材料和试剂

MATa bar1 缺失菌株（可在实验室中设计，或从EUROSCARF等库存库购买）
酵母提取物
蛋白胨
D-葡萄糖
95％乙醇
酵母提取物 - 蛋白胨 - 葡萄糖（YPD）培养基（见Recipes）（或使用菌株所需的其他培养基）
α-因子（α-交配因子乙酸盐）（Sigma-Aldrich，目录号：T6901-5MG）（参见配方）
链霉素（蛋白酶，来自灰色链霉菌）（Sigma-Aldrich，目录号：P6911-5G）（参见Recipes）

设备

30℃恒温摇床（180-200转/分钟）
显微镜
玻璃片
盖舌
离心机
分光光度计
涡流
文化管
培养瓶

程序

在培养管（180rpm，30℃）中培养从YPD板中的一个单菌落接种到YPD中的小的隔夜起始培养物。通常，最终工作文化的1/10 ^th就足够了
从过夜培养物接种到新鲜培养基中以在培养瓶或管中获得OD <600>：0.2（这是具有其工作体积的工作文化）。
生长培养物以获得所需量的细胞，但不高于OD 600：0.8，因为在非常高的密度下，即使bar1 缺失细胞不同步。记住，在同步期间，培养物的密度将增加，因为已经通过G1的细胞将完成循环，直到它们达到下一个循环的G1。
旋下细胞并丢弃培养基（室温下3000转/分钟，3分钟）
用至少10个细胞团块的水洗涤细胞沉淀
旋转细胞并丢弃水（3分钟，3,000rpm转）。
在含有50 ng/mlα因子的新鲜YPD工作体积中重悬细胞
生长细胞。
在60,90,120分钟后，在显微镜下以40x放大检查细胞。在彻底涡旋样品以干扰夹具之前。 G1逮捕的细胞具有典型的梨形状。通常在90和120分钟之间〜100％同步可以观察到
要释放细胞从逮捕，旋下细胞和用水洗它们
重复清洗。
重悬细胞在工作体积的新鲜YPD含50μg/ml链霉蛋白酶。重要的是添加链霉蛋白酶，因为即使剩余少量的α-因子也能抑制释放
加入链霉蛋白酶后，细胞会进入细胞周期。根据您的目标，您可以让他们循环，用不同的代理处理他们，或收集他们在任何所需的时间点。链霉蛋白酶不影响细胞生长。
这个实验很容易重现一旦你可以识别被拘捕的细胞（图1）。如果你的菌株有一个可选择的标记，你可以使用适当的媒介，而不是YPD进行实验

图1.用α-因子处理的酵母细胞（来源：Arkowitz，2009）

食谱

YPD液体
1％酵母提取物
2％蛋白胨
2％D-葡萄糖
α因子
1mg/ml储备溶液，在EtOH中
储存于-20°C
pronase
40 mg/ml无菌蒸馏水中的储备溶液
储存于-20°C

致谢

该协议是由Amberg等人（2005）发表的修改形式。我们在我们的工作中使用了这个协议（Daraba ，2014）。资金支持：Wellcome Trust，070247/Z/03/A。

参考文献

Amberg，D.C.，Burke，D.J。和Strathern，J.N。（2005）。 Methods in Yeast Genetics：A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual，2005 Edition。 ISBN 978-087969728-0。
Arkowitz，R.A。（2009）。酵母中的化学梯度和趋化性。 Cold Spring Harb Perspect Biol em> 1（2）：a001958。
Daraba，A.，Gali，V.K.，Halmai，M.，Haracska，L.and Unk，I.（2014）。 Def1促进聚合酶交换的Pol3的降解发生在DNA损伤诱导的诱变过程中， em> Saccharomyces cerevisiae 。 12（1）：e1001771。
MacKay，V.L.，Welch，S.K.，Insley，M.Y.，Manney，T.R.，Holly，J.，Saari，G.C.and Parker，M.L。（1988）。酿酒酵母 BAR1基因编码与胃蛋白酶同源的输出蛋白。 Proc Natl Acad Sci USA 85（1）：55-59。