材料和试剂

设备

程序

获取 A。 baumannii ATCC 17978储存于-80℃，刮取冷冻储存物的表面，并将其铺在LB琼脂上。
将LB琼脂在37℃培养箱中过夜。
溶解单个菌落的 A。鲍曼不动杆菌3ml LB肉汤中的过夜培养物中，并在37℃，220rpm下培养过夜。
在第1天，将3ml含有替加环素的LB肉汤（MIC），其通过方案"最小抑制浓度使用含有鲍曼不动杆菌的30μl肉汤（步骤1）接种鲍曼不动杆菌的细菌（MIC）测定（Lin等人，2014b）并将培养物在37℃下振荡（220rpm）孵育过夜。
注意：体积30μl和3 ml的选择目的是保持1：100稀释。如果使用其他体积或稀释比，可能导致替加环素耐药诱导时间的变化。
在第3天，将30μl培养物转移到3ml含有8×MIC的替加环素的LB肉汤（步骤2），并将培养物再次在37℃下振荡（220rpm）孵育。如果从步骤1未注意到细菌生长，将替加环素浓度降低至8x MIC的一半，然后重复步骤1.
在第5天，将30μl培养物转移到含有16x MIC的替加环素的LB肉汤中（步骤3），并将培养物再次在37℃下振荡（220rpm）孵育。
在第7天重复该传代（步骤4）。
在第9天，将等份（0.5ml）的培养物与0.5ml 20％甘油混合，并储存在-80℃直至使用。
在获得替加环素抗性菌株后，进行不含替加环素的LB的日常传代30天，以确保替加环素抗性的诱导成功并持久。

食谱

致谢

该方案的开发由国立台湾大学医院Chu-Tung分院资助。

参考文献

Lin，M.F.，Lin，Y.Y.，Yeh，H.W.and Lan，C.Y。（2014a）。 BaeSR双组分系统在调节鲍氏不动杆菌中的作用 adeAB基因及其与替加环素敏感性的相关性。 BMC Microbiol 14：119.
Lin，M.，Lin，Y.and Lan，C.（2014b）。鲍曼不动杆菌的最小抑制浓度（MIC）测定生物协议 4（23）：e1308。