材料和试剂

水稻样品：糙米或糙米
10％HCl（Sigma-Aldrich，目录号：7647-01-0）
65％HNO 3（Sigma-Aldrich，目录号：7697-37-2）
72％HClO 4（Sigma-Aldrich，目录号：7601-90-3）
6mM HCl（Sigma-Aldrich，目录号：7647-01-0）（用于将SeO 4+还原成SeO 3） > ^{2 -}）
硒标准溶液（Sigma-Aldrich，目录号：7782-49-2）（1,5,10,20,50和100μg/L）
酸混合物：HNO 3 :HClO 4（V/V）= 4：1

设备

消化管（见设计消化管）
40目尼龙筛（直径15cm）
纸袋（8 x 10厘米）
石蜡膜（Parafilm，目录号：PM-996）
容量瓶（25ml）
玻璃塞（匹配25ml容量瓶）
原子荧光光谱仪（AFS）（型号：BRAIC AFS 610A）
电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）（PerkinElmer，型号：ELAN-DRCe）

程序

设计消化管
1. 消化管的长度设计为300mm。管口边缘增厚。
2. 管口的外径和内径分别为28mm和21mm。
3. 消化管口的厚度为3.5mm。消化管的外径为26mm，厚度为2mm。
4. 消化管颈在离管口25mm处。外面管颈直径为18.5mm，长度为15mm。厚度消化管底部为3.5 mm。
  
  图1.消化管的结构
清洁消化管
1. 消化管最初浸泡在加入少量清洁溶剂的流水中。
2. 将管刷放入消解管的底部，擦洗可旋转地向内和向下。漏斗被可旋转地擦洗管刷。加入稀释的清洗溶剂到容量瓶中，然后超声清洗30分钟。
3. 清洗后，消化管，漏斗和容量瓶用去离子水漂洗（>18MΩ）2-3次，然后放入10％HCl中并浸泡多于 24小时。
4. 取出后，消化管和再次用刷子洗涤漏斗并用去离子水冲洗水2-3次。将容量瓶直接漂洗用去离子水。
5. 然后，消化管和容积烧瓶在特殊架子上倒置，直到没有水滴出现 inwall。最后，消化管和容量瓶在烘箱中干燥 60℃。
消解过程
1. 取约15-20g的米样品，并在研钵中研磨成粉末，然后通过40目尼龙筛并放入纸袋中。后研磨一个样品，请打开砂浆，取出尼龙筛，然后用刷子彻底清洗。
2. 约0.5g 称取米粉样品，使消化管倾斜并加入它进入底部。然后加入5ml 4ml HNO 3和1ml的酸混合物 HClO 4缓慢地沿管壁加入，轻轻摇动混合样品和混合酸
3. 密封消化管口与单层石蜡膜。将其放在通风橱中超过24小时。烟罩壁和顶部在消化前用湿布清洗。所有使用的试剂是高纯度的
4. 放置消化管进入消化炉的孔中。所有样品最初在60℃消化30分钟并在100℃继续消化60分钟 C。
5. 然后，向消化管中加入2.5ml混合酸将温度升至150℃。类似地，至少3个空白样品和标准茶材料样品（GSV-4,0.072mg Se/kg sub，GBW07605）同时用测试样品消化用于质量控制，分别。
6. 消化管的位置消化炉在消化过程中不断调整以保持每个管的消化的液体表面在相同的高度。
7. 消化过程结束，直到棕色酸雾消失白色的雾出现在消化管中。然后消化管冷却至100℃，加入2.5ml的6mM HCl以还原SeO 4→SeO 3→SeO 3→H 2 O，/sup>，并在100℃继续加热，直到棕色酸雾消失。如果Se 含量通过电感耦合等离子体质谱法测定（ICP-MS），不需要通过盐酸还原Se。它将需要大约6-8小时来完成整个消化过程样品量。
  
  图2.标准茶材料样品的消化状态
测量Se含量
1. 温度降至室温后，消解管从消化炉的孔中轻轻取出并放入消化管架。摘要转换为容积烧瓶中，用去离子水冲洗消化管3-4 次。也将冲洗溶液加入容量瓶中直到最终体积达到25ml，然后用玻璃紧密覆盖塞子。
2. 将容量瓶底部放在涡旋上并旋转30秒并混合。放在一起2小时以上 Se确定。
3. 硒标准溶液（10mg/L）分别用1％HNO 3缓慢稀释至浓度为1,5,10,20,50和100μg/L。< br />
4. 然后通过确定Se内容原子荧光光谱仪（AFS）或通过ICP-MS。标准曲线的Se含量。 Se的含量也是测试样品决心。
  
  图3.标准茶叶材料样品的含量
5. 由AFS确定Se的参数如下：波长196nm，PMT电压280V，HCl主阴极电流80mA，载气流量300ml/min，取样体积1.0ml，雾化器高度7 mm，取样泵速率100r/min，取样时间18秒; 参数用于通过ICP-MS测定Se如下：功率1,300W，等离子体气体流速15L/min，辅助气体流速0.2L/min，雾化器流速0.89ml/min。反应气体甲烷流速0.6ml/min。

笔记

管口边缘和底部加厚以防止破裂。
消化管颈在离管口25mm处变薄，以增加酸雾的冷凝，并减少混合酸的挥发。
将米样品的量控制在约0.5g内以减少消化时间
将加入到消化管中的混合酸的总量控制在7.5ml以下。消化温度控制在150℃。因此，避免了消化溶液飞溅在管壁上
需要消化炉中的消化管的位置以进行调节以将消化溶液保持在每个管中的相同高度。

致谢

这项工作已发表在Zhang等人（2014）。该工作得到了第43届中国博士后科学基金（编号：20080430588），人才基金（编号：09001107）和河南理工大学研究基金（编号：13560036）的支持。我们感谢中国科学院地理科学与自然资源研究所研究员，使用ICP-MS进行硒含量分析。

参考文献

Zhang，L.，Hu，B. *，Li，W.，Che，R.，Deng，K.，Li，H.，Yu，F.，Ling，H.，Li，Y.and Chu，C （2014）。 OsPT2，一种磷酸盐转运蛋白，参与活性摄取水稻中的亚硒酸盐。 New Phytol 201（4）：1183-1191。（* Co-first authors）
Zhang，L.，Shi，W。和Wang，X。（2006）。高硒和低硒水稻品种之间亚硒酸盐吸收的差异及其机制。植物与土壤 282（1-2）：183-193
Zhang，L.，Shi，W.，Wang，X.and Zhou，X。（2006）。早期生长阶段水稻幼苗硒积累的基因型差异和影响因素的主要因素分析水稻种子中的硒含量。植物营养 29（9）：1601-1618。