材料和试剂

番茄种子（栽培品种Arka Vikas）
次氯酸钠（Thermo Fisher Scientific，目录号：27096）
琼脂（HIMEDIA，目录号：PCT0901）
蒸馏水
0.8％（w/v）琼脂（参见Recipes）

设备

还可以从蓝色LED（发光二极管，λmax 470nm，Kwality Photonics）获得用于重力分析的蓝光（也可以使用替代光源）。用量子传感器（Skye Instruments，UK）测量光子的光子强度。
使用从International Light Technologies（型号：RPS900W）购买的分光辐射计测量蓝光的光谱
Quickcam Pro 3000或4000（Logitech）或任何其他适用的录制回复
的网络摄像头
发芽纸（本地购买）或吸墨纸或Whatman纸
方形发芽箱（尺寸为10×10×6cm，Laxbro）/或方形平皿
方形培养皿（尺寸12×12×2cm，Genaxy，型号：GEN-PTD-130SQ）
来自Pro'Kit ^？ 1PK-125T（尺寸为12 x1 x 4厘米）的钳子

软件

SigmaPlot 10.0（ http://www.sigmaplot.com/products/sigmaplot/sigmaplot-details.php ）
ImageJ（ http://imagej.nih.gov/ij/）
Timelapse（ http://tnlsoftsolutions.com/timelapsehome.php ）

程序

植物生长条件
1. 番茄（番茄栽培种Arka Vikas）种子（图1A）在20％（v/v）次氯酸钠中表面灭菌约15 min，然后在流动的自来水中洗涤以除去任何痕量次氯酸盐（该步骤可以优选在通风橱中进行）。
2. 将灭菌的种子播种在两层湿滤纸上发芽箱（图1B）。（最好对盒子和纸张进行消毒。）
3. 种子在发芽箱（25±2℃）中发芽3天。
4. 在出现根部（图2）后，等尺寸的幼苗轻轻转移到培养皿中的0.8％（w/v）琼脂上并保持黑暗在25±2℃下2天。
5. 除非另有说明，对于所有实验，从时间开始计数幼苗的年龄出现激进。在所有情况下的平均高度使用的植物幼苗为3.0±0.3cm（图3）。
重力分析/重力分析
1. 检查番茄幼苗的引力反应全方位蓝光（也可以使用白光）。消除任何光向光的影响时间推移成像可以使用红外LED作为光源。图4显示安置照相机和幼木。将幼苗放在水平距离相机镜头20厘米。光源为20cm 以上的苗。
2. 下胚轴中的重力反应是使用2-d-老化的幼苗测量，生长在方形平皿中填充有0.8％（w/v）琼脂（图5A）
3. 在那个时间重力下，将板以90°的角度转动，幼苗水平，并将板排列在架子上（图 5B）。
4. 使用Quickcam Pro 3000 at在幼苗上拍照每10分钟间隔120分钟用于下胚轴向度。数字图5C显示在蓝光暴露120分钟后的下胚轴弯曲。
5. 对于每个实验，使用10个幼苗并且实验重复3至4次。
6. 对于根性向性，播种具有刚出芽胚根的种子在培养皿和板中的0.8％（w/v）琼脂在垂直下方保持黑暗（如上）。 36 h后，根伸长至 2〜2.5 cm，将板旋转90°以使幼苗水平。的图像每10分钟记录6小时，或12小时或24小时（取决于实验）使用Quickcam Pro 3000.每个培养皿含4-6株幼苗，实验重复约4次（图5D）。
光源
在当前实验中，我们使用使用蓝色LED获得的全方位低通量蓝光（λ 470nm）来捕获幼苗相对于重力的运动。该实验也可以在红外光下进行，以消除植物光感受器的任何可能的影响。在完全黑暗下。除非另有说明，使用"低通量蓝光"（3μmolm -2 s -1 ^-1）向照相机提供最小光以捕获图像。 />
时间流逝视频成像和分析
1. 使用连接到计算机的Quickcam-Pro 4000（参见Whippo和Hangarter，2003）捕获时间推移图像。
2. 为了创建时间流逝视频图像（视频1），帧是在特定时间点使用MGI VideoWave4 PC视频提取编辑（美国）或时间流逝成像软件从电影。图片是在重力刺激后或定向后以10分钟间隔捕获板90°。时间流逝帧被融合以创建视频使用上面的软件。
3. 背景照明由使用低通量蓝光LED。它可以由红外LED替代（λmax 940nm）。
4. 电影显示负向引力反应的番茄幼苗下胚轴水平后下胚轴面向。在滞后期（〜20分钟）后，引力向导下胚轴的差异生长导致幼苗弯曲离开从重力矢量。在一个小时内，下胚轴重新定向为垂直生长，并恢复与发病前相同的生长方向重力刺激。
5. 角度测量
  曲率角在从图像中减去零点图像之后计算在定义的时间点获得。所有测量使用 NIH ImageJ软件和e-Ruler r。使用SigmaPlot绘制图 10.0。图6显示了使用ImageJ的角度测量的快照软件
6. 图7显示了两个日龄匍匐幼苗的向地弯曲的时间过程。

代表数据

图1.选择种子用于实验。 B.用20％（v/v）次氯酸钠处理15分钟后的种子用次氯酸钠处理导致种皮变薄，可以看到盘绕的胚状结构，导致种子均匀发芽。

图2.番茄的3天龄的发芽的种子。从种子出现胚根后，将种子转移到0.8％（w/v）琼脂上。

图3.番茄的两日龄绿化幼苗。使用相同高度的幼苗进行分析。

图4.用于分析向性反应的延时记录设置的图形说明。整个设置被封闭在放置在暗室中的木室中。通过连接到照相机的计算机以限定的间隔记录图像。计算机放在木室外，在整个记录期间，计算机屏幕被关闭或用黑布覆盖。

图5。将胚根出芽后的种子在培养皿中的0.8％（w/v）琼脂上生长。 B.两天后，将培养皿旋转90°以进行重力刺激。 C.2小时后下胚轴的阴性引力。 D.根尖向重力的正向引力。图中的白色箭头表示重力场的方向

F 图6.右侧快照中的黄线表示ImageJ软件对下胚轴角度的测量。图片中的白色箭头表示重力场的方向。

图7.两日龄老化的番茄幼苗中下胚轴向弯曲的时间过程。以定义的时间间隔通过时间流逝摄影测量单个下胚轴的曲率角120分钟。数据点表示来自三个独立实验的10个个体幼苗的平均值±S.E。

Viedo 1.番茄幼苗的负向引力的延时视频成像

笔记

幼苗的年龄是实验重现性的重要因素。幼苗应具有均匀的长度以减少误差。高于3.5cm的番茄幼苗表现出较差的下胚轴向性
应仔细监测次氯酸钠的处理，因为次氯酸钠的功效是可变的，取决于所用的批次和公司。较长的次氯酸盐处理或较强的次氯酸盐溶液处理可以杀死种子

食谱

0.8％（w/v）琼脂称重0.8gm琼脂
加入100 ml双蒸水
在烧杯中煮沸2-3分钟
冷却，倒入方形塔板

致谢

非常感谢科学技术委员会和工业研究委员会（CSIR），新德里以SRF形式向Kamal Tyagi提供的资金支持。这项工作得到新德里生物技术部的支持，授予RS和YS。

参考文献

Whippo，C.W。和Hangarter，R.P。（2003）。第二个正向光趋向性来自光催化素和密码色素的协同作用。 Plant Physiol 132（3）：1499-1507。