材料和试剂

柠檬酸等离子体（新鲜或冷冻）
Eppendorf管
凝血试剂
1. 凝血酶试剂（Technoclone，目录号：5100005）
2. TriniCLOT PT Excel试剂（Trinity Biotech，目录号：T1105/T1106）
3. DAPTTIN TC（Technoclone，目录号：5035060）
30mM CaCl 2（新鲜制备）
测试剂（例如抗微生物肽LL-37）

设备

程序

预热凝固机（至少在开始实验开关前10分钟）。
准备所有试剂（使用前应具有室温）。
首先将具有钢球的特殊比色杯放在仪器相关机架的测量位置。
这种技术的原理：一旦比色杯放在架子上它开始旋转，并且由于重力，比色皿内的金属球总是保持。当血浆/血液在溶液中时，球保持在其中位置，如果血浆/血液开始凝结，凝块拉动球离开基本位置，传感器检测到扰动并测量凝血时间
为了测量凝血时间，根据计划将试剂添加到比色杯中：
1. 用于全血测定
  1. 加入100微升柠檬血液到凝血计，并按培养
  2. 60秒孵育后（帮助样品37℃）。
  3. 加入100μl的30mM CaCl 2→然后立即按手动开始按钮以测量凝固。
2. 凝血酶原时间（PT）
  1. 向凝血计中加入100μl柠檬酸盐血浆，并按培养
  2. 孵育60秒后。
  3. 加入100μlTriniCLOT PT Excel→然后立即按手动启动按钮测量凝血。
3. 凝血酶时间（TT）
  1. 向凝血计中加入100μl柠檬酸盐血浆，并按培养
  2. 孵育60秒后，加入100μl凝血酶试剂→然后立即按手动启动按钮测量凝血。
4. 活化部分凝血活酶时间（APTT）
  1. 向凝血计中加入100μl柠檬酸盐血浆，并按培养
  2. 孵育60秒后。
  3. 加入100μlDAPTTIN TC。
  4. 改变200秒孵育，加入100μl30mM CaCl 2→然后立即按手动开始按钮以测量凝固。

笔记

该测定非常灵敏，因此精确的样品吸取和每步的时间是至关重要的！
先前测试凝固时间，待测试剂应与等离子体混合血液在Eppendorf管中并孵育所需的时间。
50微升柠檬酸盐血浆是使用的最小体积或最佳100微升
使用1：1体积比的试剂或样品，例如100μl血浆和100μl试剂/CaCl 2。
对于凝血计操作手册，请访问此链接： http://www.merlinmedical.net /fileadmin/media/pdf/anleitungen/MC_10_OPERATION_MANUAL_ENGLISH.pdf 。

致谢

该协议改编自Papareddy等人（2013）。

参考文献

Papareddy，P.，Kalle，M.，Sorensen，O.E.，Malmsten，M.，Morgelin，M。和Schmidtchen，A。（2013）。 TFPI-2衍生肽EDC34可改善革兰氏阴性脓毒症的结果。 PLoS Pathog 9（12）：e1003803。