材料和试剂

1 ml注射器
30号针
小外科套件（剪刀，环镊子，针驱动器/支架）
使用生物工程化肠（移植成熟，然后允许6-8周）移植的8-16周龄的免疫缺陷型NOD-SCID IL-2Rγ裸细胞（NSG）小鼠，
荧光素标记的番茄凝集素（番茄凝集素）（Vector Laboratories，目录号：FL-1171）
磷酸盐缓冲盐水（PBS）
异丙醇
4％PBS中的多聚甲醛（PFA）
水基光学透明溶液（Ke ，，2014）

设备

解剖显微镜（Leica Microsystems）

程序

将番茄 - 凝集素溶解在PBS中，最终浓度为2mg/ml
用异丙醇清洁移植的NSG小鼠尾部的近端部分
绘制200微升的番茄凝集素溶液到1毫升注射器配备30号注射针
使用适当的约束，握住鼠标的尾部，使侧面尾静脉可见，然后注入200微升番茄凝集素溶液的静脉。将鼠标放在一个干净，温暖的地方进行恢复。适当的尾静脉注射的方法在其他地方描述（Machholz等人，2012）。
注射后15至30分钟，使用CO 2 2暴露处死小鼠，并通过颈脱位确认安乐死。所有动物安乐死必须根据IACUC指南和机构内批准的动物方案进行
此时收集适当的组织用于组织学（移植组织加肠用于比较），并将组织置于冰冷的PBS中。在4℃下将收集的组织在4％PFA中固定过夜
在PBS中冲洗固定的组织5次，然后根据以下方案在光学澄清溶液中处理（Ke ，2013）。
在共聚焦显微镜下图像清除组织以显现反映功能性脉管系统的番茄凝集素（激发494nm;发射521nm）（图1）。

代表数据

图1。在免疫受损小鼠的肾囊下，源自人多能干细胞并在体内移植的人类小肠内的功能性脉管系统/strong> a。在荧光素标记的番茄凝集素灌注（黑色箭头：血管）之后，生物工程化的肠在肾脏中的整个安装。 b。在整个安装的共聚焦成像显示功能荧光血管内植入（比例尺50微米）。

笔记

新鲜收集的组织可以在装有汞灯和FITC过滤器的荧光立体镜下直接成像
固定的组织可以在清洁剂中保持几天，直到在室温下成像
该协议允许在移植的组织和/或肠组织内的功能性脉管系统的成像
该方案改编自之前使用移植到鼠宿主中的"人肝芽"并使用1％四甲基罗丹明，FITC和德克萨斯红结合的葡聚糖通过尾静脉注射进行的工作（Takebe等人， >，2014）。使用可与免疫荧光染色组合的多种荧光标记产物，可以进行活体成像。

致谢

该项目部分由美国国立卫生研究院（NIH）授予NIH-R01DK083325（MAH），NIH P30 DK078392（Digestive Health Center，Cincinnati Children's Hospital Medical Center）和NIH UL1RR026314（临床和转化科学奖（CTSA），University of Cincinnati）。

参考文献

Ke，MT，Fujimoto，S.and Imai，T。（2013）。 SeeDB：一个简单的和形态保持光学清除剂的神经元电路重建。 Nat Neurosci 16（8）：1154-1161。
Ke，M.，Fujimoto，S.and Imai，T。（2014）。使用seeDB进行光学清除生物协议 4（3）：e1042 。
Machholz，E.，Mulder，G.，Ruiz，C.，Corning，B.F.and Pritchett-Corning，K.R。（2012）。小鼠和大鼠的手动约束和常见化合物给药途径。 Exp （67）。
Takebe，T.，Zhang，R.R.，Koike，H.，Kimura，M.，Yoshizawa，E.，Enomura，M.，Koike，N.，Sekine，K.and Taniguchi，从iPSC衍生的器官芽移植生成血管化和功能性人类肝脏。 Nat Protoc 9（2）：396-409。
Watson，CL，Mahe，MM，Munera，J.，Howell，JC，Sundaram，N.，Poling，HM，Schweitzer，JI，Vallance，JE，Mayhew，CN，Sun，Y.，Grabowski，G.，Finkbeiner， SR，Spence，JR，Shroyer，NF，Wells，JM和Helmrath，MA（2014）。使用多能干细胞的人体小肠的体内模型。/a> Nat Med 20（11）：1310-1314。