最终得到如图5所示的sigmoid图。

图5.对每个时间点应用日志₁₀会生成Sigmoid图
Sigmoid图可以用logit函数线性化。因此，您将logit应用于开放水果的数量。因为logit没有为0和100％（在我们的例子中是0和20）定义，所以最终只有4个数据点的近似线性关系（图6）。

图6.从开放果实数的logit转换得到的近线性关系
使用线性斜率拟合数据（例如使用Excel'Trendline'函数），得到一个线性方程（图7）。

图7.线性斜率适合数据
现在你想计算开裂的半衰期，这是一半的果实（10个水果）开放的时间点。 50％的logit（在我们的例子中是10个果实）等于0.因此，你必须计算x截距。在我们的例子中，x截距为2.4235/2.0408 = 1.1875
最后，你只需要反转日志转换和添加1（参见步骤10-11）。因此，你计算10 ^1.1875 -1 = 14.3992，这是开裂半衰期，以秒为单位。
对每个植物重复该测量至少两次，并计算平均半衰期和标准偏差

致谢

我们感谢AndreasMühlhausen和Klaus Mummenhoff（德国Osnabrück大学植物系）在我们的水果开裂项目和Thorsten Lenser的合作，他对数据分析的帮助。该协议已经基于先前公开的工作（Morgan等人，1998; Bruce等人，2002; Arnaud等人， > 2010）。我们的工作得到了德意志研究所对G.T.的资助。（TH 417/6-1）。

参考文献

Arnaud，N.，Girin，T.，Sorefan，K.，Fuentes，S.，Wood，T.A.，Lawrenson，T.，Sablowski，R.and Ostergaard，L。 Gibberellins控制拟南芥中的水果图案 > Genes Dev 24（19）：2127-2132。
Bruce，D.，Farrent，J.，Morgan，C。和Child，R。（2002）。 PA精确农业：确定降低荚果破碎所致种子损失所需的油籽油荚强度。 Biosyst Eng 81（2）：179-184。
Lenser，T.和Theißen，G。（2013）。保护水果开裂路径植物J 76（ 4）：545-556。
Morgan，C.，Bruce，D.，Child，R.，Ladbrooke，Z.and Arthur，A。（1998）。从合成B开发的油籽油菜品系之间的荚果粉碎抗性的遗传变异。 58（2）：153-165。