材料和试剂

成年小鼠（3月龄的C57BL/6雄性小鼠用于该方案中的数据采集，但是可以使用其他遗传背景的雄性或雌性小鼠或不同年龄的雄性小鼠）
食物（正常饮食或高脂肪饮食）和水（自由饮食）
具有4,929PPM CO 2，20.47％O 2和余量N 2的组分的压缩气体混合物

设备

Oxymax开路间接热量计（哥伦布仪器，型号：开路间接热量计）（图1）

图1.开路间接量热器组件
具有由制造商提供的软件的计算机（Columbus Instruments，型号：Oxymax v4.91）

程序

打开Oxymax仪器和计算机，让系统预热2小时;
启动Oxymax v4.91程序;
执行CO 2 校准;
1. 在程序中选择校准，打开气罐并将其设置为5-10 psi;
2. 在"校准"窗口中按CO ₂按钮（图2a）。校准后增益应接近1（图2b）;
执行O ₂校准;
1. 在"校准"窗口（图2a）中按O ₂按钮;
2. 所需的O ₂级别列在第一个提示窗口中（图2d）。使用细调和粗调旋钮（图2c）以将O 2级调节到期望的级别;
3. 在完成O <2>校准后关闭气罐。
图2. CO ₂和O ₂校准

5.设置一个新实验，选择要使用的腔室，输入要测量的小鼠的标识号和重量（图3），每个腔室只允许一只小鼠;

图3.输入鼠标信息

6.设置测量时间表，包括间隔数，笼式沉降时间，笼式测量，参考沉降，参考测量和参考方法（图4）。

图4.测量的安排计划"0"表示实验将无限期运行，直到用户停止。参考方法的"8"意味着实验将在每8个受试者之后测量参考空气。

7.将小鼠放入相应的量热室中，使用标准笼（图5）;

图5.小鼠测试室（标准笼）

8.用足够的食物和水给笼子充满24小时。确保食物和水随时可用（图5）;
9.使用软件检查系统是否有任何泄漏，如下所示：
打开工具→从 Oxymax实用程序选择 → 确保阀门打开和 N2 和参考空气/校准阀门关闭→打开样品泵在测试室中断开干燥器输入管道→将手指放在其上，如果没有系统泄漏，则系统样品泵前部的球将下降到0;如果没有，检查所有空气配件，以确保气密连接并再次测试（图6）。

图6.气体泄漏检查

10.运行实验24小时，并导出Excel文件格式的数据，其中包括如下所列的数据：
1. ml/kg/h;
  输入（VO 2输出），ml/kg/h;
2. （VCO 2输入） - （VCO 2）输入，ml/kg/h;
3. 呼吸交换比（RER）= VCO 2 /VO <2>比率;
4. 能量消耗（热产生）=热值（Cv）×VO 2 =（3.815 + 1.232×RER）×VO 2，cal/h;
11.关闭实验并将小鼠送回他们的笼子;
12.关闭系统，用水和适当的消毒剂清洁量热计

代表数据

图7.在光照和黑暗循环期间3个月大的C57BL6小鼠的O 2消耗，CO 2生产，RER和能量消耗。每日节律在12小时光照（开放条）和12小时 - 黑暗循环（黑色条）（左）下记录代谢参数。在光照和黑暗循环期间（右），数据表示为平均值±SE（n/n = 5）。 *， p 0.05; **， p 通过Student's t 测试（亮和暗循环之间的平均值的比较）分析。

笔记

开始在代谢室中适应1天后收集小鼠的数据;
在恒定的环境温度（22℃）和12小时光（6 am-6 pm），12小时黑暗周期（6 pm-6 am）下安装Oxymax系统;
VO 2和VCO 2在暗循环中分别增加了约15％和28％;
RER从0.90（光周期）增加到0.99（暗周期），表明在黑暗周期中，大量营养素源从脂肪+碳水化合物的混合物转移到主要碳水化合物（VCO 2 脂肪酸氧化的比率为0.7，碳水化合物氧化为1.0）;
能量消耗在黑暗中比光周期高20％，小鼠的最活跃期在下午7点至12点之间;
间接热量学是一种通用的系统，用于研究不同条件下代谢率的变化。例如：
1. 比较野生型的代谢动态平衡和能量消耗和喂以正常饮食或高脂肪饮食的突变小鼠;
2. 调查老年代谢率的变化，这是改善健康状况的潜在指标
3. 也可以并入Oxymax开路间接热量计与其他室系统，如活动，体重，喂食，饮用，食物存取控制，跑轮，尿液收集，睡眠检测，身体核心温度和心率完成不同实验设计。

参考文献

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