材料和试剂

设备

程序

收集细胞，洗涤并以约1-2×10 6个细胞/ml重悬于RPMI 1640培养基（无FBS）中。
如果用PTX处理，则将样品分成2份，一份接受100ng/ml PTX，另一份接受另一份PBS。将管在37℃下旋转3-4小时。
如果细胞不用PTX预处理，则细胞在37℃下旋转1小时
然后用测定缓冲液+ 2.5mM丙磺舒洗涤细胞两次
以〜4×10 6个细胞/ml重悬细胞于上样缓冲液（测定缓冲液+丙磺舒+2.28μg/ml Fluo-4 +0.91μg/ml Fura-red） N.B.在这两种情况下，将50μgFluo-4和Fura-red溶解于22μl普流罗尼F-127（20％的DMSO溶液）和22μlDMSO中。
将受保护的管在37℃下旋转30分钟
然后将细胞洗涤一次，并用测定缓冲液+丙磺舒以约5×10 6个细胞/ml重悬。
对于SDF介导的钙流量分析，将450μl细胞等分到FACS管中，并记录FITC/PerCP-Cy5.5水平的基础比率。在1分钟时，用50μl10μg/ml（〜125nM最终）SDF-1刺激细胞，并记录反应另外3分钟。最后，用50μl20μM离子霉素刺激细胞。
注意：SDF-1可以根据需要由其他趋化因子替代。但是，需要确定最佳剂量。

笔记

食谱

致谢

该方案改编自以前公开的报道（Cronshaw等人，2006和Cronshaw等人，2010）。

参考文献

Cronshaw，D.G.，Kouroumalis，A.，Parry，R.，Webb，A.，Brown，Z.and Ward，S.G。（2006）。有证据表明磷脂酶C依赖性，钙依赖性机制是T淋巴细胞定向迁移所必需的响应于CCR4配体CCL17和CCL22。 Leukoc Biol 79（6）：1369-1380。
Cronshaw，D.G.，Nie，Y.，Waite，J。和Zou，Y.R。（2010）。 CXCR4的胞质尾部在G蛋白信号传导和器官形成中的重要作用。 PLoS One 5（11）：e15397。